我们已经开发出一种简单,重复性的协议来访问气孔反应活的细菌。这种方法最大限度地减少以前相比,使用表皮换肤叶伤人及操纵报告。
气孔在植物表皮负责植物室内和环境之间的气体交换的自然开口。他们是由一对保卫细胞,它能够关闭一些外部因素,包括光照强度,二氧化碳的浓度,和相对湿度(RH)的气孔孔径形成。气孔孔径也病原体进入叶子,为疾病的发生发展的关键的一步的主要途径。最近的研究,推出了封闭的孔隙,能有效地减少在拟南芥中的细菌性疾病的发展;植物先天免疫系统的组成部分。在此之前,我们已经使用了表皮剥落评估气孔反应的活细菌(Melotto等人,2006年);然而维持有利的环境条件对植物表皮的果皮和细菌细胞,已具有挑战性。叶表皮,可以保持活着,健康与MES缓冲液(氯化钾10毫米,25毫米的MES KOH,pH值6.15)保卫细胞的电生理实验。然而,这个缓冲区是不适合获得菌悬液。另一方面,细菌细胞可以保持水是不妥当的长期维持表皮换肤活着。当对水的表皮剥离彩车,在4个小时,暴露在空气干燥的果皮细胞限制时间进行实验。保卫细胞中的一个特定的刺激效果评估的一个理想的方法应该气孔生理和尽可能多的植物自然环境的干扰极小。因此,我们开发出一种新的方法来评估气孔反应活叶伤人及操纵大大降低,旨在提供一个容易复制和可靠的气孔检测细菌。该协议是基于完整的叶与碘化丙啶(PI)染色叶菌悬液的潜伏期,和叶下激光扫描共聚焦显微镜观察染色。最后,此方法允许在同一时间延长期间使用的条件下,紧密地模仿自然条件下,植物病原体攻击,活叶样品的观察。
我们已经提出了直线前进的程序,以衡量完整的叶片气孔反应不同的治疗方法易于评估的组织气孔。
虽然我们已经介绍了使用的模型系统拟南芥 / 假单胞菌丁香 ,完整的叶片气孔法可以与任何植物细菌组合潜在的执行。该协议可以很容易地进行修改,以适应其他植物和细菌病原体的生长要求。总体原则和程序保持不变。此外,这种方法可能有利于研究人员希望研究保卫细胞,不仅要活的微生物的功能输出,但也给其他刺激和化学药剂的条件下,保持叶片的自然环境。
全叶可由于其厚度不均匀地形的形象很难。删除中旬叶静脉,所以它平放在幻灯片上,使用共聚焦显微镜,可以缓解这个问题。然而,其他类型的荧光显微镜可用于叶面获得高分辨率的图像。
The authors have nothing to disclose.
这项研究得到了从美国国立卫生研究所的资助,并在美国德州阿灵顿大学设立基金的MM。