यहाँ हम सरल सेल संस्कृतियों और सरल परीक्षणों में hypoxia प्रेरित करने के लिए संस्कृतियों के hypoxic स्थिति का मूल्यांकन तरीकों का प्रस्ताव है.
Hypoxia कमी या अंगों, ऊतकों, या कोशिकाओं में ऑक्सीजन की कमी के रूप में परिभाषित किया गया है. ऑक्सीजन तनाव की यह कमी ऑक्सीजन (कारण अपर्याप्त रक्त वाहिका नेटवर्क, दोषपूर्ण रक्त वाहिका, और एनीमिया शामिल हैं) में एक कम आपूर्ति या ऑक्सीजन की एक वृद्धि की खपत की आपूर्ति (अचानक उच्च सेल प्रसार की दर की वजह से) के सापेक्ष के लिए कारण हो सकता है है . Hypoxia शारीरिक या जैसे 1-3, रुमेटी गठिया, atherosclerosis, आदि के रूप में ठोस कैंसर में वैकृत हो … प्रत्येक ऊतकों और कोशिकाओं को एक अलग क्षमता के लिए इस नई शर्त के लिए अनुकूल हो सकता है. Hypoxia के दौरान, hypoxia inducible कारक अल्फा (HIF) स्थिर है और angiogenesis या 4 ऑक्सीजन के परिवहन में शामिल लोगों के रूप में विभिन्न जीनों को नियंत्रित. इस प्रोटीन की स्थिरीकरण hypoxia की एक बानगी है, इसलिए का पता लगाने HIF नियमित hypoxia 5-7 के लिए स्क्रीन के लिए प्रयोग किया जाता है .
इस अनुच्छेद में, हम दो सरल स्तनधारी सेल संस्कृतियों और सरल परीक्षणों में hypoxia प्रेरित करने के लिए इन कोशिकाओं की hypoxic स्थिति का मूल्यांकन तरीकों का प्रस्ताव है.
सेल और hypoxic परिस्थितियों में प्रसार व्यवहार्यता एक बहुत सेल प्रकार के आधार पर बदलती हैं. इसलिए, आप सेल नंबर या संस्कृतियों प्लेटें आप सुनिश्चित करें कि आप अपने प्रयोगों के लिए पर्याप्त कक्षों / प्रोटीन होगा बनाने के साथ शुरू की संख्या को समायोजित करना चाहिए.
कोबाल्ट क्लोराइड विधि के लिए सस्ती और तेजी से लाभ है. यह उत्पाद है HIF-1/3α inducing द्वारा hypoxia mimics लेकिन भी अन्य जीन को नियंत्रित कर सकते हैं, यकीन है कि इस उत्पाद के अन्य क्या प्रभाव यह समारोह और अपने विशेष कोशिकाओं के फेनोटाइप पर "नकल के स्वतंत्र रूप से हो सकता है की जाँच द्वारा अपनी परियोजना के लिए अनुकूलित है hypoxic प्रभाव ". एक और भी hypoxia नकल के लिए इस्तेमाल दवा Deferoxamine mesylate (डीएफओ, 100 सुक्ष्ममापी अंतिम एकाग्रता में प्रयोग किया जाता) है. इन दवाओं का उपयोग experimentator "hypoxic हालत को प्रभावित किए बिना संस्कृति की थाली / फ्लास्क / पकवान कई बार खोलने के लिए अनुमति देता है.
ऑक्सीजन गैस मिश्रण में निहित के स्तर अपने प्रयोगों और सेल प्रकार के आधार पर hypoxia के मूल्यों के रूप में ऊतकों और सेल प्रकार के आधार पर भिन्न भिन्न हो सकते हैं. दरअसल, कुछ कोशिकाओं को 5% में hypoxic हे 2 अन्य की जरूरत है कम से कम 1% 2 हे hypoxic जा रहे हैं. 5% सीओ 2 गैस मिश्रण करने के लिए जोड़ा जाता है संस्कृतियों के पीएच को स्थिर, गैस के बाकी आमतौर पर नाइट्रोजन है.
Hypoxic कक्षों दवाओं है कि सेल व्यवहार ऑक्सीजन तनाव की स्वतंत्र वैकल्पिक कर सकते हैं का उपयोग नहीं करने का लाभ है. हालांकि, प्रयोग के सभी प्रकार के ऑक्सीजन के रूप में प्रत्येक खोलने पर कक्ष फिर से प्रवेश करती है और इस तरह hypoxia कम किया जा सकता है. आप अपने प्रयोगों में इस पहलू पर विचार करना चाहिए; / पुनः oxygenation hypoxia एक विशिष्ट शर्त है कि कुछ प्रकार की कोशिकाओं को प्रभावित कर सकते हैं. एक विकल्प के लिए hypoxia (पूर्व मिश्रित गैस टैंक या गैस मिश्रण प्रणाली के लिए जुड़ा) workstations या बड़ा hypoxia इनक्यूबेटर (दस्ताना बॉक्स के साथ hypoxia प्रसंस्करण चैम्बर) है कि प्रयोग मीडिया को बदलने के लिए और सतत hypoxic वातावरण में कोशिकाओं में हेरफेर की अनुमति देता का उपयोग करने के लिए है. विभिन्न hypoxic कक्षों पिछले एक दशक से अधिक commercialized है और अपने प्रयोगशाला, परियोजनाओं, अंतरिक्ष, आकार बजट, और प्रयोग किया जाता अनुसार चुना जाना चाहिए. हमेशा अच्छा है और अपने कक्ष के उपयोग की स्थिति सुनिश्चित करने के लिए सही संस्कृति शर्तों की गारंटी है. सामान्य में एक कक्ष का उपयोग करते समय, hypoxia के स्तर पर विभिन्न गैस घोला जा सकता है (यानी 1%, 5% 10% ऑक्सीजन) का चयन करके modulated किया जा सकता.
HIF-1α का पता लगाने के बारे में, यह जानना महत्वपूर्ण है कि कुछ कैंसर कोशिका लाइन normoxia में व्यक्त HIF-1α. इसलिए यह महत्वपूर्ण है के लिए एक normoxia नियंत्रण का उपयोग करने के लिए इन सेल लाइनों में HIF के बेसल स्तर निर्धारित है. HIF-1α भी सेल उत्तेजना या तनाव के बाद गैर घातक कोशिकाओं में normoxia में मौजूद हो सकता है. यह भी अगर इन कोशिकाओं को भूखे हैं हो सकता है यकीन है कि अपने सेल संस्कृतियों ठीक और फ़ीड कर रहे हैं बनाए रखा.
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
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Anti-HIF-1α | Invitrogen | 458400 |
Cobalt (II) Chloride | Sigma | C8661-25G |
Incubator Chamber | Billups-rothenberg | MIC-101 |
HRE-Luciferase plasmid | Adgene | Plasmid 26731 |