Karsinom ile ilişkili fibroblastlar (CAFs) tümör stroma içinde mevcut miyofibroblastlar zengin, tümör progresyonu sürüş önemli bir rol oynamaktadır. Biz deneysel insan meme fibroblastlar CAFs üretmek için bir coimplantation tümör xengraft modeli geliştirdi. Protokolü tumourigenesis teşvik etmek için bir yeteneği kazandırmak CAF miyofibroblastlar kurmak anlatılmaktadır.
Karsinomlar neoplastik hücreler ve 'stroma' olarak anılan bir kanser olmayan gözü oluşan karmaşık dokulardır. Stroma ekstrasellüler matriks (ECM) ve mezenkimal hücreler, fibroblastlar, miyofibroblastlar endotel hücreleri, perisitlerden ve 1-3 lökosit de dahil olmak üzere , çeşitli oluşur.
Tümör ile ilişkili stroma komşu karsinom hücreleri tarafından yayımlanan önemli parakrin sinyaller duyarlı. Hastalık süreci boyunca, stroma genellikle miyofibroblastlar büyük numaraları da dahil olmak üzere, karsinom ile ilişkili fibroblastlar (CAFs) tarafından doldurulur olur. Bu hücreler in vitro kültürü için daha önce birçok farklı insan karsinomların tipleri çıkarılan edilmiştir. CAFs bir ICSI'nin α-düz kas aktin up-regülasyon (α-SMA) ifade 4,5 ile ayırt edilebilir. Bu hücreler miyofibroblastlar c ile benzer özellikleri paylaşan bir işaretidir 'aktif fibroblastlar'ommonly yaralı ve fibrotik dokuların 6 gözlenmiştir. Bu miyofibroblastik CAF alt kümesinin varlığı son derece yüksek dereceli maligniteler ile ilgili ve yoksul hastaların prognozları ile ilişkilidir.
Birçok laboratuar, kendi de dahil olmak üzere CAFs karsinom hücreleri ile bağışık yetmezliği olan farelere enjekte tumourigenesis 7-10 önemli ölçüde teşvik yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir. Ancak karsinom hastaları hazırlanan CAFs,, sık sık devam eden deney boyunca kullanım yaygınlığı sınırlayıcı kültürünün yayılma sırasında yaşlanması tabi. Bu zorluğun üstesinden gelmek için, biz coimplantation meme tümörü xenograft modeli kullanılarak, deneysel insan meme fibroblastlar ölümsüzleştirdi meme insan CAF hücre hatları (exp-CAFs) oluşturmak için yeni bir teknik geliştirdi.
Azalma mammoplasty doku elde exp CAFs, ebeveyn insan meme fibroblastlar, üretmek için, ilk immortalihTERT, telomeraz holoenzyme katalitik subunit ve ifade GFP ve bir puromycin direnç geninin için tasarlanmış sed. Bu hücreler aktive ras onkogen (MCF-7-ras hücreleri) bir fare xenograft ifade MCF-7 insan meme kanseri hücreleri ile coimplanted. In vivo bir inkübasyon döneminden sonra, başlangıçta enjekte insan meme fibroblastlar, onların puromycin direnci 11 temelinde tümör xenografts çıkarıldı .
Biz bir miyofibroblastik fenotip benimseyerek, yerleşik insan meme fibroblastlar farklılaşmış olduğu görülmektedir ve tümör progresyonu sırasında tümör destekleyici özellikleri satın aldı. Önemlisi, bu hücrelerin, exp-CAFs olarak tanımlanan yakından hastaların disseke meme karsinomları izole CAFs tümör teşvik miyofibroblastik fenotip taklit. Bu nedenle tümör xenograft türetilen exp CAFs, insan breas CAFs biyolojisini çalışmak için etkili bir modelt karsinomlar. Açıklanan protokol aynı zamanda, insan karsinomları diğer türleri türetilen çeşitli CAF popülasyonları ve tanımlamak için uzatılabilir.
CAFs bu hücre tipi kendi içinde bir meydan okuma karakterizasyonu hale arasından CAF-spesifik belirteçler ve heterojenlik eksikliği görülmektedir. In vitro olarak incelenmesi CAFs, ayrıca bu hücrelerin senesce ve uzun bir süre için kültüre prolifere ek bir komplikasyon engel olmuştur. Retroviral hTERT cDNA inşa kullanarak birincil CAFs doğrudan ölümsüzleştirmek için önceki girişimi başarısız oldu. Bu nedenle, bu hücrelerin tümör arttırıcı özellikleri daha fazla araştırmak içi…
The authors have nothing to disclose.
Dr Robert A. Weinberg (Whitehead Biyomedikal Araştırma, Cambridge Enstitüsü) Biz, bu iş ve bu yazının kritik düzenleme için Sayın Kieran Mellody (Manchester Üniversitesi, Manchester) cömert destek ve denetim için teşekkür ederim. Bu proje Research UK (CR-UK) hibe sayısı C147/A6058 (AO) tarafından desteklenen
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
DMEM | Invitrogen | 61965-026 | ||
Fetal calf serum | GIBCO | 10270 | ||
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
Collagenase type I | Sigma | C0130-1G | ||
hyaluronidase | Sigma | H4272 | ||
Vimentin (V9) antibody | Novocastra Laboratories | NCL-L- VIM-V9 |
||
Tenascin C (BC-8) antibody | a gift from |
|||
α-SMA-Cy3 (1A4) antibody | Sigma | C6198 | ||
Prolyl-4-hydroxylase |
Dako | M0877 | ||
(5B5) antibody | ||||
Collagen type1 1A antibody | Sigma | HPA011795 | ||
Pan-cytokeratin antibody | Sigma | C5992 | ||
Fibronectin antibody | BD Biosciences | 610077 | ||
S100A4/FSP-1 (fibroblast- specific protein-1) antibody |
Dako | A5114 | ||
Fibroblast surface protein (clone 1B10) antibody |
Abcam | ab11333 | ||
MSCV-IRES-GFP construct | Request to the the authors | |||
pBabe-puro construct | Purchase from Addgene |
|||
Puromycin | Sigma | P8833 | ||
DAPI | Sigma | D9564 | ||
15 ml conical tube | Corning | 430766 | ||
Nude mouse | Taconic | NCRNU-F | Female NCr nude | |
C3H/10T1/2 cells | ATCC | CCL-226 |