מטרת מאמר זה היא לתאר את השימוש במודל גליובלסטומה orthotopic ללימודי chemoradiation. מאמר זה יהיה ללכת על פי עיבוד בתא, השתלה, והקרנות של העכבר באמצעות המודל תוך גולגולתי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
Multiforme גליובלסטומה (GBM) הם הנפוצים ביותר גידולים אגרסיביים בוגרים במוח העיקרי 1. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בהבנת המכניקה של הפלישה הגידול, חיסון intracerebral ישירה של הגידול מספק הזדמנות להתבונן בתהליך פולשני בסביבה מתאימה מבחינה פיזיולוגית 2. עד כמה גידולים במוח האדם מודאגים, המודלים orthotopic זמין כרגע מבוססים או על ידי הזרקת תאים stereotaxic של המתלים או ההשתלה של פיסת מוצק של הגידול בהליך craniotomy מסובך 3. בטכניקה שלנו אנחנו קוצרים תאים בתרבית רקמה ליצירת ההשעיה תא נהג להשתיל ישירות לתוך המוח. משך הניתוח הוא כ 30 דקות, כמו עכבר שצריך להיות במטוס כירורגית מתמיד, זריקות הרדמה משמש. העכבר ממוקם לנענע stereotaxic על ידי Stoetling (איור 1). בירכתי הספינהאה באזור הניתוח הוא ניקה והכין, מבצעים חתך, ועל גבחת נמצא כדי לקבוע את המיקום של craniotomy. מיקום craniotomy הוא 2 מ"מ ימינה, 1 מ"מ מקורי כדי גבחת. העומק הוא 3 מ"מ מפני השטח של הגולגולת, ותאי מוזרקים בשיעור של μl 2 כל 2 דקות. העור מאוחה על ידי תפירה עם 5-0 PDS, והעכבר מותר להעיר על כרית חימום. מניסיוננו, בהתאם לקו הסלולרי, הטיפול יכול להתבצע בין 7-10 ימים לאחר הניתוח. משלוח סמים תלויה בהרכב התרופה. לטיפול בקרינה העכברים מורדמים, והכניסו מותאם אישית עשה לנענע. עופרת מכסה את גופו של העכבר חושף רק את המוח של העכבר. המחקר של tumorigenesis ואת ההערכה של טיפולים חדשים עבור GBM דורשים מדויקות לשחזור גידול במוח במודלים של בעלי חיים. לכן אנו משתמשים במודל המוח orthotopic ללמוד את האינטראקציה של microenvironment של המוח הגידול, על מנת לבחון את effectivenESS של סוכני טיפוליות שונות עם וללא קרינה.
פרוטוקול
I. הכנה Cell
- התאים גדלים על המפגש ב DMEM עם FBS 10% על בקבוק 1 80% confluent 225 3 ס"מ על כל 5 העכברים להיות מושתלים.
- Aspirate התקשורת הנחה של התאים, לשטוף עם 10 מ"ל של PBS ללא סידן או מגנזיום. Aspirate PBS מחוץ לתאים.
- Trypsinize תאים עם 3 מ"ל של טריפסין, לחכות 10-15 דקות, ולנטרל טריפסין עם 15 מ"ל של התקשורת.
- Pipet כל התאים ומדיה לתוך 50 מ"ל חרוטית. שתי צלוחיות גדולות להתאים 1 50 ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
גליומות ממאירות, כגון multiforme glioblastoma, לייצג את הגידולים השכיחים ביותר במוח יסודי בעלי פרוגנוזה עגומה 4. ההישרדות של חולים שנפגעו GBM נשארה כמעט ללא שינוי בעשור האחרון (כלומר, 9-12 חודשים לאחר האבחון) למרות ההתקדמות ניתוח, הקרנות וכימותרפיה 5. התכונות של הדגם המתאים לחקר הטיפול glioma לכלול מיקום הגידול בצמיחה לשחזור של התאים כגידול דיסקרטית יחסית, התאים צריכה להיות דומה ככל האפשר את תכונות היסטולוגית של gliomas אדם, לא אמורה להיות צמיחה צפויה קצב הגי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין לנו מה למסור.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי מימון תוכנית המיפוי של NIH.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מעבדה רגילה Stereotaxic Instrutment | Stoelting עכבר מתאם עכברוש | ||
| בבטאדין | 100% EtOH | ||
| 70% EtOH | 50% אצטון | ||
| 6 "Q-טיפים | מטליות אלכוהול | ||
| המילטון מזרק 80008 | Ethicon 5-0 PD | ||
| 1701 SN-33G 31/1 "/ PT3 מחט | 1 מ"ל מזרקים | ||
| 25 גרם מחטי | כרית חימום | ||
| משחה דמעות מלאכותיות | יפה מאוד בטוש בלתי מחיק היטה |
מקורות
- Bleau, A. M., Holland, E. Trapping the mouse genome to hunt human alternations. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).
- McGrady, B. J., McCormick, D. A murine model of intracranial invasion: morphological ob....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
