इस प्रोटोकॉल polyethylene glycol वर्षा के माध्यम से अंडे की जर्दी से कुल IgY की विशेष निकासी में वर्णन करता है और IgY प्रौद्योगिकी के बारे में सामान्य जानकारी देता है.
मुर्गियाँ im (pectoralis मस्कुलस, बाएँ और दाएँ, इंजेक्शन की मात्रा 0.5-1.0 मिलीलीटर) टीकाकरण के माध्यम से या जीन गन प्रतिरक्षण – प्लाज्मिड के माध्यम से प्रतिरक्षित किया जा सकता है है. प्रतिजन के प्रतिरक्षाजनकता पर निर्भर करता है, उच्च एंटीबॉडी titres (अप करने के लिए 1:100,000 – 1:1,000,000) केवल एक या 3 के बाद हासिल किया जा सकता है – 4 बढ़ावा देने के टीकाकरण. आम तौर पर, एक मुर्गी अंडे लगातार लगभग 72 हफ्तों के लिए, देता है उसके बाद बिछाने की क्षमता घट जाती है. इस प्रोटोकॉल एक तेज़ी प्रक्रिया के माध्यम से (PEG. Polson एट अल. १९८०) द्वारा अंडे की जर्दी से कुल IgY की निकासी का वर्णन करता है . विधि के दो महत्वपूर्ण कदम शामिल है. पहले एक lipids के हटाने है और दूसरा एक कदम की सतह पर तैरनेवाला से कुल IgY की तेज़ी है. एक साल से भी अधिक के लिए एक बफर (सामान्य पीबीएस) के खिलाफ डायलिसिस के बाद IgY निकालने -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है. निकालने की शुद्धता 80% के आसपास है, अंडे प्रति कुल IgY 40-80 मिलीग्राम से बदलता है, बिछाने मुर्गी की उम्र पर निर्भर है. लगभग 40 मिलीग्राम / 80 मिलीग्राम / अंडा (खूंटी तेज़ी से संबंधित) अंडे से कुल IgY मुर्गी के उम्र के साथ सामग्री बढ़ जाती है. प्रति वर्ष एक मुर्गी की बिछाने की क्षमता 325 अंडे के आसपास है. यह कुल 20 ग्राम कुल IgY / 60 मिलीग्राम कुल IgY / अंडा (देखें तालिका 1) के एक मतलब IgY सामग्री के आधार पर वर्ष के एक संभावित फसल का मतलब है.
एक उपयुक्त IgY शुद्धि विधि का चुनाव शुद्धि (प्रयोगशाला या औद्योगिक), लागत प्रभावशीलता, तकनीक (प्रयोगशाला उपकरण), और पर्यावरण (कचरा प्रबंधन) पर प्रभाव के पैमाने से प्रभावित है. विभिन्न IgY निष्कर्षण तरीकों में विस्तार से डी Meulenaer और Huyghebaert (2001, समीक्षा के लिए भी Schade एट अल 2005.) द्वारा की समीक्षा की गई. सामान्य में, इन तरीकों को तीन प्रमुख समूहों में विभाजित किया जा सकता है:
एक IgY तैयारी की पवित्रता तरीकों का एक संयोजन द्वारा बढ़ाया जा सकता है, उदाहरण के लिए, खूंटी वर्षण आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी के साथ संयुक्त किया जा सकता है है. कुछ उदाहरणों में, अंतिम आवेदन के आधार पर, IgY का पानी निकालने के लिए अच्छे परिणाम (अकिता और Nakai 1993) को प्राप्त करने के लिए पर्याप्त है. हमारे अनुभव के अनुसार, IgY नमूना हम खूंटी – वर्षण द्वारा प्राप्त विभिन्न प्रतिरक्षाविज्ञानी assays के एक बहुत में बहुत अच्छी तरह से काम किया. खूंटी – वर्षण विधि का मानकीकरण करके एक तकनीकी सहायक के लिए प्रति सप्ताह लगभग 84 अंडे, जो 4 और 7 ग्राम प्रति सप्ताह के बीच कुल IgY की राशि से मेल खाती है है की प्रक्रिया में सक्षम है. एक साधारण गणना: एक बिछाने मुर्गी एक प्रतिजन के साथ प्रतिरक्षित किया गया है. कुछ को बढ़ावा देने के टीकाकरण के बाद मुर्गी 1:50,000 के एक titre के साथ 30 दिनों की अवधि के दौरान विशिष्ट एंटीबॉडी (अब) का उत्पादन. 30 एक्स 2 मिलीलीटर IgY निकालने अंडे (प्रोटोकॉल और छवि 3. देखें) 60 मिलीलीटर कुल IgY, जो बारी में 3,000 एल के अब के कमजोर पड़ने (एक बाल्टी की क्षमता 10 एल है) से मेल खाती है कि 3,000 एल के साथ इसका मतलब से मेल खाती है है अब समाधान के 300 बाल्टी भरा जा सकता है. तो, इतनी बड़ी अब मात्रा के दृश्य में यह कोई समस्या लगातार गुणवत्ता और विशिष्टता के अब पूल की दुकान है. इस तकनीक प्रभारी / बहुत अन्यथा polyspecific अब में मनाया परिवर्तनशीलता को कम कर देता है.
स्तनधारी पूरक व्यवस्था के कोई सक्रियण, HAMA (मानव विरोधी माउस एंटीबॉडी), रुमेटी कारकों या मानव रक्त समूह प्रतिजनों (heteroagglutinins की कमी) के साथ कोई पार जेट: मात्रा के पहलू के बावजूद, IgY अब स्तनधारी आईजीजी के साथ तुलना में आगे फायदे हैं.
IgY – अब के एक उत्कृष्ट लाभ तथाकथित वंशावली दूरी है. जातिवृत्तिक दूरी अब स्तनधारियों और मुर्गियों के specificities के बीच अक्सर वर्णित अंतर के लिए कारण है, जब भी हूबहू प्रतिरक्षित. स्तनधारी और एवियन प्रतिरक्षा प्रणाली स्वयं के बीच मतभेद के अलावा, वंशावली के विकास में इन दो जानवरों की कक्षाओं में मतभेद अलग अब specificities के लिए योगदान देता है. कई लेखकों को सूचित किया है कि मुर्गियों अक्सर जातीवृति के आधार पर उच्च संरक्षित स्तनधारी प्रोटीन या पेप्टाइड्स के खिलाफ Abs अधिक कुशलता से खरगोश (समीक्षा के लिए देख Schade एट ए 2005) की तुलना में उत्पादन. एक परिणाम के रूप में, एक संरक्षित प्रतिजन "नकाबपोश" खरगोश प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए रह सकते हैं, और इस प्रकार केवल एक कमजोर या एक "मूक" प्रतिक्रिया का कारण. इसके अलावा, अगर मुर्गियों और खरगोशों ही स्तनधारी प्रतिजन के साथ प्रतिरक्षित कर रहे हैं, बहुत बार मुर्गियों एक अब – विशिष्टता है कि शायद ही कभी खरगोश में प्राप्त किया जा सकता है के साथ जवाब. इसके अलावा पशु कल्याण के पहलू महत्वपूर्ण है क्योंकि अब गैर invasively अंडे की जर्दी से निकाली गई. जीन गन प्रतिरक्षण (प्लाज्मिड) के साथ संयोजन में IgY उत्पादन पूरी तरह से गैर इनवेसिव (Witkowski एट अल 2009) है .
अंत में, मुर्गियाँ और खूंटी – वर्षण की माध्यम से IgY-निष्कर्षण में अब के उत्पादन बहुत लागत प्रभावी है और स्थिर titres के साथ 1:1,000,000 के लिए अत्यधिक विशिष्ट अब में परिणाम है. एविस और स्तनीयजन्तु बीच वंशावली दूरी के कारण, चिकन जैसे खरगोश के लिए इसके विपरीत में अत्यधिक संरक्षित स्तनधारी प्रतिजनों के खिलाफ विशिष्ट अब उत्पादन करने में सक्षम हैं. अब की असाधारण राशि IgY प्रौद्योगिकी द्वारा प्राप्त दरवाजा भी खुल चिकित्सीय / रोगनिरोधी प्रयोजनों के लिए मानव और पशु चिकित्सा में IgY – अब का उपयोग करने के लिए.
The authors have nothing to disclose.
इस काम के जर्मन संघीय मंत्रालय शिक्षा और अनुसंधान से एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था (परियोजना BiGRUDI [द्विपक्षीय ologische जी efahrenlagen: आर isikobewertung, यू ltraschnelle डी etektion und मैं dentifizierung वॉन bioterroristisch relevanten Agenzien, 13N9594] ). हम उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए बी Diemar (Charité Universitätsmedizin बर्लिन, Institut für Pharmakologie) धन्यवाद.