Summary
이 비디오에서는, 우리는 불균형 그대로의 감각 기관의 전구 세포와 표피 세포를 나누지 라이브 셀 이미징에 대한 방법을 설명
Abstract
그린 형광 단백질 (GFP)의 발견 이후, 기본적인 생물 학적 메커니즘을 이해하기위한 도구로 라이브 셀 이미징의 사용에 혁명적인 변화가왔다. 눈에 띄는 진전은 누구 광범위한 툴킷 돌연변이 유전자 변형 라인의 evolutionarily - 보존 발달 및 세포 생물 학적 메커니즘을 연구하는 편리한 모델을 제공합니다 Drosophila에서 특히 분명했습니다. 우리는 Drosophila에서 성인 말초 신경계 (PNS)의 제어 셀 운명 사양. 표지의 머리, 흉부, 복부, 다리 및 성인 비행 중 날개 개별 mechanosensory 장기 것을 Bristles하고, 연구하고있다는 메커니즘을 이해에 관심이있는 노치 - 의존 세포 운명 결정의 메커니즘을 이해하기위한 모델 시스템으로. microchaetes (또는 작은 bristles)의 감각 기관 전구체 (SOP) 세포는, pupal 흉부의 상피를 통해 배포되며, pupariation의 발병 후 처음 12 시간 동안 지정됩니다. 규격 후, SOP 세포가 유사 분열 동안 한 딸 세포로 감각 세포 운명의 결정자를 segregating, 분열 시작. 노치 신호 경로의 휴대 자율 억제제와 같은 감각 기능.
여기, 우리는의 조합을 사용하여 손상 pupal 흉부 이내 SOP 세포와 그 자손의 단백질 역학을 수행하는 방법을 보여 조직 특정 Gal4 드라이버와 GFP - 태그 융합 단백질 1,2.이 기법은 고정 조직이나 교양을 통해 이점을 가지고 explants 그것이 우리가 신경 전구체의 규격에서 성장과 장기의 단말기 분화하는 기관의 전체 개발을 수행하실 수 있습니다 때문입니다. 따라서 직접 터미널 차별화의 변화에 셀 동작의 변화와 상호하실 수 있습니다. 또한, 우리는 돌연변이 또는 wildtype 조건 mitotic의 솝스에 태그 단백질의 역학을 평가하는 repressible 세포 마커 (MARCM) 시스템 모자이크 분석 라이브 이미징 기술을 조합하여 사용할 수 있습니다. 이 기법을 사용, 우리와 다른 비대칭 세포 분열의 조절과 세포 SOP (예제 참조 1-6,7, 8을 포함)에서 노치 신호 전달 활성화의 통제에 소설 통찰력을 밝혀있다.
Protocol
Discussion
Disclosures
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
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