Summary
Musen kompletta stasis modell av sämre vena cava trombos ger mätbara mängder ven vägg vävnad och trombos. Det har visat sig användbara för att utvärdera interaktioner mellan venen väggen och ocklusiv blodproppar och för att bedöma utvecklingen från akut till kronisk inflammation.
Abstract
Venös tromboembolism (VTE) omfattar både djup ventrombos (DVT) och lungemboli (PE). I USA (US), den höga sjuklighet och dödlighet gör VTE ett allvarligt hälsoproblem 1-2. Efter hjärtsjukdomar och stroke, är VTE den tredje vanligaste kärlsjukdom 3. Enbart i USA finns det uppskattningsvis 900.000 människor drabbas varje år, med 300.000 dödsfall årligen 3. En pålitlig in vivo djurmodell för att studera mekanismerna bakom denna sjukdom är nödvändig.
Fördelarna med att använda musen hela stasis modell av sämre vena cava trombos är flera. Den musmodell möjliggör administrering av mycket små volymer av begränsade medel tillgängliga test, minska kostnaderna dramatiskt. Mest lovande är potentialen för möss med genen knockouts som gör att vissa inflammatoriska och koagulationsfaktor funktioner som skall avgränsas. Aktuella molekylära analyser möjliggöra kvantifiering av venen vägg, trombos, helblod och plasma för analyser. Det är dock ett stort problem med denna modell den operativa storlek begränsningar och sprödhet av fartygen. Också, på grund av den lilla IVC provets vikt (genomsnitt 0,005 gram) är det nödvändigt att öka antalet djur för noggrann statistisk analys för vävnad, trombos, och analyser blod såsom realtids-PCR (RT-PCR), Western Blot, immunadsorberande (ELISA), zymography, ven väggen och trombos cellulär analys och helblod och analyser plasma 4-8.
Den största nackdelen med stas modellen är att avsaknaden av blodflödet hämmar maximal effekt av given systemiska behandlingsmetoder på tromber och ven vägg.
Protocol
1. Mus Anesthesia Rutiner
- Djur tas bort från sin bur och placeras i ett bedövningsmedel pre-operativ induktionskammare för gas induktion vid 5% isofluran och 100% syrgas, vid ett flöde på 0,5 liter per minut (Vaporizer kontrollerat).
- Möss är lugnande i narkos induktionskammare, bort från kammaren och ventrala buken är rakat med elektrisk klippare eller bevarad i kammaren om ett hår hårborttagningsprodukter används (1min).
- Medan fortfarande under sedering, de vägde, är ögonen smörjs med sterila ögonläkemedel salva och sedan placeras i en dorsal recumbancy på ett varmt vatten cirkulerar uppvärmningsanordning under narkos, med en noskon, med hjälp av isofluran och syre. Vid denna punkt syret räntan sänks till 0,2 liter per minut.
- Buken är sprejas med klorhexidin lösning (klorhexidin diacetat snabbt bacterialcidal och ihållande) och torkas med steril gasbinda tre gånger eller tills operationsområdet är ren.
2. Mus Micro-kirurgisk och återkravsförfaranden
- En ventrala mittlinjen snitt (2 cm) är gjord med iris sax genom huden och bukväggen exponera buken. En steril koksaltlösning indränkt 2x2in gasväv används för att spegla tarmar till djurets vänstra sida. En mus restrainer införs tillåter visualisering av den underlägsna vena cava (IVC).
- Vid denna punkt, är ett underhåll på 2% isoflurance och 100% syrgas hastighet av 0,2 liter / min används för återstoden av det kirurgiska ingreppet.
- Dissektion underlättas med en steril applikator kompress och extra känslig iris halv böjd pincett vävnad. Försiktighet måste iakttas vid hantering mus vävnader för de är väldigt ömtåliga. När du går in i bukhålan, använd en steril koksaltlösning indränkt 4x4in kompress att reflektera och exteriorize tarmarna på en steril duk, vilket gör visualisering av IVC.
- Alla IVC tillbaka grenar, från renal venerna till iliaca bifurkation är flamberats medan sidogrenar är knyts ihop med 7-0 icke-reaktivt prolene suturer.
- Den IVC är separerad från aorta, bara sämre än den renala vener. 7-0 prolene används för att ligate de IVC.
- Den laparotomi webbplats är stängd i två lager mode. Vårt laboratorium använder 5-0 vicryl, en syntetisk sutur, i ett kontinuerligt mönster för att stänga bukväggen. Självhäftande hud lim används för att stänga huden. Det finns inga externa suturer för borttagning.
- Möss sedan återvinns i en enskild mus bur, observerade postoperativt (45 minuter till 2 timmar) under en värme lampa (minsta avstånd-24 inches bort från buren), sedan tillbaka till sina ursprungliga bostäder. Smärtstillande och antiinflammatoriska medel kan användas om det inte påverkar syftet med studien. Vetenskapligt underlag för att undanhålla smärtstillande medel, veterinär och ICUCA godkännande behövs. Vårt laboratorium har funnit att Buprenorfin, 0,05-0,1 mg / kg SQ är en utmärkt pre-och postoperativa smärtstillande för möss. Dessutom kan lidokain på 4mg/kg (0,4 ml / kg i en 1% lösning) infunderas i snitt platsen när systemiska analgetika kan förbrylla experimentella resultat.
- Sham djur från varje experimentell grupp genomgår ovanstående dissektion används för kirurgiska tillvägagångssätt, förutom IVC eller tömning grenar inte knyts ihop eller flamberats.
- Eutanasi utförs i enlighet med de rekommendationer som anges av American Veterinary Medical Association Riktlinjer för eutanasi för gnagare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Musen Komplett Stasis modell av sämre Vena Cava Trombos kan utföras på flera stammar av möss i olika åldrar. Modellen är mest lämpade för möss av minst 20 gram i vikt. Denna djurmodell av venös trombos kan utredarna att studera inflammatoriska växelverkan mellan ven väggen och ocklusiv trombos venösa. Från vår erfarenhet har vi funnit att minst 10 djur per grupp behövs för att få statistisk signifikans mellan grupperna för trombos vikter, ven vägg inflammatoriska raknas, ven vägg protein, ven vägg genuttryck, och helblod eller plasma analys för aktiviteten analyser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
