Summary
Habituação e prepulse inibição da startle são medidas operacionais de gating sensorial. Gating sensorial é interrompido na esquizofrenia, e alguns outros transtornos mentais e doenças neurodegenerativas. Nós aqui descrever um protocolo padrão para avaliar a habituação a curto prazo e longo prazo, bem como prepulse inibição de respostas de sobressalto acústico em ratos e camundongos.
Abstract
A resposta de sobressalto acústico é uma resposta protetora, provocada por um estímulo acústico súbita e intensa. Músculos faciais e esqueléticas são ativados dentro de alguns milissegundos, levando a um corpo inteiro estremecer em roedores 1. Embora as respostas de sobressalto são respostas reflexas que pode ser confiavelmente provocou, eles não são estereotipados. Eles podem ser modulado por emoções como o medo (medo de sobressalto potencializado) e alegria (alegria atenuada sobressalto), por processos não-associativa de aprendizagem, como a habituação e sensibilização, e por outros estímulos sensoriais através de processos de propagação sensoriais (prepulse inibição), transformando startle respostas em uma excelente ferramenta para avaliar as emoções, aprendizado e gating sensoriais, para revisão ver 2, 3. A principal via mediação das respostas de sobressalto é muito curto e bem definido, qualificando startle também como um excelente modelo para estudar os mecanismos subjacentes à plasticidade comportamental em um nível celular / molecular 3.
Nós aqui descrever um método para avaliar a curto prazo habituação, habituação a longo prazo e prepulse inibição de respostas de sobressalto acústico em roedores. Habituação descreve a diminuição da magnitude da resposta de sobressalto mediante a apresentação repetida do mesmo estímulo. Habituação dentro de uma sessão de testes é chamado de habituação a curto prazo (STH) e é reversível após um período de vários minutos sem estimulação. Habituação entre as sessões de testes é chamado de habituação a longo prazo (LTH) 4. Habituação é estímulo específico 5. Prepulse inibição é a atenuação de uma resposta de sobressalto por um estímulo não-surpreendentes anteriores sensoriais 6. O intervalo entre prepulse e estímulo de sobressalto pode variar de 6 a até 2000 ms. O prepulse pode ser qualquer modalidade, no entanto, prepulses acústico são os mais comumente usados.
Habituação é uma forma de aprendizagem não-associativa. Também pode ser visto como uma forma de filtragem sensorial, uma vez que reduz a resposta dos organismos a um estímulo não-ameaçador. Prepulse inibição (PPI) foi originalmente desenvolvido em pesquisa neuropsiquiátricos humana como uma medida operacional para gating sensoriais 7. Déficits PPI pode representar a interface de "psicose e cognição", como eles parecem prever 80-10 comprometimento cognitivo. Ambos habituação e PPI são interrompidas em pacientes que sofrem de esquizofrenia 11, e interrupções PPI têm se mostrado, pelo menos em alguns casos, passíveis de tratamento com antipsicóticos atípicos principalmente 12, 13. No entanto, outras doenças mentais e degenerativas são também acompanhadas por perturbações no habituação e / ou PPI, como transtornos do espectro do autismo (mais lento habituação), transtorno obsessivo-compulsivo, síndrome de Tourette, doença de Huntington, doença de Parkinson e doença de Alzheimer (PPI) 11, 14, 15 Dopamina déficits induzidos PPI é um modelo animal comumente usados para a triagem de drogas antipsicóticas 16, mas os défices PPI também pode ser induzida por muitas outras drogas psicotomiméticos, modificações ambientais e procedimentos cirúrgicos.
Protocol
1. Protocolo de Design
- Calibração: Antes de um conjunto de experimentos, calibrar os alto-falantes. Isso é importante para mostrar que alto-falante o volume exato que foi definido pelo experimentador. Também calibrar a sensibilidade do transdutor plataforma das caixas de sobressalto acordo com o manual do fornecedor. O transdutor converte o movimento vertical da plataforma em um sinal de tensão. Certifique-se que não há experiências em curso, quando calibrar o sistema, e que todas as caixas são calibrados da mesma forma.
- função I / O: Se novas linhagens de camundongos ou ratos são medidos, uma função de entrada / saída deve ser estabelecida. Após um período de aclimatação de 5-10 minutos com um ruído de fundo constante brancos de 65 a 68 dB (veja abaixo), os estímulos de sobressalto (20 ms ruído branco) deve ser exibida a cada 20 segundos, começando em cerca de 70-75 dB. Sobressalto intensidade do estímulo será aumentado entre cada estímulo de 2-5 dB até atingir 120-130 dB, resultando em 10-30 ensaios com estímulos de sobressalto (ver figura 1).
- Protocolo estrutura: Habituação e inibição prepulse pode ser medido dentro de um protocolo. O protocolo é dividido em um período de aclimatação, um bloco I (habituação), imediatamente seguido por um bloco II (PPI, figura 2). Antes de medir prepulse inibição, os animais devem passar sempre pela habituação sobressalto, de modo que atenuações sobressalto devido à habituação não interferem com as medições PPI.
- Período de aclimatação: Cada vez que um animal é testado, ele primeiro passa por uma fase de aclimatação, a fim de adaptar-se ao detentor de animais, caixa de sobressalto e ruído de fundo. Durante um período de 5-10 minutos de aclimatação, o ruído de fundo constante de 65-68dB de ruído branco (dependendo do ruído do ambiente) é exibida, mas nenhum estímulo susto. Durante esta fase o animal se acalmar, parar de explorar o ambiente e parar de se mover.
- Bloco I habituação: Para curto prazo habituação (STH), entre 30 -100 estímulos startle deve ser aplicado no fundo. Estímulos sobressalto são ruídos comumente branco de 20 ms de duração e tempos de subida muito íngreme (0, se possível). A intensidade é idealmente no volume em que a função de i / o atingiu o platô de resposta de sobressalto máxima, geralmente em 105-115 dB. Os intervalos entre testes individuais devem ser sempre de 20 segundos ou aleatório entre 10 e 30 segundos (veja a discussão e figura 3).
- Bloco II prepulse inibição: Para medir PPI, os ensaios com um pulso de sobressalto sozinho e ensaios com um prepulse são pseudorandomized no bloco II. Ruído de fundo e de estímulo startle são os mesmos que no bloco I. O prepulse é um ruído branco de 4 ms de duração e também tempo de subida íngreme. Dois parâmetros podem ser variados: o intervalo entre interstimulus prepulse e surpreender pulso e da intensidade da prepulse (ver discussão). Propomo-nos geralmente usam dois diferentes intensidades prepulse (75 e 85 dB) e dois intervalos diferentes interstimulus (30 ms e 100 ms). Assim, existem quatro diferentes prepulse pulso-julgamentos mais o pulso de sobressalto sozinho ensaios a serem pseudorandomized e exibidos 10 vezes cada, totalizando 50 ensaios. Inter-julgamento intervalos podem ser 20 segundos ou aleatório entre 10 e 30 segundos (ver discussão). Em alguns casos, pode ser benéfico para adicionar um sexto tipo de ensaios, que é um julgamento prepulse sozinho (veja a discussão e figura 4).
- Habituação a longo prazo: A fim de medir LTH, todo o protocolo é executado em pelo menos cinco dias subseqüentes. Em alternativa, apenas a fase de aclimatação e bloco eu poderia ser executado, no entanto, a fim de ver LTH, bloco I deverá conter, pelo menos, de sobressalto 100 estímulos. A apresentação de 30 estímulos por dia leva a LTH muito pouco ou nenhum na maioria dos animais, especialmente em camundongos. Deve ser executado em aproximadamente o mesmo tempo de cada dia, uma vez que amplitudes resposta de sobressalto flutuar com o ciclo diurno.
2. Manuseio e Aclimatação de Animais
Existem grandes diferenças no manejo e aclimatação de ratos contra ratos. Camundongos será colocado no suporte animal apropriado (não devem ser restringidos) por 2-5 minutos, com o ruído de fundo, mas sem assustar estímulos (fase de aclimatação do programa). Este procedimento deve ser repetido 3-5 vezes, uma ou duas vezes por dia, até fezes e urina no rato deixa o titular ou diminui consideravelmente. Detentores de animais devem ser sempre substituídos ou limpos depois que o animal é removido.
Ratos devem ser manuseados por pelo menos três sessões de 17. No final das sessões de manipulação de terceiro que são colocados em um suporte apropriado animais (sem restringir a) e expostos ao ruído de fundo por vários minutos. Depois de removê-los, eles podem ser recompensados com sementes de girassol a fim de formar passociações ositive com o procedimento de teste. Este procedimento é repetido mais duas vezes, gradualmente expandindo o tempo de aclimatação, antes de todo o protocolo é executado.
Para os testes de sessões, os animais são colocados em todas as câmaras, portas fechadas eo protocolo com a fase de aclimatação, bloco I e II bloco é executado. Se existem diferentes grupos de animais (injeções, genótipos), que deve ser misturado ou randomizado sobre a corridas diferentes e as caixas diferentes. Se um animal é repetidamente testado (por exemplo, com diferentes tratamentos), ele deve ser re-testados na mesma caixa. Para repetir testes de PPI em ratos, também recomendamos para executar um protocolo completo antes da coleta de dados real ocorre. PPI geralmente melhora entre o primeiro eo segundo teste a sessão (PPI learning), e permanece consistente a partir daí. Ele também irá eliminar uma grande parte da LTH.
3. Análise de Dados
- Curto prazo habituação: Para análise a curto prazo habituação, todas as respostas de sobressalto do bloco I são plotados para cada animal. Se os animais dentro de um grupo têm similares amplitudes resposta de sobressalto, os valores podem ser em média entre os animais. Na maioria dos casos, no entanto, amplitudes absolutas startle diferem consideravelmente entre os animais e os níveis de sobressalto não são normalmente distribuídos. Neste caso é mais viável para normalizar os dados de cada animal para a sua primeira, ou a média dos dois primeiros, as respostas de sobressalto no bloco I (animais, por vezes, cair no sono durante a fase de aclimatação, resultando em uma resposta de sobressalto baixo primeiro e um alto startle segundo). Os dados podem então ser normalizada média de todos os animais, a fim de traçar o curso de habituação. Para uma avaliação quantitativa da quantidade de habituação, a pontuação pode ser calculado para cada animal, por exemplo, a média dos últimos 10 respostas startle dividido pela média das duas primeiras respostas (figura 6).
- Prepulse inibição: Para analisar prepulse inibição, os dados do bloco II tem que ser classificados de acordo com o tipo de ensaio (por exemplo, exportar todas as colunas de dados relevantes em excel e classificar por prepulse intensidade e duração do ISI). Os dez traços por tipo de teste são, então, em média, e os valores resultantes para os ensaios prepulse pulso são divididos pelo pulso de sobressalto só valor e multiplicado por 100. Isso revela a quantidade de sobressalto restantes (em percentagem da linha de base sobressalto) sob diferentes condições prepulse para cada animal. Linha de base de sobressalto (pulso sozinho) é 100%. Estes valores podem ser então na média entre os animais de um grupo e ser plotados (figura 7a). Alternativamente, a quantidade de PPI podem ser plotados subtraindo a resposta de sobressalto restantes de 100% (Figura 7b). Por favor, esteja ciente: quando você compara PPI em diferentes grupos de animais, você deve sempre também relatam a existência de uma diferença na base de sobressalto amplitudes, por exemplo comparando as amplitudes de sobressalto absoluta dos ensaios de sobressalto pulso sozinho (ou amplitudes de sobressalto no bloco I) .
- Habituação a longo prazo: A fim de analisar LTH as duas primeiras respostas do bloco I de cada dia são em média e plotadas sobre o mínimo de cinco sessões de testes consecutivos. Isso elimina a possibilidade de que diferenças no STH afetar o resultado da análise LTH. Se tiver sido estabelecido que um gene tratamento / não afeta STH, alternativamente todas as respostas em bloco I pode ser simplesmente uma média para cada dia e ser plotados. LTH pode ser quantificada pelo cálculo do escore de habituação, onde os últimos dias "valor é dividido por os primeiros dias" valor e multiplicado por 100, para que o percentual de nível de sobressalto inicial remanescente após LTH é exibida. Pontuações habituação pode ser média entre animais (figura 8).
4. Resultados representativos:
- i / o da função: Roedores normalmente começam a assustar a partir de um volume de 85-90 dB em (com 20 ms de duração, o ruído branco). A resposta de sobressalto aumenta com o volume cada vez maior e, normalmente, atinge um máximo de 100-110 dB. Se os animais se desviam consideravelmente a partir desses valores, os animais podem ter perturbado as habilidades de audição ou habilidades motoras. Típico i / o funções são exibidas na figura 5.
- Curto prazo habituação: ratos tratados Bem normalmente acostumar a cerca de 60% de sua resposta de sobressalto inicial, no entanto, existem enormes diferenças individuais e também as diferenças de tensão. O efeito mais forte habituação ocorre normalmente na primeira estímulos diversos. Ratos têm geralmente menos de habituar ratos (normalmente a cerca de 80%), mas as diferenças tensão podem ser muito grandes. Um curso de habituação típico é mostrado na figura 6.
- Prepulse inibição: A maioria dos ratos mostram PPI de cerca de 90%, com uma ótima prepulse (85dB 4 ms, o ruído branco). PPI é muito robusto e as diferenças individuais são relativamente pequenos, com essas configurações experimentais. Menor volume de prepulsesrendem menos PPI e maior variabilidade (mesmo dentro de um animal), mas também parece ser mais vulnerável a manipulações farmacológicas ou genéticas. Resultados diferentes PPI são plotados na figura 7.
- Habituação a longo prazo: a habituação a longo prazo pode ser observada ao longo de várias sessões de testes. LTH é muito robusto em ratos. Em camundongos, que muitas vezes exige a apresentação de uma série de estímulos de sobressalto em cada sessão, a fim de observar LTH. Típico resultados LTH pode ser visto na figura 8.
Figura 1. Protocolo de estímulo para a função de i / o. Depois de um período de aclimatação de 10/05 min. com 65 dB nível de pressão sonora (SPL) o ruído de fundo e não há estímulos de sobressalto (não mostrado), 20 ms estímulos ruído branco são apresentados a cada 20 segundos. A intensidade aumenta gradualmente de 75-130 dB em incrementos de 5 dB (bg = ruído de fundo).
Figura 2. Estrutura Protocolo de habituação combinado e medição PPI. Durante todo o protocolo, um ruído de fundo constante de 65 dB é aplicada. Há um período de aclimatação de 10/05 min. sem qualquer estímulo adicional. Imediatamente depois, a habituação é testada por 3-10 estímulos startle (bloco I, ver figura 3). Este é imediatamente seguido por testes PPI (bloco II, ver figura 4).
Figura 3. Protocolo de estímulo para medir a habituação (bloco I). Um exemplo de um bloco típico I para o teste de curto prazo habituação é mostrado. É composto de 30 100 testes idênticos, onde a 20 ms 105 dB de ruído branco, com um tempo de subida 0 é apresentado com um intervalo inter-ensaio (ITI), de 20 seg. Variações deste protocolo pode incluir intensidades mais elevadas de sobressalto estímulo ou variável ITIS
Figura 4. Protocolo de estímulo para medir PPI (bloco II). Um exemplo de uma parte típica de um bloco II para testes PPI é mostrado. Bloco II consiste de 5-6 tipos diferentes julgamento que são apresentados 10 vezes cada em uma ordem pseudorandomized. Aqui, duas diferentes intensidades prepulse (75 dB e 85 dB) e dois intervalos diferentes interstimulus (Isis, 30 e 100 ms) são testados. Sobressalto estímulo sozinho ensaios e prepulse sozinho ensaios são intercalados. Este bloco teria 6x10 = 60 ensaios. Prepulses são 4 ms pulsos de ruído branco com 0 tempo de subida. Variações deste protocolo consistiria em ITIS variável, maior intensidade de estímulo de sobressalto, diferentes intensidades prepulse e / ou duração, e Isis diferentes entre prepulse e pulso.
Figura 5. Exemplo de uma função de i / o. As curvas de entrada / saída de 11 ratos individuais da mesma estirpe são exibidos em cinza. Neste caso, as amplitudes de sobressalto individuais variam consideravelmente (respostas de sobressalto estão em unidades arbitrárias). A linha preta sólida mostra a amplitude média de sobressalto e erros-padrão em diferentes intensidades de estímulos susto. Estes ratos atingiram o seu máximo de resposta de sobressalto em torno de 105 dB.
Figura 6. Exemplo de dados de curto prazo habituação. A curva de habituação médio típico de curto prazo de 20 ratos é mostrada. Amplitudes de cada sobressalto do mouse em resposta a estímulos startle 30 foram normalizados para a média de suas duas primeiras respostas de sobressalto em ensaios 1 e 2. À normalização dos dados foi, então, na média entre os ratos eo erro padrão foi calculado.
Figura 7 Exemplo de dados PPI A:.. Dados médios PPI, de 8 de ratos é mostrada. Os 10 ensaios de sobressalto só do bloco II foram calculados para cada rato e as médias dos tipos de outro ensaio expresso em percentagem do estímulo sozinho amplitudes susto. A figura mostra a resposta de sobressalto amplitudes sob diferentes condições prepulse. ISIS dois diferentes (30 e 100 ms) e duas intensidades diferentes prepulse (75 e 85 dB) foram medidos. B: O mesmo que os dados em A, mas plotados como quantidade de PPI em percentagem do susto inicial. Os dados apresentados acima foi subtraído de 100. Esses camundongos mostraram um PPI máximo de cerca de 50%. Por favor note que o mesmo protocolo PPI rendimento da maioria das cepas de ratos de cerca de 90%.
Figura 8 Exemplo de dados a longo prazo habituação A:.. Averaged dados LTH por 18 ratos é mostrada. Tele duas primeiras respostas de sobressalto no bloco I de cada dia, foram média de todos os ratos. A relativamente grande barras de erro padrão são causadas principalmente pelas diferenças de amplitude startle absoluta entre ratos individual. B: amplitudes Normalized de sobressalto, de 18 mouses mais de cinco dias. , A fim de reduzir o ruído, os grupos de 6 consecutivas respostas de sobressalto no bloco I (30 estímulos) sempre foram em média por animal, resultando em cinco valores para o bloco I, para cada animal por dia. Estes foram normalizados para cada animal para o primeiro valor do primeiro dia (100%). A média de todos os 18 animais é exibida. Ele mostra STH dentro de cada dia, bem como LTH em cinco dias.
Discussion
Variações do protocolo de teste
Modulação das respostas de sobressalto têm sido estudados há muitas décadas em humanos e animais. Uma enorme variedade de diferentes protocolos têm sido utilizados no passado. O protocolo atual é um teste relativamente curto e fácil de executar que funciona bem em roedores, no entanto, dependendo do foco de interesse e trabalhos anteriores sobre as respectivas questões, pode ser útil para variar este protocolo, a fim de obter dados que é comparável a estudos anteriores relevantes. Uma variação comum inclui a adição de mais prepulse intensidades variando de 3 db acima do ruído de fundo a 20 dB acima do ruído. Além disso, o bloco de habituação pode ser dividido em um pequeno bloco de estímulos 10/05 antes do bloco PPI, além de um terceiro bloco de estímulos 10/05 após o bloco PPI 18-20. Um estudo minucioso da literatura existente antes de projetar um protocolo de teste é essencial.
Diferenças entre as espécies e cepas
Amplitudes resposta de sobressalto ea quantidade de habituação diferem consideravelmente entre os animais única da mesma espécie e estirpe, enquanto PPI parece ser relativamente consistente. Ratos têm geralmente se movem mais (voluntariamente) durante o teste, que pode ser uma razão pela qual os seus dados geralmente tem uma maior variabilidade do que os dados de rato. Camundongos não habituar também, assim como ratos. Diferenças entre mouse individual ou estirpes de ratos pode ser 21-24 enorme, e pode ser necessário adaptar parâmetro de estímulo ao comportamento de sobressalto de uma cepa específica a fim de obter melhores resultados. Deve ser evitado usar o mesmo equipamento para testar tanto camundongos e ratos. Se for inevitável, os equipamentos devem ser cuidadosamente limpas com etanol.
Fatores de ganho
Às vezes, há grandes diferenças em respostas individuais dentro de um grupo de sobressalto. Para medir PPI e habituação, a linha de base ou primeira resposta de sobressalto deve ser idealmente cobrindo a maior parte da faixa dinâmica do sistema de medição. Overshoots são prejudiciais, pois eles levam a um erro sistêmico, geralmente subestimando a quantidade de habituação ou PPI. Se as respostas de sobressalto são muito pequenas, no entanto, modulações podem ser ocluídos pelo ruído. Sistemas de sobressalto permitir a adaptação de um fator de ganho que amplifica o sinal da plataforma. Fatores de ganho pode ser ajustado ao apresentar duas ou três estímulos de sobressalto durante a sessão de aclimatação última (ganho = 1), no entanto, deve-se ter em mente que eles mudam a amplitude da resposta de sobressalto absoluta e, portanto, não permitem uma comparação de absoluta startle amplitudes anymore. Para evitar este inconveniente, as três respostas de sobressalto que são usados para ajustes fator de ganho pode ser usado para determinar a magnitude de sobressalto linha de base. Em alternativa, fatores de ganho pode ser ajustado somente após bloco I, de modo que o bloco II respostas de sobressalto cobrir a maior parte da gama dinâmica, enquanto bloco I pode ser usado para determinar a resposta de sobressalto linha de base.
Habituação sensibilização contra
Habituação diminui as amplitudes resposta de sobressalto. Esta é a oposição de uma sensibilização, o que leva a um aumento de respostas de sobressalto mediante a apresentação repetida 25. Habituação e sensibilização são dois processos independentes que afetam o mesmo comportamento 26. Para medir a habituação, a sensibilização deve ser minimizado. Sensibilizar os animais se um estímulo aversivo é, portanto, muito alto estímulos startle devem ser evitados por medidas de habituação, para revisão ver 27. Estresse, ansiedade e medo fazem também aumentar as respostas de sobressalto 28, opor-se a habituação e afetar PPI 18. Animais deve ser bem tratadas e climatizadas para o aparelho de teste de sobressalto. Além disso, os detentores de animais que são muito pequenas e fisicamente conter os animais são contraproducentes, uma vez que induzem o estresse nos 29 animais.
Fixo versus randomizado ITI
Protocolos comuns de sobressalto usar um intervalo inter-julgamento fixo (ITI) tipicamente de 20 ou 30 segundos ou um intervalo variável que pseudorandomizes em valores entre 15 e 30 seg. A vantagem de uma ITI randomizado reside no fato de que o animal não é possível prever o momento de o estímulo seguinte. Tem sido demonstrado que a atenção por exemplo para o prepulse aumenta a sua eficácia em suprimir respostas startle 13, 30. Medição PPI com um ITI fixa pode, portanto, também sonda para processos de atenção. ITIS abaixo de 15 segundos devem ser evitadas, a fim de prevenir os efeitos causados por fadiga muscular e os períodos refratários de respostas musculares.
Intensidade e duração do prepulse
Nós usamos um prepulse muito curto, de 4 ms de duração neste protocolo. Muitos outros estudos usar um ms 20 prepulse. , A fim de ser capaz de variar a interva interstimulusls (Isis) e também para medir intervalos muito curtos, esta curta prepulse foi introduzido. A eficácia do prepulse parece ser atenuada pela sua curta duração, em comparação a um ms 20 prepulse do mesmo volume. Nós, portanto, usar prepulses relativamente alto de 75 e 85 dB. Considerando que um estímulo de 85 dB de sobressalto (20 ms) pode ser acima do limiar, a 85 dB prepulse (4ms) normalmente não provocam respostas de sobressalto. No entanto, é importante avaliar se não há respostas de sobressalto provocado pela própria prepulse que poderia causar fadiga muscular e estados refratário durante o estímulo susto. Alguns tratamentos que interrompem PPI têm mostrado para aumentar a sensibilidade prepulse 31 (indicando o rompimento PPI não é devido a uma perda de sensibilidade acústica), no entanto, este não pôde ser encontrado em pacientes esquizofrênicos 32 avaliações da sensibilidade prepulse pode ser feito através da análise os dados da plataforma no período entre prepulse ou sobressalto de pulso ou incluindo prepulse ensaios sozinho no bloco II.
ISI diferentes contra diferentes intensidades prepulse
PPI em humanos foi originalmente medido em um ISI de 100 ms, onde seu efeito está no seu máximo 7. Em ratos e camundongos PPI está em seu máximo em 30-50 ms ISI, provavelmente devido ao tamanho menor dos 33 cérebros. Nos últimos anos tornou-se aparente que os receptores diferentes transmissor eo transmissor estão engajados em uma forma de série, a fim de exercer a inibição rápida, mas de longa duração de sobressalto 3, 34. Dependendo do sistema afetado, drogas ou manipulações genéticas podem, portanto, afetam apenas no PPI ISIS específico. Recomendamos, portanto, variando a ISI entre 30 ms e 100 ms. Isso também permite que estudos recentes de ser comparado com estudos anteriores que utilizaram apenas 100 ms ISI. A 85dB prepulse leva a uma muito robusto PPI máximo de cerca de 90%. Esteja ciente de que este PPI não podem necessariamente ser aumentada sem funcionar em um efeito de teto. PPI induzida desta forma também parece ser bastante robusto, no entanto, é significativamente perturbados por exemplo, uma anfetamina mg / kg. Recomendamos a utilização de um segundo prepulse de 75 dB o que leva a 50-60% PPI só. Este PPI pode ser aumentada (por exemplo, um nicotina sc mg / kg), e parece ser mais vulnerável à manipulação genética e farmacológica, em geral, no entanto, também parece ser mais variável e inconsistente, mesmo dentro de um assunto. Estudos anteriores têm usado uma variedade enorme de prepulse intensidades e têm mostrado os efeitos dos tratamentos sobre a PPI com intensidades específicas prepulse e nenhum efeito sobre PPI com outros prepulse intensidades. Estudos aprofundados da literatura existente, é essencial antes de escolher prepulse intensidades e intervalos interstimulus.
Combinação com injeções sistêmicas / estereotáxica
Habituação e PPI teste é freqüentemente realizado em combinação com injeções sistêmicas ou estereotáxica. É evidente que nesses experimentos animais de um grupo controle recebem injeções de controlo do veículo. O procedimento de injeção em si, porém, pode ser muito estressante para o animal, levando a um maior nível de ansiedade e uma potencialização e / ou sensibilização da resposta de sobressalto (veja acima). Portanto, é recomendado para controlar o efeito do procedimento de injeção em si também. Se habituação é estudado, injeções antes poderia ser um grande obstáculo. , A fim de aliviar a ansiedade do animal, os animais devem ser devolvidos à sua gaiola para casa o maior tempo possível antes de testada (sem a droga usando off). Injecções devem também ser administrado por uma pessoa experiente, a fim de minimizar o impacto do procedimento no animal. Se injeções estereotáxica são feitas através de cânulas cronicamente implantados, o cirurgião que implantes de cânulas devem evitar a ruptura tímpanos dos ratos com as barras de ouvido aguçado. Isso pode levar a déficit auditivo. Barras de ouvido sem corte ou punhos ouvido que não tímpanos ruptura estão disponíveis para todos os dispositivos estereotáxica. Quando ratos são tratados após a cirurgia, os tampões ou chupetas devem ser manipulados de cada vez, para que os animais se acostumar com isso.
Sobressalto acústico como um teste de audição
Finalmente, deve-se notar que i / o de funções de sobressalto acústico e PPI pode servir como um teste de audição simples para ratos e camundongos 35-37. Déficit auditivo mudança de uma função de i / o para a direita. Uma vez PPI é estabelecido para uma cepa de rato ou o rato, os animais podem também ser testado com a variável prepulse intensidades. Se um animal é surdo ou não pode ouvir o prepulse tão alto quanto um animal controle, ele irá mostrar no PPI ou menos do que os animais controle. Por outro lado, um défice PPI observado sempre pode ser causada por um déficit auditivo, portanto, uma i / o teste de sobressalto ou comparações de respostas de sobressalto linha de base são controles crucial.
Disclosures
Produção deste artigo foi parcialmente financiado pela Med Associates, fabricantes de o instrumento utilizado neste artigo.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado pela Fundação de Saúde Mental Ontário, as Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Conselho Canada, and Associates Inc. Med
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Startle box package |  Med Associates, Inc. |
MED-ASR-PRO1-ADD (http://www.med-associates.com/startle/startle.htm) | Includes hardware & software |
| Animal Holder | Med Associates, Inc. |
ENV-264A (http://www.med-associates.com/startle/startle.htm#animal) | Other sizes and types also available |
| USB Sound Pressure Level Measurement Package | Med Associates, Inc. |
ANL-929A-PC (http://www.med-associates.com/behavior/audio/generator.htm#anl929a) | For calibration |
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