Summary

الأعور إجراء ربط البزل

Published: May 07, 2011
doi:

Summary

الفأر نموذج من ربط الأعور وثقب باعتبارها أداة قيمة لدراسة الإنتان الإنسان.

Abstract

وتتميز الإنتان الإنسان من قبل مجموعة من ردود الفعل الشاملة في الاستجابة للعدوى المكثفة والواسعة النطاق التي فشلت في أن ترد محليا من قبل المضيف. حاليا ، الإنتان صفوف من بين الأسباب العشرة الأولى للوفيات في الولايات المتحدة الأمريكية وحدات الرعاية المركزة 1. خلال الإنتان هناك مرحلتين الديناميكية الدموية التي قد أنشأت التداخل. تعرف المرحلة الأولى (مفرط الديناميكية) وإنتاج هائلة من السيتوكينات proinflammatory وأنواع الاكسجين التفاعلية التي الضامة ، والتي تؤثر على العدلات نفاذية الأوعية الدموية (مما يؤدي إلى انخفاض ضغط الدم) ، وظيفة القلب ويؤدي الى تغييرات الأيضية وبلغت ذروتها في نخر الأنسجة وفشل الجهاز. وبالتالي فإن السبب الأكثر شيوعا للوفيات وإصابات حادة في الكلى. انخفض انتشار الخلايا اللمفاوية والخلايا وظيفة وزيادة في المرحلة الثانية (hypodynamic) هو عملية المضادة للالتهابات التي تنطوي على تغيير العرض مستضد الوحيدات. هذه الحالة تعرف باسم كبت المناعة أو الاكتئاب يزيد من المناعة بشدة لخطر العدوى nocosomial والموت في نهاية المطاف. ليست آليات عملية من هذه العمليات الفيزيولوجية المرضية تتميز أيضا. لأن كلا من مراحل الإنتان قد يسبب ضررا لا يمكن اصلاحه لا رجعة فيه وأنه لا بد من تحديد الحالة المناعية والفسيولوجية للمريض. هذا هو السبب الرئيسي وراء العديد من العقاقير العلاجية قد باءت بالفشل. قد يعطى الدواء نفسه في مراحل مختلفة من التعفن تكون علاجية أو الضارة أو غير ذلك ليس لها أي أثر 2،3 لفهم الإنتان على مختلف المستويات من المهم أن يكون النموذج الحيواني مناسب وشامل يعيد مسار السريرية لهذا المرض. من المهم أن تميز الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تحدث أثناء الإنتان والتحكم في ظروف نموذجية لاختبار العوامل العلاجية المحتملة.

لدراسة مسببات تسمم الإنسان من الباحثين قد وضعت نماذج حيوانية مختلفة. النموذج الأكثر استخداما السريرية هو ربط الأعور وثقب (CLP). طراز CLP يتكون من ثقب في الأعور السماح بالإفراج عن المواد البرازية في التجويف البريتوني لتوليد استجابة مناعية تتفاقم الناجم عن الإصابة متعدد المكروبات. هذا النموذج يستوفي الشرط البشري الذي هو ذات الصلة سريريا. كما هو الحال في البشر والفئران التي تتعرض CLP مع الانعاش السوائل تظهر الأول (المبكر) المرحلة مفرط الديناميكية التي تقدم في الوقت المناسب للمرحلة (الراحل) الثاني hypodynamic. بالإضافة إلى ذلك ، ملف خلوى مشابهة لتلك التي شوهدت في الإنتان البشرية حيث هناك زيادة في الخلايا اللمفاوية (4،5 في استعراض). يرجع ذلك إلى آليات متعددة ومتداخلة المشاركة في التعفن ، يحتاج الباحثون نموذجا لشدة الإنتان مناسبة للرقابة من أجل الحصول على نتائج متسقة وقابلة للتكرار.

Protocol

1. الأعور ربط والبزل نموذجا فأرة للالإنتان الإنسان لهذا الإجراء C57BL / 6 تستخدم الفئران (7-9 أسابيع من العمر). تخدير عن طريق حقن فأر intraperitoneally حل الكيتامين 1:1 (75mg/kg) وزيلازين (15mg/kg). كمرجع ?…

Discussion

هنا نعرض بالتفصيل كيفية تنفيذ نموذج CLP في الفئران وتعدل الدرجة من الشدة.

بالمقارنة مع النماذج الحيوانية الأخرى الإنتان ، ويمكن أن يؤديها في أي سلالة CLP الماوس من مختلف الأعمار والجنس. فمن السهل إجراء العمليات الجراحية وغير مكلفة ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من خلال منحة من وزارة الصحة ولاية بنسلفانيا.
وكان الدكتور ميغيل غارسيا توسكانو زميل ما بعد الدكتوراه في جامعة تمبل ، الذي تموله مؤسسة ألفونسو مارتن اسكوديرو خلال هذه الدراسة.
نريد ان نشكر إيليا يوردانوف وKotredes كيفن لصنع شريط الفيديو.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Ketamine Ketaset 0856-2013-01  
Xylazine AnaSed NADA# 139-236  
Insulin syringe 29G Exel 26028  
Silk suture, 6-0 PROLENE Ethicon 8680G  
19G and 25G Needle BD 305186  
Shaver General supply General supply  
Infrared Heating lamp General supply General supply  
Michel wound clips 7mm Roboz Surgical Instr RS-9270  
Ear Loop Mask Fisher Scientific 19-130-4181  
Dissection scissors Roboz Surgical Instr RS-6702  
Betadine solution VWR 63410-992  
Surgical forceps Roboz Surgical Instr RS-5135  
70% Isopropyl alcohol pad Fisher Scientific 22-031-350  
Buprenorphine Bedford Labs 55390-100-10  
Tramadol Sigma-Aldrich 42965  

References

  1. Angus, D. C. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).
  2. Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. The enigma of sepsis. J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).
  3. Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes. Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).
  4. Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. Animal models of sepsis: setting the stage. Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).
  5. Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury. J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).
  6. Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis. J Surg Res. 102, 45-49 (2002).
  7. De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis. Shock. 23, 11-17 (2005).
  8. Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis. Cytokine. 14, 162-169 (2001).
  9. Turnbull, I. R. Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture. Shock. 19, 310-313 (2003).
  10. Miyaji, T. Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice. Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).
  11. Torres, M. B., De Maio, A. An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome. J Surg Res. 125, 88-93 (2005).
  12. Doi, K. AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality. Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).
  13. Wilson, M. A. Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis. J Trauma. 41, 622-627 (1996).
  14. Zanotti-Cavazzoni, S. L. Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis. Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).
  15. Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model. Shock. 34, 250-260 (2010).

Play Video

Cite This Article
Toscano, M. G., Ganea, D., Gamero, A. M. Cecal Ligation Puncture Procedure. J. Vis. Exp. (51), e2860, doi:10.3791/2860 (2011).

View Video