幼虫の心臓の解剖、少年と大人ゼブラフィッシュ、ゼブラフィッシュ</em
Summary
複数の発達段階におけるゼブラフィッシュの心臓の解剖と分離のための明確な、標準化された方法が説明されています。注釈と定量化の手法についても説明します。
Abstract
ゼブラフィッシュは、胚心臓の開発の研究のために有益で実用的なモデル生物となっています（最近のレビュー1-6を参照）、しかし、成人の心臓の開発を通じて、後の胚調べるが70から10に制限されて動作する。成熟と老化の心の変化形態を調べることは少年と大人の心をステージングし、単離するための利用可能な技術の不足によって制限されます。魚の寿命を介して心臓の開発を分析するために、我々は多数の段階でゼブラフィッシュの心臓を解剖し、さらなる分析の11のそれらを撮影する。心臓の形態学的特徴は、容易に定量化することができると、個々の心は、さらに標準的な方法のホストで解析することができます。ゼブラフィッシュは、可変レートで成長し、成熟は、魚の成熟のゲージのようなので、後固定、我々の写真と測定の魚の長さを年齢よりも魚のサイズとのより良い相関する。このプロトコルは、30mmのSLとVL 1mm以上大きいと、大人に100μmの心室の長さの心（VL）と幼虫3.5ミリメートルの標準長さ（SL）に至るまでゼブラフィッシュの2つの異なる、サイズ依存解剖の技術を、、説明しています。仔魚と成魚では全く異なる身体や臓器の形態を持っている。幼虫は唯一大幅に小さくはない、彼らは以下の顔料を持っており、各器官は視覚的に識別することは非常に困難です。このような理由から、我々は明確な解剖の技術を使用してください。
我々は安楽死の直後に解剖の心には、次の固定を除去心と比較して心房のような非常に緩いとバルーンで、より多くの変数形態を持っていることを発見したように我々は、事前に解剖の固定手順を使用する。前の解剖に固定された魚は、 生体の形態とチャンバーの位置（データは示さず） に保持されます。私たちは、心臓全体を視覚化できるとするときに心臓の開発の初期段階で特に有用であるtwu34（12）、：加えて、デモンストレーションの目的のために、我々は、心臓（心筋）特定のGFPトランスジェニックTgは（GFP myl7）を活用する形態は、周囲の組織から少なく明瞭である。心臓の解剖は、in situハイブリダイゼーション、免疫組織化学、RNAの抽出または後の胚ゼブラフィッシュで簡単に他の分析方法で使用して心臓の開発と成熟の根底にある細胞と分子生物学のさらなる分析を行います。このプロトコルは、心臓の開発の成熟と老化の研究のための貴重なテクニックを提供します。
Protocol
Discussion
後胚魚のゼブラフィッシュの心臓の解剖のためのこれらのメソッドは、無傷の心を完全に除去することができます。この手法は単純で、心臓の損傷を防止する外部削減のためのガイドを提供していますが、着実に手は小さい魚のために不可欠です。
解剖時の重要なステップは、心臓がこの嚢に直接そのまま銀色の心膜を特定することです。心膜を視覚化することはボデ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
マリーBirne、Areti Tsiola、JaymieベスとArelysウリベのおかげ。この作品は、CUNY研究財団、ハワードヒューズ医学研究所のグラントのサマープログラム学部生用（平）とNIH RO3 41702-00-01によって部分的にサポートされていました。研究はまた、クイーンズカレッジによってサポートされていましたし、実験の一部は、イメージングのための中核施設、クイーンズ大学で細胞分子生物学からの機器で行われた。
Materials
| Material | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehyde | EMD | PX0055 | .04g/mL in PBS |
| Forceps #55 | FST | 11295-51 | |
| Micro-scissors | FST | 15005-08 | |
| Pin holder | FST | 26016-12 | |
| Micro-needles | FST | 10130-10 | |
| Nutrient Agar | BBL | 11472 | 23g/L in distilled H2O |
| Petri dishes | BD Falcon | 351029 | |
| PCR 8-tube strips | USA Scientific | 1402-2500 | |
| Digital Caliper | Fisher Scientific | 14-648-17 |
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