여기서 우리는 문화의 hypoxic 상태를 평가하는 세포 문화와 간단한 테스트에 hypoxia를 유발하는 간단한 방법을 제안합니다.
Hypoxia는 기관, 조직 또는 세포에 산소의 감소 또는 결여로 정의됩니다. 산소 장력의이 감소는 산소의 감소 공급 장치 (원인이 부족한 혈관 네트워크 결함이 혈관과 빈혈을 포함)하거나 공급 장치 (갑자기 높은 세포 증식 률에 의한)에 상대적으로 산소의 증가 소비로 인해 수 . Hypoxia는 1-3, 류마티스 관절염, 죽상 경화증 등 고체 암에서와 같이 physiologic 또는 pathologic 수 있습니다 … 각 조직과 세포는이 새로운 조건에 적응하기 위해 다른 기능이 있습니다. hypoxia 동안, hypoxia inducible 요인 알파 (HIF)를 안정화와 같은 산소 4 angiogenesis 또는 운송에 관련된 사람 등 다양한 유전자를 조절합니다. 이 단백질의 안정화 따라서 HIF가 일상적으로 hypoxia 5-7위한 화면으로 사용됩니다 감지, hypoxia의 특징이다.
이 문서에서는, 우리는 이들 세포의 hypoxic 상태를 평가하는 포유 동물 세포 배양 및 간단한 테스트에 hypoxia를 유도하기 위해 두 가지 간단한 방법을 제안합니다.
hypoxic 조건에서 세포 증식과 생존은 세포 종류에 따라 많이 다릅니다. 따라서, 당신은 전화 번호 또는 귀하의 실험에 대한 충분한 세포 / 단백질을해야합니다 있는지 확인으로 시작 문화 접시의 수를 조정해야합니다.
코발트 클로라이드 방법은 저렴한 가격과 빠른 될 수있는 장점이 있습니다. 이 제품은 HIF-1/3α 유도하여 hypoxia 일일뿐만 아니라이 제품은 그것의 '모방 – 독립적으로 특정 세포의 기능과 표현형에 미칠 수있는 다른 어떤 효과를 선택하여 프로젝트에 맞게되어 있는지 확인, 다른 유전자를 조절 할 수 hypoxic "효과. 또한 hypoxia을 모방하는 데 사용되는 다른 약물은 Deferoxamine 메실레이트 (돌연사 했을까, 100 μm의 최종 농도에서 사용)입니다. 이러한 약물의 사용은 experimentator가 "hypoxic 상태"에 영향을주지 않고 문화 판 / 요리 / 술병을 여러 번 열 수 있습니다.
가스 혼합물에 포함된 산소의 수준은 hypoxia 값이 조직 및 세포 유형에 따라 다릅니다로 실험 및 세포 종류에 따라 달라질 수 있습니다. 사실, 몇몇 세포는 O 2 기타 필요한 1 % 미만 O 2 hypoxic로 5 % hypoxic 있습니다. 5 % CO 2는 문화의 산도를 안정화하기 위해 가스 혼합물에 추가, 가스의 나머지 부분은 보통 질소이다.
Hypoxic 챔버 스는 독립적으로 산소 장력의 세포 행동을 대체 할 수 의약품을 사용하지 않는 장점이 있습니다. 산소가 각 오프닝에서 챔버를 다시 입력하고 따라서 hypoxia을 lessens 그러나, 실험의 모든 유형의 작업을 수행할 수 있습니다. 귀하의 실험이 요소를 고려해야한다 hypoxia / 다시 산소 일부 세포 유형에 영향을 미칠 수있는 특정 조건입니다. 대안 hypoxia 워크 스테이션 (미리 혼합 가스 탱크 또는 가스 혼합 시스템에 연결된) 또는 실험 미디어를 변경하고 지속적인 hypoxic 환경에서 세포를 조작할 수 있도록 큰 hypoxia 인큐베이터 (글러브 박스와 hypoxia 처리 챔버)를 사용하는 것입니다. 다양한 hypoxic 챔버 스는 지난 10 년간 상용화되었습니다 귀하의 연구실에 사용, 프로젝트, 공간, 크기 및 예산에 따라 선택되어야합니다. 항상 올바른 문화 조건을 보장하여 챔버 잘 사용하고 조건을 보장합니다. 일반적으로 챔버를 사용하는 경우, hypoxia의 수준은 다양한 가스 혼합 (예 : 1퍼센트, 5 % 10 % 산소)를 선택하여 변조된 수 있습니다.
HIF – 1α의 검색에 대해서는 아는 것이 중요합니다 일부 암 세포주 normoxia에서 HIF – 1α 표현. 그러므로 이러한 세포 라인에서 HIF의 기초 수준을 결정하는 normoxia – 컨트롤을 사용하는 것이 중요합니다. HIF – 1α는 또한 세포 자극이나 스트레스 다음 이외의 악성 세포 normoxia에 존재하실 수 있습니다. 이것은 또한이 세포는 굶어 죽었을 경우 발생하는 휴대폰의 문화가 적절하게 공급, 유지되어 있는지 확인 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
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Anti-HIF-1α | Invitrogen | 458400 |
Cobalt (II) Chloride | Sigma | C8661-25G |
Incubator Chamber | Billups-rothenberg | MIC-101 |
HRE-Luciferase plasmid | Adgene | Plasmid 26731 |