Summary
यह लेख कैसे काटना और माउस में अलग रेटिना तैयारी से रिकॉर्ड की एक विवरण प्रदान करता है. विशेष रूप में, हम वर्णन कैसे एक fluorescently लेबल नाड़ीग्रन्थि सेल की आबादी से प्रकाश प्रतिक्रियाओं को रिकॉर्ड करने के लिए और बाद में पहचान और उसके आकारिकी का विश्लेषण.
Abstract
हड्डीवाला दृष्टि में पहला कदम जगह ले जब प्रकाश 1 रेटिना के रॉड और कोन photoreceptors को उत्तेजित करता है. यह जानकारी तो क्या और पर बंद रास्ते के रूप में जाना जाता है में अलग है. photoreceptors संकेत द्विध्रुवी कोशिकाओं को प्रकाश जानकारी (BCS), जो (BCS) प्रकाश की तीव्रता में बढ़ जाती है या कम हो जाती है (BCS के बाहर) के जवाब में बिगाड़ना. प्रकाश सूचना के इस अलगाव रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (RGCs) है, जो या तो भीतर plexiform (आईपीएल) परत है, जहां वे ऑफ BCS से प्रत्यक्ष उत्तेजक इनपुट प्राप्त ऑफ sublamina में stratifying dendrites के स्तर पर बनाए रखा है, या में stratifying आईपीएल में sublamina, जहां वे BCS में से प्रत्यक्ष उत्तेजक इनपुट प्राप्त है. रोशनी में (और रास्ते के बाहर) में बढ़ जाती है या कम हो जाती है के बारे में जानकारी के इस अलगाव संरक्षित है और समानांतर में मस्तिष्क को संकेत है.
RGCs रेटिना के उत्पादन की कोशिकाओं रहे हैं, और इस प्रकार एक महत्वपूर्ण सेल करने के क्रम में अध्ययन करने के लिए समझने के लिए कैसे प्रकाश जानकारी मस्तिष्क में दृश्य नाभिक के लिए संकेत है. हाल के दशकों में माउस आनुवंशिकी के क्षेत्र में अग्रिम फ्लोरोसेंट संवाददाता माउस लाइनों जहां विशिष्ट RGC आबादी एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ लेबल रहे हैं RGC 2 3 4 उपप्रकारों और विशिष्ट electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए लक्ष्यीकरण की पहचान के लिए अनुमति देने की एक किस्म में हुई है. यहाँ, हम एक अक्षुण्ण, अलग रेटिना तैयारी में fluorescently लेबल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं से प्रकाश प्रतिक्रियाओं रिकॉर्डिंग के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं. यह पृथक रेटिना तैयारी RGCs जहां वृक्ष के समान कुंज बरकरार है और पूरे RGC वृक्ष के समान कुंज भर में जानकारी संरक्षित कर रहे हैं से रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है. इस विधि नाड़ीग्रन्थि सेल subtypes के एक किस्म में लागू होता है और एकल कोशिका शारीरिक तकनीक की एक विस्तृत विविधता के लिए उत्तरदायी है.
Protocol
पशु का प्रयोग करें वक्तव्य: पशु के लिए प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड में वर्णित दिशा निर्देशों के साथ अनुसार में परवाह थे, मिनेसोटा संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति के विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल का उपयोग कर.
1) समाधान की तैयारी
- Electrophysiological रिकॉर्डिंग प्रदर्शन से पहले, intracellular, कोशिकी, और एंजाइम समाधान करने के लिए तैयार रहने की जरूरत है.
- कोशिकी समाधान: मिश्रण पाउडर 'एम्स मध्यम के एक (8.8g) 1 एच 2 हे मैं और सोडियम बिकारबोनिट का 1.9 छ (23 मिमी) के साथ (सिग्मा) बोतल . सभी बिंदुओं पर कोशिकी समाधान 95% 2 हे / 5% सीओ 2 गैस मिश्रण के साथ संतृप्त है . रेटिना भंडारण के लिए एक बीकर के लिए 200 एमएल स्थानांतरण. प्लेस गुरुत्वाकर्षण छिड़काव के लिए छिड़काव प्रणाली कंटेनर में शेष समाधान एक बार रेटिना मुहिम शुरू की है.
- Intracellular समाधान: Intracellular समाधान पहले किया गया है बनाया जाना चाहिए और फिर aliquoted 500-1000 μL aliquots में -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत 125 कश्मीर gluconate, EGTA 2 2 CaCl, 2 2 MgCl, 10, 10 HEPES, 2 ना 2 एटीपी, 0.5 मिमी NaGTP: intracellular समाधान की जरूरत प्रयोग पर निर्भर करता है, वर्तमान दबाना यहाँ दिखाया रिकॉर्डिंग (मिमी में) का उपयोग हम के लिए बदलता है 5 KOH के साथ 7.2 पीएच. 10 Alexafluor-594 hydrazide सुक्ष्ममापी (Invitrogen) के रूप में एक फ्लोरोसेंट ट्रेसर के प्रयोग, और neurobiotin (0.3%) के दौरान dendrites कल्पना जोड़ा जा सकता है है भी सेल शरीर रचना की रिकॉर्डिंग के बाद के विश्लेषण के लिए शामिल किया जा सकता है. जब रिकॉर्ड करने के लिए तैयार, intracellular समाधान पिघलना.
- एनजाइम समाधान: कोशिकी समाधान के 4.150 एमएल में 83 मिलीग्राम hyaluronidase (वर्दिग्टन रसायन) के साथ 10000 इकाइयों Collagenase (वर्दिग्टन रसायन) का मिश्रण. 50 μL aliquots में -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर Aliquots कई हफ्तों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. जब करने के लिए रेटिना का इलाज करने के लिए तैयार, bubbled कोशिकी समाधान के 500 μL में विभाज्य पतला.
- फास्फेट समाधान (पीबीएस) buffered: एच 2 हे की 800 एमएल में NaCl के 8 ग्राम, 0.2 KCl जी, ना 2 4 HPO के 1.4 जी और 2 के.एच. के 0.24 छ 4 पीओ जोड़ने. NaOH साथ पीएच 7.4 लाओ. एल 1 मात्रा समायोजित करें
- 0.2 एम फास्फेट बफर: एच 2 हे की 800 मिलीलीटर में ना दो चार HPO के 21.8 ग्राम और नाह 4 पीओ 2 के 6.4 ग्राम जोड़ें. मात्रा 1 एल लाओ
- 4% Paraformaldehyde समाधान: हीट 50ml 60 एच 2 हे डिग्री सेल्सियस 4g paraformaldehyde जोड़ें, कई मिनट के लिए हलचल. 1M NaOH की कुछ बूँदें जोड़ें (5 बूँदें) के बारे में रखने के लिए, उद्दीपक, जब तक समाधान स्पष्ट है. 50 मिलीलीटर बीकर में 0.2 एम फॉस्फेट बफर जोड़ें. पीएच स्ट्रिप्स (~ 7.4) का उपयोग कर पीएच की जाँच करें. फ़िल्टर और शांत.
- अवरुद्ध समाधान (10% बकरी सीरम, 0.5% TritonX100): पीबीएस की 1.8 मिलीलीटर में बकरी सीरम और 10 μL Triton एक्स 100 के 0.2 मिलीलीटर जोड़ने. TritonX-100 ऊतक permeabilise कार्य करता है.
- पीबीएस के 1.9 मिलीलीटर में बकरी सीरम की 0.1 मिलीलीटर, 10 μL ट्राइटन X-100 और 594 के 4 streptavidin μL जोड़ने streptavidin समाधान (5% बकरी सीरम, 0.5% TritonX100, 1:500 streptavidin 594):.
2) माउस से रेटिना के अलगाव
विच्छेदन उपकरणों की जरूरत है: 1 # 2 संदंश, 2 # 5 संदंश, ophthalmologic कैंची
- माउस अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार इस मामले में, euthanize धीरे आँख के पीछे एक angled # 2 संदंश डालने और बाहर नेत्रगोलक उठाने 2 asphyxiation और पता लगाना नेत्रगोलक सीओ.
- नेत्रगोलक कोशिकी समाधान के साथ एक 35 मिमी पेट्री डिश में रखें. ऑप्टिक तंत्रिका और किसी भी संलग्न extraocular मांसपेशियों या संयोजी ऊतक ophthalmologic कैंची का उपयोग कट. दूर एक ophthalmologic कैंची के साथ कॉर्निया कट और बाहर # 5 संदंश का उपयोग लेंस खींच. # 5 संदंश की एक जोड़ी का उपयोग श्वेतपटल फाड़ो और संदंश का उपयोग करने के लिए ऑप्टिक तंत्रिका जहां रेटिना और श्वेतपटल ऑप्टिक डिस्क पर मिलने तोड़. धीरे eyecup से दूर रेटिना छील. सुझाव: दोनों retinas पर पहले अगले कदम के लिए जाने के लिए समय कम से कम हर कदम करो.
- संदंश का प्रयोग करें रेटिना के लिए संलग्न शीशे को हटाने. यह "हथियाने" संदंश के साथ रेटिना ऊपर पारदर्शी शीशे के द्वारा किया जा सकता है. शीशे, अगर सफलतापूर्वक हटाया, एक स्पष्ट, संदंश पर पतला पदार्थ के रूप में दिखाई जानी चाहिए. युक्ति: शीशे के आधा निम्नलिखित हटाने में retinas टुकड़ा करने की क्रिया उपयोगी ऊतक की राशि को अधिकतम है और आसान कक्ष में बढ़ते कर देगा.
- न्यूनतम परिवेश प्रकाश के साथ एक अंधेरे वातावरण में कमरे के तापमान पर oxygenated कोशिकी समाधान में retinas रखें जब तक वे पचा बनने के लिए तैयार हैं. Retinas ~ 6 घंटे के लिए इस रास्ते में संग्रहीत किया जा सकता है.
एंजाइम मिश्रण के साथ) 3 रेटिना के उपचार और रिकार्डिंग कक्ष में बढ़ते
- 500 μL कोशिकी, एक 35 मिमी पेट्री डिश में जगह समाधान समाधान में collagenase / hyaluronidase की एक विभाज्य पतला और रेटिना हस्तांतरण.
- रेटिना - होते रखेंआईएनजी पेट्री डिश, कोमल आंदोलन के साथ 15 मिनट के लिए एक 95% / 5% सीओ 2 पर्यावरण O2 में शामिल किया और अंधेरे में . यह कदम किसी भी शेष शीशे पचाने में एड्स और नाड़ीग्रन्थि सेल परत करने के लिए आसान पहुँच के लिए अनुमति देता है. सुझाव: कम शीशे के साथ या प्रतिकूल प्रभाव मनाया जाता है अगर छोटे जानवरों से retinas के लिए समय ~ 5 मिनट के लिए छोटा हो सकता है.
- एंजाइम युक्त माध्यम से रेटिना निकालें और कोशिकी समाधान में बड़े पैमाने पर धो
- कक्ष फोटोरिसेप्टर परत के साथ नीचे का सामना करना पड़ 6 रिकॉर्डिंग में रेटिना स्थानांतरण. दूर या तो एक विंदुक या ऊतक के साथ द्रव शेष बाती और रेटिना के पक्ष रोल ऊतक केवल रेटिना के किनारे, विशेष रूप से नाड़ीग्रन्थि सेल परत के साथ संपर्क से बचने को छूने के लिए सावधान किया जा रहा समतल. नायलॉन जाल के साथ रेटिना पर एक प्लैटिनम की अंगूठी करने के लिए ऊतक लंगर और तुरंत कोशिकी समाधान के साथ चैम्बर भरने रखें.
- खुर्दबीन मंच पर रिकॉर्डिंग कक्ष पर्वत, गुरुत्वाकर्षण छिड़काव और वैक्यूम चूषण ट्यूब देते हैं और जमीन तार देते हैं.
EGFP व्यक्त नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं का स्थानीयकरण 4) और प्रकाश उत्तेजना
- 1 एमएल / मिनट या तेज दर पर बाह्य समाधान के साथ गंभीरता से रेटिना Perfuse. युक्ति: यदि छिड़काव दर भी धीमी है, ऊतक पर्याप्त oxygenated और synaptic संकेत बाधित हो सकता है नहीं हो जाएगा.
- Intracellular समाधान के साथ एक रिकॉर्डिंग विंदुक भरें और विंदुक धारक में सम्मिलित. युक्ति: pipettes रेंज में 3 से 5MΩ के resistances के साथ सबसे अच्छा परिणाम दे.
- अवरक्त अंतर रिकॉर्डिंग विंदुक स्थानीयकरण कम बढ़ाई (10X उद्देश्य, 0.3 एनए) में हस्तक्षेप विपरीत (डीआईसी) प्रकाशिकी के तहत रेटिना कल्पना. इन्फ्रारेड प्रकाश रेटिना प्रकाश दिखाई करने के लिए जोखिम को कम करने और कम से कम प्रकाश अनुकूलन के लिए प्रयोग किया जाता है. उच्च आवर्धन (40x उद्देश्य, 0.8 एनए) के लिए ले जाएँ और ऊतक ऊपर सिर्फ देखने में इलेक्ट्रोड लाने.
- उच्च आवर्धन (40x उद्देश्य), epifluorescence (EGFP के लिए 480 एनएम) के साथ रेटिना रोशन और एक फ्लोरोसेंट नाड़ीग्रन्थि सेल और कंप्यूटर मॉनीटर पर निशान टेप (चित्र 1 ए) का उपयोग कर का चयन करें.
- डीआईसी और अवरक्त रोशनी के तहत, लक्षित नाड़ीग्रन्थि सेल (चित्रा 1 ए) के पास रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड की स्थिति. साफ़ क्षेत्र में तुरंत रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड एक 12cc प्लास्टिक सिरिंज विंदुक धारक को polyethylene टयूबिंग के साथ जुड़ा के माध्यम से कोमल सकारात्मक दबाव लागू करने के द्वारा सेल कवर. प्रवर्धक पर, किसी भी वोल्टेज ऑफसेट शून्य. प्लेस इलेक्ट्रोड चयनित नाड़ीग्रन्थि सेल पर जब तक एक हिलकोरे कोशिका की सतह पर दिखाई देता है.
- वोल्टेज क्लैंप मोड में प्रवर्धक के साथ, एक परीक्षण पल्स लागू करते हैं और विंदुक के माध्यम से वर्तमान गुजर की निगरानी. नकारात्मक इलेक्ट्रोड और सेल के बीच मुहर बनाने दबाव लागू करें. नकारात्मक दबाव रिलीज जब सेल मुहर और पकड़े वर्तमान कोशिका झिल्ली और विंदुक के बीच एक GΩ बिजली मुहर का संकेत है जब तक इंतजार करने के लिए शुरू होता है. नकारात्मक दबाव के कोमल दालों लागू करें जब तक capacitive यात्रियों दिखाई देते हैं और फिर दबाव के किसी भी आवेदन जारी है. युक्ति: यदि का उपयोग प्रतिरोध (श्रृंखला) उच्च (> 30MΩ) है, यह अक्सर अतिरिक्त, बहुत नकारात्मक दबाव के कोमल, दालों द्वारा ameliorated जा सकता है.
- एक बार एक स्थिर सील तक पहुँच गया है नकारात्मक दबाव के एक पल्स लागू. पूरे सेल मोड के बाद प्राप्त की है, सेल अंधेरे से 5 मिनट के लिए अनुकूलन के लिए अनुमति देते हैं. रिकार्ड, वर्तमान दबाना मोड, पूरा क्षेत्र, सफेद प्रकाश उत्तेजना (चित्रा 1 बी) के जवाब में.
- रिकॉर्डिंग के बाद, Alexafluor 594 dendrites के लिए दूर तक फैला हुआ होगा. ट्रेसर epifluorescence के तहत कल्पना और 594 एनएम किया जा सकता है निर्धारित करने के लिए कि क्या एक नाड़ीग्रन्थि सेल पर, परोक्ष, या epifluorescence और डीआईसी अवरक्त 5 प्रकाशिकी के बीच स्विचन द्वारा द्विपक्षीय स्तरीकृत.
- यदि neurobiotin विंदुक और रेटिना immunohistochemistry के लिए संसाधित किया जा रहा है में शामिल है, तो विंदुक धीरे झिल्ली के न्यूनतम विघटन प्रदान मुकर चाहिए.
5) दर्ज नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के शरीर रचना विज्ञान के विश्लेषण
Neurobiotin साथ भरना अधिक विस्तृत नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के morphological रिकॉर्डिंग निम्नलिखित विश्लेषण के लिए अनुमति देता है. युक्ति: यदि एक रिकॉर्ड नाड़ीग्रन्थि सेल और विस्तृत आकारिकी के बीच विशिष्ट सहसंबंध वांछित है, यह सबसे अच्छा रिकॉर्ड और तैयारी के प्रति केवल एक RGC भरने कर सकते हैं.
- यदि neurobiotin intracellular समाधान में शामिल किया गया था तब paraformaldehyde समाधान में रेटिना जगह और 4 में रात भर ठीक डिग्री सेल्सियस
- पीबीएस में कुल्ला, कम से कम 2 घंटे, 6 कम से कम परिवर्तन. एक अवरुद्ध समाधान युक्त थाली करने के लिए रेटिना स्थानांतरण. 2 घंटे के समाधान के लिए अवरुद्ध, एक प्रकार के बरतन पर कमरे के तापमान में छोड़ दें.
- Streptavidin समाधान के साथ अवरुद्ध समाधान बदलें. 4 में 2 दिन ° सी हिलनेवाला पर सेते हैं. पीबीएस में रेटिना, 6 rinses, 20 मिनट प्रत्येक कुल्ला.
- Vectashield के साथ एक गिलास स्लाइड में रेटिना माउंट.रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के साथ रखा जाना चाहिए ऊपर. Confocal माइक्रोस्कोपी (चित्रा 1C) निष्पादित करें.
प्रतिनिधि परिणाम
यदि रेटिना स्वस्थ है और विच्छेदन सफल रहा था, अलग - अलग नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं डीआईसी के तहत दिखाई उच्च आवर्धन (चित्रा 1 ए) पर होना चाहिए. अस्वस्थ retinas बड़े, दानेदार नाभिक है और खारिज किया जाना चाहिए. यदि दिया नाड़ीग्रन्थि सेल की synaptic प्रतिक्रिया बरकरार है, तो सेल प्रकाश शुरुआत में जवाब या कार्रवाई क्षमता के साथ ऑफसेट चाहिए और एक आंतरिक सहज नाड़ीग्रन्थि सेल (चित्रा 1 बी), एक निरंतर विध्रुवण के मामले में.
चित्रा 1. स्थानीयकरण, रिकॉर्डिंग, और fluorescently लेबल रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल के धुंधला हो जाना. (ए) GFP सकारात्मक RGC 40x बढ़ाई (बाएं पैनल) और डीआईसी रोशनी (सही पैनल) के तहत epifluorescent रोशनी के तहत कल्पना. (बी) एक M2 आंतरिक रूप से सहज रेटिना नाड़ीग्रन्थि पूरे सेल fluorescently लेबल RGC से वर्तमान दबाना मोड में दर्ज कक्ष की Synaptic प्रकाश प्रतिक्रिया. (सी) M1 के आंतरिक रूप से सहज रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल कि epifluorescence के तहत पहचान की थी, पूरे सेल रिकॉर्डिंग के लिए लक्षित, neurobiotin से भरा है, और तब immunohistochemistry के लिए संसाधित.
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Discussion
इस तकनीक को एक अलग रेटिना से किसी भी रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल रिकॉर्डिंग के लिए लागू है. हालांकि ऊपर प्रयोग किया जाता माउस लाइन में आंतरिक रूप से सहज, melanopsin-व्यक्त RGCs EGFP 2, 5 के साथ लेबल रहे हैं, इस प्रोटोकॉल आसानी से अन्य fluorescently लेबल RGC लाइनों के लिए हस्तांतरणीय है या के रूप में अच्छी तरह से बेतरतीब ढंग से चुनी गई RGCs से रिकॉर्ड सामान्यकृत किया जा सकता है. इस तकनीक को विशेष रूप से महत्वपूर्ण है क्योंकि प्रत्येक RGC और अपने संबंधित इनपुट न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान कुंज पूरी तरह बरकरार छोड़ दिया जाता है. रिकॉर्डिंग वर्तमान या वोल्टेज क्लैंप मोड, सेल संलग्न या ढीले पैच विन्यास में आसानी से प्रदर्शन किया जा सकता है, या भी nucleated पैच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, अंदर या बाहर से बाहर रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल झिल्ली से पैच विन्यास. इस तकनीक को आसानी से किया जा fluorescently लेबल विस्थापित amacrine 7 कोशिकाओं या यहाँ तक कि गैर विस्थापित amacrine कोशिकाओं से प्रतिदीप्ति के उपयोग के 8 एक सीमा रिकॉर्ड नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं स्थानीयकरण है कि रेटिना हमेशा RGC पहचान के लिए रिकॉर्डिंग से पहले प्रकाश उजागर होना चाहिए अनुकूलित कर सकता . इस प्रकार, इस तैयारी के छड़ की मध्यस्थता प्रतिक्रियाओं की रिकॉर्डिंग के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है जब तक कि exogenous क्रोमोफोर स्नान समाधान और / या eyecup और रेटिनल pigmented उपकला छोड़ रहे हैं 9 रेटिना से जुड़ी में शामिल है हो सकता है. यदि लक्ष्य छड़ की मध्यस्थता प्रतिक्रियाओं प्रकाश रिकॉर्ड है, तो विशेष सावधानियों photopigment rhodopsin की विरंजन से बचने के लिए लिया होना चाहिए. विच्छेदन अवरक्त प्रकाश स्थितियों (यानी 10) के तहत किया जाना चाहिए .
एक सफल विच्छेदन प्रदर्शन करने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि विच्छेदन के रूप में तेजी से संभव के रूप में प्रदर्शन किया. यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है कि शीशे का सफलतापूर्वक संदंश से हटाया जा. यदि कांच का शेष है, तो एंजाइम पाचन के बाद रेटिना सफल पट्टी मुश्किल बना एक भावुक फिल्म के साथ कवर किया जाएगा. अच्छा रिकॉर्डिंग प्राप्त करने के लिए, यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण है कि अच्छी तरह oxygenated रेटिना है, जिसका अर्थ है कि बाह्य समाधान सख्ती जा रहा bubbled है और प्रवाह की दर पर्याप्त कक्ष के माध्यम से उच्च है. यह भी महत्वपूर्ण है ऊतक के प्रकाश जोखिम को कम से कम एक बार रेटिना eyecup से अलग है.
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Acknowledgments
इस काम के हिस्से में R01EY012949 एनआईएच, R21EY018885, EY0707133 T32 से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. हम अपने तकनीकी सहायता के लिए डार्विन रुको धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ames’ Medium | Sigma-Aldrich | A1420 | |
| Collagenase | Worthington Biochemical | LS005273 | |
| Hyaluronidase | Worthington Biochemical | LS002592 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| AlexaFluor 594 Hydrazyde | Invitrogen | A10442 | |
| Neurobiotin | Vector Laboratories | SP1120 | |
| Electrodes | Sutter Instrument Co. | BF120-69-10 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Ophthalmologic Scissor | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| Streptavidin 594 | Invitrogen | S32356 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | |
| Goat Serum | Jackson ImmunoResearch | 005-000-001 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 19210 |
References
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