我们将演示前的小分子RNA的设置和分析QPCR 96孔阵列以及使用机器人手用Thermo Scientific的矩阵多道移液器。
实时定量PCR(QPCR)已成为一个准确和有价值的工具,在分析基因表达水平。它的诸多优点之一,是一个较低的检测限相比,基因表达分析等方法,同时使用,每个检测数额较小的输入。自动定量PCR安装更大的可重复性,从而改善了这一领域。它的方便和快速设置允许用于高通量实验,使许多不同的基因分析,同时在每个实验。这连同内部板控制的方法,也降低了其他技术的共同实验变量。我们最近开发的一个前小分子RNA分析的定量PCR检测(前- miRNA的),使用186个引物对。小分子RNA已成为一类新的小,非编码RNA的调节能力,在许多基因的转录后水平的目标。作为一个主要的miRNA(PRI – miRNA)的成绩单,然后到前体miRNA(预miRNA)的切割,这些小分子RNA是由RNA聚合酶Ⅱ转录。预miRNA是出口到细胞质中Dicer酶切割产生成熟的miRNA发夹环。在miRNA水平的提高,可以观察到的前体和成熟的miRNA的水平都和这两种形式分析是有用的。有几种市售成熟的miRNA的检测,但其成本高,可能会阻止从这个分析技术的研究人员。在这里,我们讨论了一个具有成本效益,可靠的分析前的miRNA,基于SYBR的qPCR的方法。 miRNA的前水平的变化往往反映了成熟miRNA的变化和成熟的miRNA的表达可以是一个有用的指标。然而,同时分析前的miRNA和成熟的miRNA可能是最佳的,因为他们可以作出贡献的非冗余信息,并提供处理成小分子RNA的见解。此外,这里描述的技术可以扩展,包括具体途径或病原体的其他库集的分析。
QPCR是一个高度敏感的检测可以用来比较样本之间的基因表达水平,在一项研究中,以及在病毒的情况下,以确定阳性。使用的qPCR阵列的好处是每个样品许多引物(在我们的例子中,186对引物),在很短的时间内运行的能力。使用特餐自由EVO,设置可以进一步减少实验所需的时间,和机器人的准确性和一致性,如移液机器人,可以减少和消除移液错误。在这里,我们将演示如何使用特餐自由埃沃?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由美国国立卫生研究院拨款DE018304,R01DE018281支持。 KT公司是由T32 – 34 GM07092授予教堂山北卡罗来纳大学霍华德休斯医学研究所(HHMI)的通过MED到毕业倡议的支持。 PC支持的T32 CA009156。