Summary
Biz ultrafast tüm optik anahtarlama floresan sinyallerine karşı Raman izole etmek için kullanan bir karmaşık doğrusal olmayan optik sistem inşası ve işletilmesi tartışacağız. Bu sistemi kullanarak, başarılı bir darbe enerjileri ve biyolojik olarak güvenli kalır ortalama yetkileri kullanan, Raman ve floresan sinyalleri ayrı edebiliyoruz.
Abstract
Raman spektroskopisi, sık sık, özellikle biyolojik örnekler için, güçlü bir floresan arka plan boğulmuş. Hemen geç gelen floresan ışık Raman dağınık ışık gelen bir örnek, ultra hızlı bakliyat, zamansal zaman çizelgesi izole bir pikosaniye sinyalleri örtüşen Işıksal ayrı bir sistem bir tren ile heyecanlı. Burada Raman ve floresan sinyalleri izole etmek için, düşük güç optik Kerr kapı şeklinde tüm optik anahtarlama kullanan bir karmaşık nonlineer optik sistem inşası ve işletilmesi tartışacağız. <5 mW Raman saçılması heyecanlandırmak için örnek gönderilen 404 nm ışık dönüştürülen 808 nm ışık yaklaşık 200 mW, ortalama güç ve 80 MHz tekrarlama oranı 2,4 W ile tek bir 808 nm lazer ikiye bölünmüş durumda. Kalan dönüştürülmemiş 808 nm ışık daha sonra, tüm optik deklanşör pompa gibi davranır doğrusal olmayan bir orta gönderdi. Deklanşör yaklaşık% 5 'lik bir maksimum verimliliği ile 800 fs açar ve kapatır. Bu sistemi kullanarak, başarılı bir darbe enerjileri ve biyolojik olarak güvenli kalır ortalama güçleri kullanarak 80 MHz bir tekrarlama oranı Raman ve floresan sinyalleri birbirinden ayırmak mümkün. Sistem, optik güç açısından hiçbir yedek kapasite olduğundan, detaylı birçok tasarım ve hizalama konuları sisteminin verimini en üst düzeye yardım. Biz de içinde sinyal ve pompa kirişler Kerr orta mekansal ve zamansal örtüşme yanı sıra spektral edinimi için ayrıntılı bir protokol elde etmek için bizim protokol tartışmak. Sonuç olarak, zaman yolluk sistemi kullanarak güçlü floresan varlığında elde edilen Raman birkaç temsilcisi sonuçları raporu.
Protocol
1. Bazı bakım, bu sistem içinde bir Raman numune hazırlama ve yerleştirme alınması gerekmektedir.
- Sistem genellikle çok kısa mesafelerde çok yüksek sayısal diyafram hedefleri kullanmak yapar, çünkü örnekler bir lamel üzerine yerleştirilir. Biyolojik numunelerin tipik bir Attofluor hücre odası (Invitrogen, Carlsbad, CA) monte No 1 kalınlığı lamel üzerine yerleştirilir.
- Özellikle Sıvı numuneler, insanlar için toksik olan bir silikon epoksi sayesinde açılış çimentolu bir lamel ile küçük bir cam şişe konur. Şişe sonra ölçüm için ters çevrilir.
- Bizim sistemi, pompa ve sinyal bakliyat hassas zamanlama bağlı olduğundan, biz hedefi yukarı ve aşağı çevirir mikroskop geleneksel odak ayarı, kullanmak için değil kısıtlanır. Bu ekler ve sistemi optik yol çıkarır. Bunun yerine, kendi bağımsız odak denetimi mikroskop sahne üstüne monte edilmiş ikinci aşama bizim örnekleri yer.
2. Zaman-kapılı Raman almak için, uyarma ışını düzgün hazırlıklı olmalıdır.
- Sapph lazer (Chameleon, Tutarlı Sistemleri, Santa Clara, CA): 2.4 W ayarlanabilir darbeli Ti ortaya çıkan ışık ile başlar. Her bir atım, 80 MHz darbe tren, enerji 30 NJ 140 fs geçici bir genişliğe sahiptir ve 808 nm 'de merkezlenmiş ~ 6 nm spektral bant genişliğine sahip bir spektrum vardır.
- Geri-yansımaları lazer boşluğu yeniden girmesini önlemek için, ışık Faraday izolatör geçirilir. Faraday izolatör önce yerleştirilen bir yarım dalga plakası sistemine gönderilen toplam güç sürekli ayar sağlar.
- En Raman modları çözmek için çok geniş bir bant genişliği 6 mil olduğu için, kiriş, 808 nm merkezli bir (0.8 nm FWHM, Andover Corporation, Salem, NH) çok dar bir bant geçiren filtre ile gönderilir.
- Işık daha sonra akromatik bir kristal (CASIX, Fuzhou, Çin Halk Cumhuriyeti), 808 nm, 404 nm dalga boyu yarıya 5 mm β-Baryum Borat (BBO) üzerine giyilen erkek yeleği (f = 100 mm) odaklanmıştır. BBO kristal bir bağlama ucu ve tilt kontrolleri ile yerleştirilir ve aynı zamanda bir çeviri aşamasında üzerine monte edilmiş. Dalga boyu dönüşüm verimliliği maksimize etmek için, kristal ikilisinin odak hakkında tam simetrik yerleştirilen ve kristal ekseni gelen ışının kutuplaşma hizalanmış olmalıdır.
- Dalga boyu dönüşüm verimliliği kutuplaşma bağımlı olduğundan, örnek gönderilen ışık miktarı üzerinden kontrol Faraday izolatör sonra ikinci bir yarım dalga plakası koyarak elde edilebilir. Bu waveplate döner, örnek gönderilen ışık yoğunluğu şiddeti pompa ışın (aşağıda ele alınacak) gönderilen bağımsız olarak ayarlanabilir.
- Dalga boyu dönüştürülür ışık çıkmadan ışını mikroskop objektif arka diyafram doldurmak için yeterince büyük ve ters bir mikroskobu (IX-71, Olympus, içine yönelik olduğunu gibi seçilen ikinci bir akromatik giyilen erkek yeleği (f = 500 mm) tarafından recollimated iki direksiyon aynalar vasıtasıyla Center Valley, PA).
- Sistemin en monolitik bileşeni içinde barındıran optik eleman mikroskop objektif, optik ekseni tanımlar. Bu eksen uyarma ışın hizalamak için, bir ayna mikroskop örnek düzlemde yer almaktadır. Bir CCD kamera dönemi (μEye, IDS, Obersulm, Almanya) mikroskop görüntüleme bağlantı noktasına bağlı arka yansıtılan lazer ışını gözlemlerken iki direksiyon aynalar sonra iteratif ayarlanmış. Kamera görüntü mikroskop alan görüş merkezli olduğunu varsayarsak, ışın odak noktası, z-ekseni boyunca objektif, mikroskop çip ve çeviri üzerinde yoğunlaşmış-eksen merkez noktası değişmez odak dışı demetinin.
- Bir örnek, örnek düzlemde yerleştirilir ve ışınlanmış zaman lazer ışığı Raman saçılması oluşur. Mikroskop objektif altına yerleştirilen bir dikroik filtre Raman dağınık ışık mikroskop yan port yönlendirme, uyarma ışın dalga boyu kaymıştır Raman dağınık ışık (floresan) ayırır. Mikroskop bu yolu içinde herhangi bir sinyal ışığı collimated mikroskop çıkar böyle lensler, kaldırmak için güncellenmiştir.
- Mikroskop ortaya çıkan sinyal ışını Glan-thompson polarize açık diyafram daha büyük olduğundan, bir 0.47x teleskop iki akromatik çiftleri (f1 = 75 mm, f2 = 35 mm) inşa ışını küçültmek için kullanılır.
- Sinyal, ışık daha sonra laboratuar çerçevesi dikey saygı ile 0 ° odaklı bir Glan Tekin polarize kutuplaşmış ve pompa ışını ile recombined bir dikroik ayna.
3. En yüksek verimle çalışması için optik kapısı için de pompa ışın (Kerr kiriş) hazırlanması, bakım alınmalıdır.
4. Iki ışın kombine toplanan zaman kapı sinyali en üst düzeye çıkarmak için, Kerr kapısı ve toplama sistemi kurulur.
- Pompa ve sinyal kirişler, doğrusal olmayan orta içinde, heyecan verici Raman saçılması herhangi bir kalıntı uyarma ışık önlemek için 404 nm dalga boyunda bir OD 6 bir dikroik filtre ilk geçirilir.
- Pompa ve sinyal kirişler sonra her ikisi de bir akromatik doğrusal olmayan malzeme içeren bir 1 cm yollu kuvars küvet içine giyilen erkek yeleği (f = 35 mm) tarafından odaklı. Uygun bir yüksek doğrusal olmayan indeksi (CS 2 daha yüksek) ve uygun kısa temporal yanıt (<2 bg) olan herhangi bir doğrusal olmayan malzeme, burada kullanılabilir. Bu deneyler için, doğrusal olmayan bir dizin n 2 = 3.1 x 10 -18 m 2 / W. karbon disülfit, CS 2, Işık daha sonra ikinci bir ilk özdeş bir odak uzaklığı ile elektronların ikili recollimated.
- Kirişler sonra bir OD (10) 808 nm'de kombine olduğu emme ve girişim filtreleri bir dizi aracılığıyla sonra geçti ve dönen bir montaj Glan Tekin analizörü, ve.
- Son olarak, sinyal, ışık, akromatik, lif, x, y ve z çeviri sağlayan bir sahne monte 50 mikron modlu fiber optik, içine giyilen erkek yeleği (f = 35 mm) tarafından odaklı Lif, daha sonra ticari bir görüntüleme spektrografla bağlı CCD kamera (SP2300i ve sırasıyla Pixis 100B, her ikisi de Princeton Instruments, Trenton tarafından üretilen, NJ) ile birleştirilmiştir.
- Analizörü toplanan sinyali en üst düzeye çıkarmak için toplama sistemi hizalamak için, 0 ° ve toluen bir test örneği örnek düzlemde yerleştirilir. X, y ve z fiber montaj kontrolleri ayarlayarak, toplanan Raman sinyal optimize edilmiştir.
- Pompa ve sinyal kirişler uygun mekansal ve zamansal örtüşme sağlamak için, bir ayna mikroskop örnek düzlemde yer alır. 404 nm filtre sistemden kaldırılır. Analizörü 90 döndürülmüş ° retroreflected 404 nm ışın yoğunluğu ile kamera doyurabilecek olmadığı gibi ayarlanabilir spektrografla içine gönderilir. Kapalı pompa ışını analizörü iletilen 404 nm sinyali en aza indirmek için döndürülür. Pompa ışını geri açıkken 404 nm ışık iletim artmaya başlayıncaya kadar, gecikme sahne yavaş yavaş ayarlanmıştır. Sonra, iteratif gecikme aşamasında, piezo-elektrikli ayna ayarlama, ve x, y ve z fiber kontrolleri, bir sinyalin en üst düzeye çıkarır.
- 404 nm ışın ve Raman dağınık ışık sistemi ile biraz farklı yollar alabilir retro-yansıyan Çünkü, son ayarlamaları değiştirerek örnek sahne ve biraz ince ayar hizalama güçlü bir Raman Yorum; (örneğin, toluen gibi) koyarak yapılır gecikme aşamada, piezeo elektrikli ayna, ve fiber x, y ve z kontrolleri Raman sinyal optimize etmek.
5. Tek bir zaman-kapılı Raman spektrumu toplanması birkaç spektrumları edinimi, sistemi eserler düzeltmek için gereklidir.
- 0 °, uyarma ışını ve kapalı pompa ışını analizörü ile, bir "ungated" spektrum zaman yolluk sistemi yararına olmadan kazanılmış olurdu spektrumu temsil alınır.
- Analizör 90 °, uyarma kiriş ve pompa ışın hala kapalı olarak ayarlanmış bir arka zemin spektrum sisteminde polarize ve diğer unsurlar sızan sokak ışık miktarını temsil eden, alınır.
- 90 kalan analizörü °ve tüm kirişler, pompa demetinin varlığı ile çapraz polarize üzerinden izin Raman dağınık ışık temsil eden "gated" spektrum alınır.
- Son olarak, hala 90 ° analizörü ile, uyarma ışın ve pompa ışın, ikinci bir arka plan spektrumu spektrografla girerek 808 nm ışık kalıntı miktarları "geçitli" spektrum katkısını temsil alınır.
- Ayrıca, kamera ve elektronik temel "karanlık" sinyal seviyesi karakterize bir spektrum, kapalı tüm lazerler ile alınır.
- Yaygın bir sorun birkaç dakika açıklıklı üzerinden veri satın alırken spektrumları genellikle uzun entegrasyon süreleri gerektirdiğinden, bu kozmik ışınların düzgün bir şekilde düzeltilmesi için izin vermek için birkaç adet (kare) Bu entegrasyon süresi kırmak için zorunludur.
6. Kazanılmış sonra, birkaç işlem adımları verilerin kalite ve görünümünü iyileştirmek için faydalıdır.
- İlk olarak, tüm spektrumları karanlık bir "karanlık" spektrum çıkarılarak giderilmiştir.
- Kozmik ışınlar düzeltmek için, bir satın alma oluşturan birkaç kare piksel piksel olarak birbirleriyle karşılaştırılır. Tüm kareleri arasında o piksel için medyan değeri 2 medyan sapmalar dışında kalan herhangi bir çerçevenin herhangi bir piksel için, o pikselin değeri tüm kareleri arasında medyan değeri ile değiştirilir.
- Daha sonra kozmik ışın düzeltilmiş kare ortalama ve Savitzky-Golay filtresi 1 yüzey düzeltilmelidir .
- "Gerçek" geçitli spektrum ayıklamak için, ölçülen kapılı spektrumu "pompa sadece" spektrumları "uyarma yalnızca" çıkarma ve.
- Son olarak, kapı ve ungated spektrumları sonra Lieber ve Mahadevan-Jansen 2 yöntemi kullanılarak belirlenen 5 inci sipariş polinom çıkarılarak düzeltilmiş arka plan vardır.
7. Temsilcisi Sonuçlar:
Şekil 1. Kerr yolluk sisteminin şematik diyagramı. SHG yolu mavi ile yazılmıştır ise pompa ışın yolu, kırmızı renkte gösterilmiştir. Floresan zamansal filtre yolu sarı gösterilir Raman ve Floresans çakışan yol, yeşil gösterilir. Kısaltmalar aşağıdaki gibi: BPF, bant geçiren filtre, CCD, şarj çiftli aygıt; DCM, dikroik ayna; FI, Faraday izolatör; λ / 2, yarım dalga plakası; LPF, uzun-pass filtre; NLM, doğrusal olmayan orta, P, polarize SHG, ikinci harmonik üretimi kristal.
Şekil 2: immersiyon çözünmüş kumarin Ham spektrumları. Kırmızı eğri kapısı açık tutulan (analizörü maksimum iletim) ile alınan spektrum gösterir. Siyah eğri minimum iletim ve bir pompa ışın uygulanır (kapılı spektrum) hizalanmış analizörü ile alınan spektrum gösterir. Mavi eğri minimum iletim ve hiçbir pompa ışın uygulanan dizilen analizörü ile alınan spectum (kapı kapalı tutulan) gösterir. Yeşil eğri, sadece pompa ışın uygulanmış alınan spektrum gösterir. Kesikli kırmızı çizgiler aşağıda panelinde gösterilir spektral bölgede göstermektedir. Tüm spektrumları 11 puan, 3. sıra Savitzky Golay filtre ile düzeltti olmuştur. Alt: floresan arka plan çıkarma sonra immersiyon çözünmüş kumarin Spectra. Kırmızı eğri kapısı ile spektrum açık tutulan, ve mavi kapılı spektrum eğrisi. Kapılı spektrum yağların dolambaçlı wavenumber yüksek tepe özelliği açıkça gösterir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biyomedikal Raman spektroskopisi alanında biyolojik teşhis çok zor zorlukları çözmek için gösterdi potansiyel bir sonucu olarak son birkaç yıl içinde artan bir ilgi gördü. Örneğin, Raman kanser tespiti 3, 4, 5, 6 tanısal değeri olduğu gösterilmiştir. Raman spektroskopisi bakteriyel kantitatif 7, 8 ve bakteriyel ilaç yanıtı 9 da kullanılır olmuştur. Ayrıca kemik sağlığı 10 Biyolojik Akışkanlar analizi 11, 12 arasında değişen diğer biyomedikal uygulamalarda geniş bir yelpazede uygulama bulmuştur.
Son derece zayıf bir kesit: Böyle büyük bir potansiyel olmasına rağmen, ancak, Raman spektroskopisi birçok biyolojik sistemler üzerinden gelir için büyük bir engel vardır. Bu nedenle, Raman sinyalleri bile oldukça mütevazı floresan planları ile kolayca boğulmuş olabilir. Floresan lineshape 2, 13, 14 kaldırılması için birçok teknik var. Ancak, bu tekniklerin hiçbiri gerçekten güçlü floresan geçmişlere sahip ana konu ele shot gürültü, floresan arka plan bunaltıyor Raman sinyal varlığı ile spektrum katkıda bulundu ve uzakta çıkarılır olamaz. Tutarlı bir anti-Stokes Raman spektroskopisi (CARS) ve uyarılmış Raman saçılması (veya ters Raman saçılma) gibi çeşitli teknikler, Raman sinyal 15, 16, 17, gücünü yükseltmek girişimi için geliştirilmiştir. Ancak, bütün bu teknikleri öncelikle şeffaf numunelerin uygulanabilir ve kendi geçmişleri ve kimyasal duyarlılığı 18 ile ilgili sorunlar var.
Floresan sinyal dedektörü Ekranlanması gerçekten spontan Raman saçılması floresan arka plan ile ilgili gürültüsü reddetmek için tek yoldur. On yıl önce, Matousek ve ark. floresan reddi, Raman ve floresan sinyalleri 19, 20 zamansal izole etmek için ultra hızlı Kerr deklanşör kullanarak göstermiştir . Ancak, bugüne kadar, bu sistemin yaygın kullanımı, aşırı yüksek darbe enerjileri nedeniyle biyolojik alanda bulundu değil. Bu iletişim sunulan sistem, aksine, önceki bazı raporlara göre 1000 kat daha zayıf nabız enerjileri kullanır ve biyolojik sistemleri ile uyumlu.
Şekil 1'de gösterildiği gibi sistem, collinear Kerr kapısı geometri, gücünü korumak ve mümkün olduğunca doğrusal olmayan bir ortam içinde pompa ve sinyal kirişler arasındaki kadar örtüşme sağlamak için kullanmaktadır. Buna ek olarak, biz bizim Kerr deklanşör çalıştırmak için maksimum güce sahip olmasını sağlamak için mümkün olduğunca optik kayıpları azaltmak için ilgilenir. Biz herhangi bir fotohasar 21 gözlem olmadan, son derece yani biyolojik örnekler, Jasmine bitki kök floresanlama Raman almış bu sistemi kullanarak. Bu yazıda, mikroskobun immersiyon yağı çözünmüş bir bitki tabanlı fluorofor bir model sistemi temsil eden ilgili bazı veriler (kumarin, τF ≈ 5 ns) göstermektedir. Bu Şekil 2'de gösterilmiştir. Üst panelde, görselleştirme amaçlar için maksimum değeri 0.04% ölçekli, kırmızı güçlü "ungated" spektrum (0 ° analizörü kümesi). Görülebilen belirgin bir Raman zirveleri olduğunu unutmayın. Aşağıda, siyah, ham kapılı spektrumu (yani yelpazenin pompa ve uyarma lazerler). Bunun altında, mavi, artık floresan temsil eden çapraz polarize sızan uyarım sadece lazer ile spektrum. Son olarak, yeşil, pompa lazer sistemi yerleştirilir emilimi ve girişim filtreleri kombinasyonu ile sızıntı nedeniyle arka plan bakın. Şekil alt panelinde 2 5. dereceden polinom çıkarma sonra ungated ve kapılı spektrumu (bölge üst panelinde kesik kırmızı çizgiler ile gösterilir) bir subregion bakın. Ungated spektrumu net Raman özelliklere sahipken kapılı spektrum açıkça, lipid ile ilişkili yüksek wavenumber pik gösterir.
Bizim sistem, şu anda büyük effciency ile faaliyet olmamasına rağmen (ölçülen Maksimum sayı iletim yaklaşık% 5 olmuştur), mutlak sinyal gücü genellikle sinyal-gürültü daha az önemlidir. Geleneksel Raman ölçmek ya zor ya da ezici floresan geçmişleri nedeniyle pratik olduğu için biyolojik örneklerin birkaç geniş sınıfları vardır. Bu örnekleri için, bizim sistemimiz, Şekil 2'de açıkça görüldüğü gibi, kesin bir sinyal-gürültü iyileşme sağlayabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Bu çalışma, NSF ödül DBI 0852891 tarafından finanse edildi. Bu çalışmanın bir parçası da Kooperatif Anlaşması No PHY0120999 altında, University of California, Davis tarafından yönetilen Biophotonics Bilim ve Teknoloji, NSF Bilim ve Teknoloji Merkezi Merkezi tarafından finanse edildi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Lenses | Thorlabs Inc. | Various | All lenses coated to have maximum transmission losses of 1% each |
| Tunable Ti:Sapph laser | Coherent Inc. | Chameleon | 30 nJ, 200 fs, 80 MHz |
| 40X oil immersion objective | Olympus Corporation | UApo/340 | NA = 1.35 |
| Inverted microscope | Olympus Corporation | IX-71 | Modified to remove all lenses in side port |
| Half wave plate | Thorlabs Inc. | AHWP05M-600 | |
| Glan-Thompson polarizer | Thorlabs Inc. | GTH10M | ∼10% transmission loss |
| Spectrometer | Princeton Instruments/Acton | SP2300i | |
| CCD | Princeton Instruments/Acton | Pixis 100B | |
| Mathmatical software | Mathworks | MATLAB | version 2008a |
| Faraday isolator | EOT | BB8-5I | |
| Piezo-electric mirror | Newport Corp. | AG-M100 | |
| BBO crystal | CASIX | custom | 1 mm thickness |
| Bandpass filter 1 | Andover | 008FC14 | 808 ± 0.4 nm |
| Dichroic mirror | Semrock | FF662-FDI01 | band edge at 662 nm |
| Long-pass filter | Semrock | BLP01-405R | band edge at 417 nm |
| Bandpass filter 2 | Semrock | FF02-447/60 | 417-447 nm |
| CS2 | Sigma-Aldrich | 335266 | 99% purity |
| Coumarin 30 | Sigma-Aldrich | 546127 | 99% purity |
| Immersion oil | Cargill Labs | 16242 | Type DF |
References
- Savitzky, A., Golay, M. J. E. Smoothing and differentiation of data by simplified least squares procedures. Analytical Chemistry. 36, 1627-1639 (1964).
- Lieber, C. A., Mahadevan-Jansen, A. Automated method for subtraction of fluorescence from biological Raman spectra. Applied Spectroscopy. 57, 1363-1367 (2003).
- Gniadecka, M. Melanoma diagnosis by Raman spectroscopy and neural networks: Structure alterations in proteins and lipids in intact cancer tissue. Journal of Investiga-tive Dermatology. 122, 443-449 (2004).
- Lieber, C. A., Majumder, S. K., Billheimer, D., Ellis, D. L., Mahadevan-Jansen, A. Raman microspectroscopy for skin cancer detection in vitro. Journal of Biomedical Optics. 13, 024013-024013 (2008).
- Chen, K., Qin, Y., Zheng, F., Sun, M., Shi, D. Diagnosis of colorectal cancer using Raman spectroscopy of laser-trapped single living epithelial cells. Optics Letters. 31, 2015-2017 (2006).
- Chan, J. W. Nondestructive identification of individual leukemia cells by laser trapping Raman spectroscopy. Analytical Chemistry. 80, 2180-2187 (2008).
- Zhu, Q. Y., Quivey, R. G., Berger, A. J. Measurement of bacterial concentration fractions in polymicrobial mixtures by Raman microspectroscopy. Journal of Biomedical Optics. 9, 1182-1186 (2004).
- Rösch, P. Chemotaxonomic identification of single bacteria by micro-Raman spectroscopy: Application to clean-room-relevant biological contaminations. Applied and Environmental Microbiology. 71, 1626-1637 (2005).
- Moritz, T. J. Raman spectroscopic signatures of the metabolic states of escherichia coli cells and their dependence on antibiotics treatment. Biophysical Journal. 98, 742a-742a (2010).
- Dehring, K. A. Identifying chemical changes in subchondral bone taken from murine knee joints using Raman spectroscopy. Applied Spectroscopy. 60, 1134-1141 (2006).
- Berger, A. J., Koo, T. W., Itzkan, I., Horowitz, G., Feld, M. S. Multicomponent blood analysis by near-infrared Raman spectroscopy. Applied Optics. 38, 2916-2926 (1999).
- Qi, D., Berger, A. J. Chemical concentration measurement in blood serum and urine samples using liquid-core optical fiber Raman spectroscopy. Applied Spectroscopy. 46, 1726-1734 (2007).
- Beier, B. D., Berger, A. J. Method for automated background subtraction from Raman spectra containing known contaminants. The Analyst. 134, 1198-1202 (2009).
- De Luca, A. C., Mazilu, M., Riches, A., Herrington, C. S., Dholakia, K. Online fluorescence suppression in modulated Raman spectroscopy. Analytical Chemistry. 82, 738-745 (2010).
- Evans, C. L. Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 16807-16812 (2005).
- Jones, W. J., Stoiche, Inverse raman spectra: Induced absorption at optical frequencies. Physical Review Letters. 13, 657-659 (1964).
- Freudiger, Label-Free et Imaging with High Sensitivity by Stimulated Raman Scattering Microscopy. Science. 322, 1857-1861 (2008).
- Cui, M., Bachler, B. R., Ogilvie, J. P. Comparing coherent and spontaneous Raman scattering under biological imaging conditions. Optics Letters. 34, 773-775 (2009).
- Matousek, P., Towrie, M., Stanley, A., Parker, A. W. Efficient rejection of fluorescence from Raman spectra using picosecond Kerr gating. Applied Spectroscopy. 53, 1485-1489 (1999).
- Matousek, P. Fluorescence suppression in resonance Raman spectroscopy using a high-performance picosecond Kerr gate. Journal of Raman Spectroscopy. 32, 983-988 (2001).
- Knorr, F., Smith, Z. J., Wachsmann-Hogiu, S. Development of a time-gated system for Raman spectroscopy of biological samples. Optics Express. 18, 20049-20058 (2010).
