チキンの聴性脳幹スライスの準備と文化
Summary
鶏の聴性脳幹は、バイノーラルサウンド処理に責任を核で構成されています。培養のアプローチは、分子、細胞およびネットワークレベルで神経細胞の構造と聴覚機能の発達を研究するユニークな準備を提供しながら、単一冠状スライス標本は、回路全体を維持します。
Abstract
鶏の聴性脳幹は広く控えめな開発1-4の期間だけでなく、5月7日 、中枢神経系における時間コーディングのためのメカニズムで聴覚処理の解剖学と生理学を研究するために使用されている十分に確立されたモデルシステムです。
ここでは、急性実験手順または長期的な実験操作のための文化器官のスライスに使用することができる鶏の聴性脳幹スライスを準備する方法を提示する。
鶏の聴性脳幹は核、グナmagnocellularis、laminarisと優れたオリーブで構成されています。これらの原子核は、バイノーラル音響処理と単冠状スライス標本全体の回路を維持する責任があります。最終的に、器官切片培養では、シナプス活動などのいくつかの発達のパラメータを操作する機会、事前およびシナプス後成分の発現、興奮性および異なる遺伝子発現を制御する側面の表現を提供することができます
このアプローチは、神経回路の開発、改良と熟成に関する一般的な知識を広げるために使用することができます。
Protocol
1。エリアの解剖の準備 95％O 2 / 5％CO 2の混合物（7.2から7.4の間のpH、浸透圧295から310 mOsm / L）で連続的にバブル人工脳脊髄液（ACSF）。 ACSFは、70％EtOHでクリーンな作業領域をバブリングしている間。ビブラトームとスライス刃をも清掃してください。蒸留水（のdH 2 O）で刃をすすぎます。 適切な解剖ツールで領域を解剖にクリーンな液体吸収パ?…
Discussion
数十年の間、鶏の脳幹の急性スライス標本は、聴覚処理9、10の研究に使用されています。このアプローチは、両方の発達および成熟の状態4、11、12からバイノーラル処理上のin vitro生理データの膨大な量を提供しています。多くは、この高度に専門化された回路と、各核が音13、14の時間的な処理で果たす役割についてはほとんど知られていない。実際には、こ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
現在および過去のルーベルの研究室のメンバー。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
References
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Cite This Article
Sanchez, J. T., Seidl, A. H., Rubel, E. W., Barria, A. Preparation and Culture of Chicken Auditory Brainstem Slices. J. Vis. Exp. (49), e2527, doi:10.3791/2527 (2011).