يمكن عزل الخلايا الظهارية الرئوي من الجهاز التنفسي لدى الفئران وتربيتها في الهواء السائل واجهة كنموذج للظهارة تنفسية مختلفة. يوصف بروتوكول للعزل ، زراعة وتعريض هذه الخلايا لدخان السجائر العادية ، من أجل دراسة الاستجابات الجزيئية لهذا السم البيئية.
يمكن عزل الخلايا الظهارية الرئوي من الجهاز التنفسي لدى الفئران وتربيتها في الهواء السائل واجهة (علي) كنموذج للظهارة تنفسية مختلفة. يوصف بروتوكول للعزل وتعريض هذه الخلايا لدخان السجائر التيار (CS) ، من أجل دراسة استجابات الخلايا الظهارية التعرض CS. بروتوكول يتكون من ثلاثة أجزاء : عزل الخلايا الظهارية من القصبة الهوائية فأرة ، وزراعة هذه الخلايا في الهواء السائل واجهة (علي) الخلايا الطلائية ومتباينة تماما ، وإيصال التيار CS معايرة لهذه الخلايا في الثقافة. نظام يسمح للثقافة علي ثقافة ظهائر الجهاز التنفسي في ظل ظروف أكثر شبها من محيطهم الفسيولوجية العادية نظم ثقافة السائل. دراسة الاستجابات الخلوية الجزيئية والرئة والتعرض CS هو عنصر حاسم لفهم الأثر البيئي لتلوث الهواء على صحة الإنسان. قد نتائج البحوث في هذا المجال أن تسهم في نهاية المطاف نحو فهم مسببات مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) ، وغيرها من الأمراض ذات الصلة بالتبغ ، والتي تمثل مشاكل صحية عالمية رئيسية.
ويتم تكييف بروتوكول يصف عزل الخلايا الظهارية الماوس القصبة الهوائية من بروتوكولات آخرون لك ، 1 ، وغيرها مع بعض التعديلات 2-3 كما هو الحال مع أي خلية العزلة بروتوكول يصف ، فإن الجانب الأكثر أهمية هو تجنب التلوث من مسببات الأمراض البكتيرية أو الفطر?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر ايميكا Ifedigbo للحصول على المساعدة التقنية ، والدكتور تياجي شيفراج للخبرات قيمة. كما نشكر مركز هارفارد للحصول على المساعدة NeuroDiscovery مع المجهري. وأيد هذا العمل في جزء من قبل جمعية القلب الاميركية Predoctoral منح 09PRE2250120 للام هيلير ، والمعاهد الوطنية للصحة المنح ، R01 – HL60234 ، R01 – HL55330 ، R01 – HL079904 ، منحت لتشوي AMK.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Ham’s F12 Medium 1X | Cellgro | MT-10-080-CM | With L-glutamine | |
Pen/strep | Lonza | 17-602E | ||
Pronase | Roche | 10165921001 | Streptomyces griseus | |
Collagen I | BD biosciences | 354236 | From rat tail | |
Acetic Acid | Sigma | 338826-25 | ||
DNaseI | Sigma | DN25-100MG | From Bovine Pancreas | |
Bovine Serum Albumin | Fisher Scientific | BP1605-100 | Fraction V | |
Retinoic Acid | Retinoic Acid | R265-50MG | ||
Hank’s Balanced Salt Solution | Gibco | 14175 | Without Ca++ or Mg++ | |
DMEM-F12 | Cellgro | MT-15-090-CM | Without L-Glutamine or HEPES | |
HEPES, 1M in H2O | Sigma | 83264-100ML | ||
L-Glutamine | Sigma | G7513-100ML | 200 mM | |
Amphotericin B (Fungizone) | Fisher Scientific | 1672346 | ||
Insulin | Sigma | 16634-50MG | Bovine Pancreas | |
Apo-transferrin (human) | Sigma | T1147-100MG | ||
Cholera toxin | Sigma | C8052 | Vibrio Cholerae | |
Epidermal growth factor | BD Biosciences | 354001 | Mouse | |
Bovine pituitary Extract | BD Biosciences | 354123 | ||
NuSerum | BD Biosciences | 355100 | ||
Transwell | Corning Costar | 3401 | 12 mm, 0.4 mm Pore Polycarbonate |
|
Primaria 100 mm culture dish | Falcon | 353803 | ||
Pallflex membrane | Pall Life Sciences | EMFAB TX40H120-WW | ||
Smoking Machine | EMI Services | ATCSALI-1 | see Footnote* |
*The cigarette smoking machine is a custom designed and fabricated 14″x14″x20″ Dual chambered and water jacketed light tint clear proof 1/2″ thick polycarbonate Lexan chamber for cigarette smoke exposure with temperature controlled, water level sensor controlled shut off system. A cigarette smoking/puffing unit is installed for a variable cigarette puffing rates. When the unit is in use, it mimics an incubator in the sense that the temperature, humidity and carbon dioxide are controlled in the system. The system includes: (I) a customized dual chamber/water jacketed unit that maintains a controlled environment for tissue culture experiments. (II) A digital heavy duty, high precision dual pump water temperature circulator system with water level sensor and temperature control (III) A cigarette smoking unit with puffing pump. (IV) A pump cycle sensor control rate cycler (IV) A Stainless steel high precision in-Line filter holder. (V) A Detachable lid mounted 11/2″ size axial uniformity cigarette smoke mixing fan. (VI) A medium size water bath with mounting bracket for the water circulator. (VII) A 1/2′ thick Plexiglas tray with brackets for the puff pump and holder for cigarette ash collector.
This machine as described can be substituted with similar commercially-available smoking machines such as the kind available from TSE systems (www.tse-systems.com).