Summary
व्हार्टन वाहिनी के माध्यम से माउस अवअधोहनुज लार ग्रंथि की cannulation के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है. इस प्रयोग के लिए, trypan नीले समाधान एक डायर के रूप में प्रयोग किया जाता है प्रदर्शित करने के लिए कैसे इस तकनीक को प्रभावी ढंग से लक्षित ग्रंथि में सुई लेनी पहुँचाती है, और लार की गिल्टी के उत्थान के लिए एक संभावित नैदानिक दवा / सेल थेरेपी के रूप में इस नए दृष्टिकोण की विश्वसनीयता का सुझाव.
Abstract
गंभीर लार ग्रंथि hypofunction अक्सर Sjögren सिंड्रोम और जो उनके सिर और गर्दन के क्षेत्रों में कैंसर के इलाज के लिए चिकित्सीय विकिरण प्राप्त उन के साथ रोगियों में पाया जाता है. रोगियों (शुष्क मुँह) xerostomia, dysphagia (बिगड़ा चबाने और निगलने) के रूप में अनुभव के लक्षणों के दोनों गुटों, गंभीर दंत क्षय, बदल स्वाद, ऑरो ग्रसनी संक्रमण (कैंडिडिआसिस), mucositis, दर्द और बेचैनी.
Hypo समारोह लार ग्रंथि के उपचार के लिए पुनर्योजी चिकित्सा के एक नवीन दृष्टिकोण रुपये Redman, ई Mezey एट अल 2009 में अनुमान लगाया है: स्टेम सेल ग्रंथि में सीधे जा सकता है cannulation द्वारा बिगड़ा के कार्यों को पुनर्जीवित करने में एक शक्तिशाली विधि के रूप में जमा अंग. मुमकिन है, माइग्रेट विदेशी स्टेम कोशिकाओं ग्रंथियों कोशिकाओं मेजबान लार ग्रंथि के हिस्से के रूप में समारोह में अंतर होगा. इसके अलावा, इस cannulation तकनीक नैदानिक जीन स्थानांतरण आवेदन के लिए एक समीचीन और प्रभावी वितरण पद्धति है.
यहाँ हम व्हार्टन वाहिनी (चित्र 1) के माध्यम से माउस अवअधोहनुज लार ग्रंथि पर cannulation प्रक्रिया प्रदर्शन में शामिल कदम वर्णन. C3H चूहों (चार्ल्स नदी, मॉन्ट्रियल, QC, कनाडा), जो मैकगिल विश्वविद्यालय पशु संसाधन केन्द्र पर साफ पारंपरिक शर्तों के तहत रखा गया है इस प्रयोग के लिए इस्तेमाल किया जाता है. सभी प्रयोगों विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है और जानवर की देखभाल पर कनाडा परिषद के दिशा निर्देशों के साथ अनुसार में थे.
इस प्रयोग के लिए, एक trypan नीले समाधान ग्रंथि में व्हार्टन वाहिनी के उद्घाटन के एक polyethylene ट्यूब के अंदर encased एक 29 गेज सुई के साथ एक इंसुलिन सिरिंज का उपयोग कर के माध्यम से संचार होता है. इसके बाद, माउस को दिखाने के लिए कि सुई लेनी ग्रंथि में सफलतापूर्वक माइग्रेट dissected है.
Protocol
1. प्रक्रियात्मक विवरण
- Subcutaneously प्रत्येक चूहे में 1 μl / 0.5 मिलीग्राम / एमएल atropine सल्फेट monohydrate के जी शरीर के वजन (# +११,३३० बिल्ली, Fluka, संयुक्त राज्य अमरीका) सुई सुई लेनी के आंदोलन में खलल न डालें लार स्राव को रोकने के.
- एक 100 ketamine मिलीग्राम / एमएल और 20 मिलीग्राम / एमएल xylazine समाधान (फीनिक्स वैज्ञानिक, ए.आर., संयुक्त राज्य अमेरिका) के 1 / μl जी शरीर के वजन के साथ प्रत्येक माउस anesthetize इंजेक्शन अंतर peritoneal (आईपी)
- उदर की स्थिति में एक कस्टम निर्मित प्लास्टिक मंच पर माउस प्लेस: दाढ़ की हड्डी का incisors एक धातु के तार पर बंद कर रहे हैं, और जबड़े incisors एक लोचदार तार पर झुका रहे हैं क्रम में मुँह खोलने की पकड़.
- एक 29 गेज सुई (# 600,145 बिल्ली, टायको हेल्थकेयर, MA, संयुक्त राज्य अमरीका) 0.58 मिमी व्यास पॉलीथीन ट्यूब (चित्र 2 427410; बिल्ली, Becton Dickinson, एमडी, संयुक्त राज्य अमेरिका) के अंदर रखा के साथ एक इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करें. पॉलीथीन ट्यूब एक 29 गेज सुई की नोक पर 5mm डाला जाता है. सुई एक कठोर व्हार्टन वाहिनी में पॉलीथीन ट्यूब कदम गाइड के रूप में प्रयोग किया जाता है. पॉलीथीन ट्यूब वाहिनी के अंदर 3-5 मिमी डाला जाता है. ध्यान दें कि केवल पॉलीथीन ट्यूब लार ग्रंथि नली में प्रवेश करती है, जबकि सुई वाहिनी के बाहर रहता है. अवअधोहनुज ग्रंथि में व्हार्टन वाहिनी है, जो सही जीभ के नीचे स्थित है के माध्यम से फ़िल्टर्ड 0.4% trypan नीले दाग समाधान (15,250 # बिल्ली, Gibco, संयुक्त राज्य अमेरिका) के 50ul इंजेक्षन. जलसेक सिरिंज पिस्टन पर सकारात्मक दबाव के साथ तेजी से वितरित किया जाता है, उंगली पिस्टन पर लगाने की सब के बाद भी बनी हुई है ग्रंथि के लिए दिया गया है, आदेश में निषेचन के एक backflow को रोकने के लिए इंट्रा मौखिक रूप से. trypan नीले समाधान के लिए तकनीक का प्रदर्शन डाई के रूप में वीडियो में प्रयोग किया जाता है.
- trypan नीले समाधान के इंजेक्शन fter, माउस विच्छेदन के लिए पहले euthanized किया गया था. लार ग्रंथि शल्य चिकित्सा के क्रम में उजागर हो रहा है निर्धारित करने के लिए सुई लेनी की कितना वास्तव में ग्रंथि में बने हुए हैं.
2. प्रतिनिधि परिणाम:
बाद सुई लेनी अंतःक्षिप्त थे, माउस को शल्य चिकित्सा के बाद cannulated लार ग्रंथि का पर्दाफाश करने के लिए dissected किया गया था. छवि-2 पर दिखाया, व्हार्टन वाहिनी के अंधेरे रंगाई सबूत है कि trypan नीले समाधान सफलतापूर्वक infused गया था प्रदान करता है.
चित्रा 1 माउस अवअधोहनुज ग्रंथि के Cannulation.
चित्रा 2. Polyethylene ट्यूब एक 29 गेज सुई की नोक के आसपास encased है . सिरिंज सुई एक कठोर व्हार्टन वाहिनी में पॉलीथीन ट्यूब कदम गाइड के रूप में प्रयोग किया जाता है. पॉलीथीन ट्यूब वाहिनी के अंदर डाला जाता है (cannulated) 3-5 मिमी. ध्यान दें कि केवल पॉलीथीन ट्यूब लार ग्रंथि नली में प्रवेश करती है, जबकि सुई वाहिनी के बाहर रहता है.
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Discussion
कठिनाई इस cannulation पद्धति का उपयोग करके इंजेक्शन समाधान की backflow को रोकने है. यहां तक कि अगर trypan नीले समाधान अस्थायी रूप से लार ग्रंथि में सफलतापूर्वक माइग्रेट, लार स्राव सुई लेनी के साथ हस्तक्षेप और trypan नीले समाधान की ग्रंथि के बाहर backflow के कारण हो सकता है. एक एहतियात के रूप में, atropine का उपयोग करने के लिए लार के स्राव को बाधित करने के लिए इसके अलावा में, polyethylene प्रवेशनी व्हार्टन वाहिनी और 60 सेकंड के लिए आयोजित के बाद सुई लेनी जमा किया गया है सिरिंज के पिस्टन में रहना चाहिए. यह संचार समाधान का सबसे ग्रंथि के भीतर रहने के लिए अनुमति देगा.
पारंपरिक, प्रणालीगत आवेदन, अर्थात् दवाओं / कोशिकाओं की अंतःशिरा इंजेक्शन (चतुर्थ), लार ग्रंथि के उत्थान के लिए एक नैदानिक दृष्टिकोण के रूप में इस्तेमाल किया गया है. नसों के द्वारा इंजेक्शन सुई लेनी संपूर्ण संचार प्रणाली के माध्यम से यात्रा, केवल दवाओं / कोशिकाओं के कुछ लक्षित ग्रंथियों में विस्थापित करने के लिए अनुमति होगी. इस पारंपरिक विधि की तुलना में, स्थानीय आवेदन, कि दवाओं / cannulation प्रक्रिया के माध्यम से कोशिकाओं के इंजेक्शन कर्णमूलीय, अवअधोहनुज, और sublingual लार ग्रंथियों के कार्यों को पुनर्जीवित करने में एक और अधिक प्रत्यक्ष और प्रभावी तरीके के रूप में माना जा सकता है. इसलिए, इस cannulation तकनीक माउस लार ग्रंथि के पुनर्योजी चिकित्सा के लिए एक विश्वसनीय मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, और एक भविष्य की संभावना के रूप में, इस प्रक्रिया नैदानिक आवेदन के लिए एक समीचीन तरीका हो सकता है.
यह इस लेख दृश्य के लिए एक बहुत खुशी है जो लार ग्रंथि की पुनर्योजी चिकित्सा में आगे के अध्ययन में रुचि रखते हैं छात्रों और शोधकर्ताओं के लिए एक प्रभावी उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा होगा.
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Disclosures
सभी प्रयोगों विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है और जानवर की देखभाल पर कनाडा परिषद के दिशा निर्देशों के साथ अनुसार में थे.
Acknowledgments
लेखक डॉ. एना Cotrim तकनीकी परामर्श के लिए और उपकरणों के लिए Murshed डा. Monzur आभारी हैं. इस काम के हिस्से में स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा के लिए द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
