Un saggio Slice organotipica per High-Resolution Time-Lapse Imaging della migrazione neuronale nel cervello postnatale

Sommario

Questo protocollo descrive un saggio organotipica fetta ottimizzato per il cervello postnatale e ad alta risoluzione time-lapse imaging di migrazione neuroblasti nel flusso migratorio rostrale.

Abstract

Neurogenesi nel cervello postnatale dipende dal mantenimento di tre eventi biologici: la proliferazione delle cellule progenitrici, la migrazione dei neuroblasti, nonché la differenziazione e l'integrazione di nuovi neuroni in circuiti neurali già esistenti. Per neurogenesi postnatale nei bulbi olfattivi, questi eventi sono segregati all'interno di tre ambiti anatomicamente distinte: la proliferazione avviene in larga misura nella zona subependimali (SEZ) dei ventricoli laterali, migrando neuroblasti attraversare attraverso il flusso migratorio rostrale (RMS), e nuovi neuroni differenziare e integrare all'interno del bulbo olfattivo (OB). I tre domini fungono da piattaforme ideali per studiare i meccanismi cellulari, molecolari e fisiologici che regolano ciascuno degli eventi biologici distintamente. Questo articolo descrive un saggio organotipica fetta ottimizzato per tessuto cerebrale post-natale, in cui le condizioni extracellulare strettamente imitare l'ambiente in vivo per la migrazione dei neuroblasti. Abbiamo dimostrato che la nostra analisi fornisce per il movimento uniforme, orientato, e veloce dei neuroblasti all'interno del RMS. Questa analisi sarà particolarmente adatto per lo studio della regolazione delle cellule autonome e non autonomi della migrazione neuronale utilizzando cross-trapianto si avvicina da topi diversi background genetico.

Protocollo

I. Procedure

Le seguenti tecniche devono essere eseguite in condizioni sterili, in una cappa a flusso laminare, utilizzando strumenti sterilizzati.

Preparazione di piatti con fondo di vetro per le fette organotipica

1. I piatti devono essere preparati in ambiente sterile e l'utilizzo di strumenti sterilizzati.
2. Una goccia 150μL di medio fetta (vedi ricette) si trova nel centro del fondo di vetro parte del piatto con cura per evitare bolle d'aria nel mezzo.
3. Con una siringa monouso dotata di un ago di 23 Gauge, macchie più di colla (Gomma Cemento - Elmer, cat # E904) sono posti ai margini....

Discussione

Migrazione neuronale in RMS è una componente essenziale della neurogenesi postnatale nei bulbi olfattivi ^1. Migrazione attraverso il RMS si presenta in un piano tangente alla superficie del cervello. Neuroblasti tangenzialmente migrazione sono distinti da radialmente migrazione delle cellule in base alla posizione della loro fonte progenitore, così come il destino divergenti dei loro prodotti finiti neuronale ^{1, 2, 3.} La popolazione relativamente puro tangenzialmente di cellule migrano nel RMS post.......