Трансгенные черви обычно используются в<em> С. Элеганс</em> Исследования. Описывается простой, но эффективный, протокол ввести трансгены в червей использующих biolistic бомбардировки с ДНК-частиц, покрытых золотом. Усилия, затраченные и результаты бомбардировки выгодно микроинъекции для создания трансгенных животных.
Число лабораторий, использующих бесплатный С. нематода жизни Элеганс быстро растет. Популярность этой биологической модели объясняется быстрое время генерации и короткий срок службы, легкий и недорогой технического обслуживания, полностью секвенированы генома, и массив RNAi ресурсов и мутантных животных. Кроме того, анализ C. Элеганс генома показало большое сходство между червями и высших позвоночных животных, что позволяет предположить, что исследования в червей могло бы стать важным дополнением к исследований, проведенных в целом мышей и культуре клеток. Мощная и важная часть червя исследования заключается в возможности использования трансгенных животных для изучения локализации генов и функции. Трансгенные животные могут быть созданы либо с помощью микроинъекции червь зародышевой линии или через использование biolistic бомбардировки. Бомбардировка является новой техникой и менее знакомые число лабораторий. Здесь мы опишем простой протокол для создания трансгенных червей biolistic бомбардировки частицами золота использованием Bio-Rad PDS-1000 системе. По сравнению с ДНК микроинъекции в гермафродита зародышевой линии, этот протокол обладает тем преимуществом, что не требует специальных навыков от оператора в отношении выявления червя анатомии или выполнение микроинъекции. Далее несколько трансгенных линий чаще всего получаются из одного бомбардировки. Кроме того, в отличие от микроинъекции, biolistic бомбардировки производит трансгенных животных с обоими внехромосомными массивы и интегрированных трансгены. Возможность получения интегрированной трансгенных линий может избежать использования мутагенных протоколов для интеграции чужеродной ДНК. В заключение biolistic бомбардировка может быть привлекательным методом для создания трансгенных животных, особенно для исследователей, не заинтересованы в инвестировании времени и усилий, необходимых, чтобы стать опытным специалистом в микроинъекции.
Biolistic бомбардировки простой метод введения чужеродной ДНК в многих организмов, в том числе С. Элеганс 1,5,6,7,16. Он опирается на золоте частиц, образующих комплекс с ДНК в присутствии CaCl 2. Катионные полиамины, такие, как спермидина, защищают ДНК от деградации нуклеазой в ест…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана семян средств из Университета Питтсбурга и грант NIH AG028977 для ALF
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Gold particles | Inbio gold | BD021 | 1micron | |
Midiprep kit | Qiagen | 12143 | ||
Spermidine | Sigma | S4139 | ||
Protamine | Sigma | P4505 | ||
Macrocarriers | Biorad | 165-2335 | ||
PDS-1000/He Hepta System | Biorad | 165-2257 | ||
Rupture disk | Biorad | 165-2330 | ||
Nystatin | Sigma | N1638 | ||
Streptomycin | MP | 100556 |