إعداد وثقافة شرائح الدجاج الدماغ السمعية
Summary
ويتكون الدماغ السمعية الدجاج من النوى المسؤولة عن معالجة الصوت الأذنين. A إعداد شريحة واحدة الاكليلية يحافظ على الدوائر كلها في حين أن النهج مثقف يوفر إعداد دراسة فريدة من نوعها لتطوير البنية العصبية وظيفة السمع على الصعيدين الجزيئية والخلوية وشبكة الاتصال.
Abstract
جذع الدماغ السمعية الدجاج هو النظام النموذجي الراسخة التي استخدمت على نطاق واسع لدراسة علم التشريح وعلم وظائف الأعضاء من تجهيز السمعية في فترات رصينة للتنمية 1-4 فضلا عن آليات لترميز الزمنية في النظام العصبي المركزي 5-7.
هنا نقدم طريقة لتحضير شرائح الدجاج الدماغ السمعية التي يمكن استخدامها لإجراءات تجريبية حادة أو لشرائح ثقافة عضوي النمط على المدى الطويل التلاعب التجريبية.
يتكون الدماغ السمعية الدجاج من الزاوي النواة ، magnocellularis والزيتون laminaris ومتفوقة. هذه النواة هي المسؤولة عن معالجة الصوت والأذنين واحد الاستعدادات شريحة الاكليلية الحفاظ على الدوائر كلها. وفي نهاية المطاف ، يمكن للثقافات شريحة عضوي النمط يتيح الفرصة للتلاعب المعلمات تنموية عدة مثل النشاط متشابك ، والتعبير من قبل عناصر وبعد المشبكي ، والتعبير عن جوانب السيطرة على استثارة والتفاضلية التعبير الجيني
ويمكن استخدام هذا النهج لتوسيع المعرفة العامة حول تطوير الدوائر العصبية ، والصقل والنضج.
Protocol
Discussion
لعدة عقود ، وقد استخدمت في إعداد شريحة حاد في الدماغ السمعية الدجاج لدراسة تجهيز 9 و 10. وقد قدم هذا النهج على كمية هائلة من البيانات في المختبر الفيزيولوجي على معالجة الأذنين من كل من الولايات التنموية وناضجة 4 ، 11 ، 12. ويعرف الكثير عن هذه الدائرة درجة ع…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
أعضاء حاليين وسابقين مختبر روبل.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
References
- Howard, M. A., Burger, R. M., Rubel, E. W. A developmental switch to GABAergic inhibition dependent on increases in Kv1-type K+ currents. J Neurosci. 27, 2112-2123 (2007).
- Kuba, H., Koyano, K., Ohmori, H. Development of membrane conductance improves coincidence detection in the nucleus laminaris of the chicken. J Physiol. 540, 529-542 (2002).
- Gao, H., Lu, Y. Early development of intrinsic and synaptic properties of chicken nucleus laminaris neurons. Neuroscience. 153, 131-143 (2008).
- Sanchez, J. T., Wang, Y., Rubel, E. W., Barria, A. Development of glutamatergic synaptic transmission in binaural auditory neurons. J Neurophysiol. 104, 1774-1789 (2010).
- Jackson, H., Hackett, J. T., Rubel, E. W. Organization and development of brain stem auditory nuclei in the chick: ontogeny of postsynaptic responses. J Comp Neurol. 210, 80-86 (1982).
- Rubel, E. W., Parks, T. N. Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: tonotopic organization of n. magnocellularis and n. laminaris. J Comp Neurol. 164, 411-433 (1975).
- Rubel, E. W., Smith, D. J., Miller, L. C. Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: ontogeny of n. magnocellularis and n. laminaris. J Comp Neurol. 166, 469-489 (1976).
- Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).
- Reyes, A. D., Rubel, E. W., Spain, W. J. Membrane properties underlying the firing of neurons in the avian cochlear nucleus. J Neurosci. 14, 5352-5364 (1994).
- Monsivais, P., Rubel, E. W. Accommodation enhances depolarizing inhibition in central neurons. J Neurosci. 21, 7823-7830 (2001).
- Lu, T., Trussell, L. O. Development and elimination of endbulb synapses in the chick cochlear nucleus. J Neurosci. 27, 808-8017 (2007).
- Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick. J Neurosci. 25, 1924-1934 (2005).
- Trussell, L. O. Cellular mechanisms for preservation of timing in central auditory pathways. Curr Opin Neurobiol. 7, 487-492 (1997).
- Trussell, L. O. Synaptic mechanisms for coding timing in auditory neurons. Annu Rev Physiol. 61, 477-496 (1999).
- Sorensen, S. A., Rubel, E. W. The level and integrity of synaptic input regulates dendrite structure. J Neurosci. 26, 1539-1550 (2006).
