Ce protocole décrit notamment l'extraction de IgY totales du jaune d'oeuf par précipitation de polyéthylène glycol et donne des informations générales sur la technologie IgY.
Les poules peuvent être immunisés par la vaccination au moyen d'im (Musculus pectoralis, gauche et droite, le volume d'injection 0,5-1,0 ml) ou par l'intermédiaire de Gene-Gun plasmide-immunisation. Charge sur l'immunogénicité de l'antigène, d'anticorps de haute-titres (jusqu'à 1:100.000 – 1:1,000,000) peuvent être obtenus après seulement une ou 3 – 4 immunisations stimuler. Normalement, une poule pond des oeufs en continu pendant environ 72 semaines, par la suite la capacité diminue de pose. Ce protocole décrit l'extraction des IgY totale de jaune d'œuf par le biais d'une procédure de précipitations (PEG. Polson et al. 1980). La méthode comporte deux étapes importantes. Le premier est l'élimination des lipides et la seconde est la précipitation de l'IgY totale à partir du surnageant de la première étape. Après dialyse contre un tampon (PBS normalement) l'AGI-extrait peut être conservé à -20 ° C pendant plus d'un an. La pureté de l'extrait est d'environ 80%, le total des IgY par oeuf varie de 40-80 mg, dépendant de l'âge de la poule pondeuse. Les augmentations de la teneur totale en IgY avec l'âge de la poule d'environ 40 mg / oeuf jusqu'à 80 mg / oeuf (concernant le PEG précipitations). La capacité de ponte d'une poule par an est d'environ 325 œufs. Cela signifie une récolte totale potentielle de 20 g au total IgY / an basé sur un contenu IgY moyenne de 60 mg d'œuf IgY / total (voir tableau 1).
Le choix d'une méthode de purification IgY approprié est influencée par l'échelle de la purification (laboratoire ou industrielle), la rentabilité, de la technologie (matériel de laboratoire), et l'impact sur l'environnement (gestion des déchets). Diverses méthodes d'extraction ont été IgY examiné en détail par De Meulenaer & Huyghebaert (2001, pour revue, voir aussi Schade et al. 2005). En général, ces méthodes peuvent être divisés en trois groupes principaux:
La pureté d'une préparation IgY peut être augmentée par une combinaison de méthodes, par exemple, le PEG précipitations peuvent être combinés avec la chromatographie d'affinité. Dans certains cas, selon l'application finale, un extrait d'eau de IgY est suffisante pour obtenir de bons résultats (Akita & Nakai, 1993). Selon notre expérience, l'AGI-échantillon, nous obtenons par PEG-précipitation a très bien fonctionné dans beaucoup de différents dosages immunologiques. En standardisant la méthode de précipitation PEG-un assistant technique est capable de traiter environ 84 œufs par semaine, ce qui correspond à un montant de IgY totales entre 4 et 7 g par semaine. Un simple calcul: une poule pondeuse est immunisé avec un antigène. Après une vaccination stimuler la poule quelques produit des anticorps spécifiques (Ab) avec un titre de 1:50,000 pendant une période de 30 jours. 30 œufs x 2 ml d'extrait IgY (voir protocole et Fig. 3) correspond à 60 ml IgY total, qui à son tour correspond à une dilution de Ab-3000 l (la capacité d'un seau est de 10 l), ce qui signifie avec 3.000 l de la solution AB 300 seaux peuvent être remplies. Ainsi, en vue d'une telle quantité énorme Ab-il pas un problème pour stocker une Ab-bassin de qualité constante et de spécificité. Cette technique réduit la variabilité de charge / lot contraire observé dans polyspécifique Ab.
Malgré l'aspect quantitatif, IgY Ab ont d'autres avantages par rapport aux IgG des mammifères: Pas d'activation du système du complément chez les mammifères, aucune réactivité croisée avec HAMA (anticorps humain anti-souris), les facteurs rhumatoïdes ou humaine antigènes de groupe sanguin (manque de heteroagglutinins).
Un avantage remarquable de IgY-Ab est la distance phylogénétique dits. Distance phylogénétique est la raison pour laquelle les différences entre les décrit souvent les spécificités Ab des mammifères et des poules, même lorsque l'identique vaccinés. En plus de différences entre les mammifères et le système immunitaire aviaire eux-mêmes, les différences dans le développement phylogénétique de ces deux classes d'animaux contribue aux spécificités différentes Ab. Plusieurs auteurs ont rapporté que les poulets produisent souvent Abs contre phylogénétiquement très conservées des protéines de mammifères ou des peptides plus efficacement que ne le lapin (pour revue, voir Schade et a. 2005). En conséquence, un antigène conservé peut rester "masqués" pour le système de lapin immunitaire, et provoquer ainsi qu'une faiblesse ou un "silence" de réponse. Par ailleurs, si les poulets et les lapins sont immunisés avec le même antigène de mammifères, très souvent les poulets répondre avec un Ab-spécificité qui peut rarement être obtenue chez le lapin. Aussi l'aspect de bien-être animal est important puisque les Ab sont non invasive extrait de jaune d'oeuf. En combinaison avec Gene-Gun (plasmide) vaccination de l'IgY-production est totalement non-invasive (Witkowski et al. 2009).
En conclusion, la production d'Ab dans les poules et les IgY extraction au moyen de PEG-précipitation est très rentable et les résultats dans Ab très spécifique avec des titres stables jusqu'à 1:1,000,000. En raison de la distance phylogénétique entre Aves et Mammalia, de poulet sont capables de produire Ab spécifiques contre les antigènes hautement conservée chez les mammifères, contrairement aux lapins par exemple. La quantité extraordinaire d'Ab obtenus par IgY technologie ouvre la porte aussi à l'aide IgY-Ab dans la médecine humaine et vétérinaire à des fins thérapeutiques / prophylactiques.
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par une subvention du ministère fédéral allemand de l'Education et la Recherche (Projet BiGRUDI [Bi ologische G efahrenlagen: R isikobewertung, u ltraschnelle D etektion und von j'ai dentifizierung bioterroristisch relevanten Agenzien, 13N9594]). Nous remercions B. Diemar (Charité-Universitätsmedizin Berlin, Institut für Pharmakologie) pour l'assistance technique excellente.