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Immunology and Infection

Leishmaniosi cutanea nella pelle dorsale di criceti: ​​un modello utile per lo screening delle droghe Antileishmanial

doi: 10.3791/3533 Published: April 21, 2012

Summary

Ottimizzazione del modello sperimentale per criceto leishmaniosi cutanea da iniezione intradermica di

Abstract

Tradizionalmente, i criceti sono sperimentalmente inoculati nel muso o la zampa. Tuttavia, in questi siti non si verifica sempre l'ulcera, la misurazione della dimensione della lesione è una procedura difficile e animali mostrano difficoltà a mangiare, respirare e muoversi a causa della lesione. Per ottimizzare il modello criceto per la leishmaniosi cutanea, maschio e femmina adulti giovani criceti dorati (Mesocricetus auratus) sono stati iniettati per via intradermica alla pelle dorsale con da 1 a 1,5 x l0 7 promastigoti di Leishmania e la progressione di lesioni successive sono state valutate sino a 16 settimane post infezione. Il criceto dorato è stato scelto perché è considerato il adeguate bio-modello per valutare i farmaci contro la Leishmania in quanto sono suscettibili alle infezioni da specie diverse. Infezione cutanea dei risultati criceti nelle lesioni croniche ma controllata, e una evoluzione clinica con segni simili a quelli osservati negli esseri umani. Pertanto, l'istituzione of l'estensione dell'infezione misurando la dimensione della lesione in base alla zona di indurimento e ulcere è fattibile. Questo approccio ha dimostrato la sua versatilità e facilità di gestione durante l 'inoculazione, follow-up e caratterizzazione delle lesioni tipiche (ulcere), l'applicazione di trattamenti in diversi modi e di ottenere dei campioni clinici dopo diversi trattamenti. Utilizzando questo metodo la qualità della vita animale per quanto riguarda la locomozione, la ricerca di cibo e acqua, il gioco e le attività sociali isalso conservati.

Protocol

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1. Infezione di criceti

1. Animali

Inbred criceti maschi e femmine d'oro (Mesocricetus auratus), 6-8 settimane, di peso 140-160 g vengono utilizzati. Essi sono ospitati presso la struttura degli animali, a temperatura controllata alloggi, alimentato con cibo secco e roditori di serie fornito con acqua ad libitum. Tutte le procedure che coinvolgono animali sono approvati dal Comitato Etico per uso animale sperimentale. Prima di infezione sperimentale con dermotropic parassiti Leishmania animali sono sessuato, ha segnato e ponderati secondo procedure standardizzate. Per sexing, gli animali devono essere ispezionati per caratteristiche distintive, come la visualizzazione della linea mammaria e la breve distanza ano-genitale nelle femmine, o la visualizzazione dei testicoli e una maggiore distanza tra l'ano e il prepuzio nei maschi. Quindi, gli animali sono contrassegnati dalla perforazione orecchio o colorazione un'area della pelle con un tampone intrisoin acido picrico. Per perforazione orecchio, dopo aver pulito con alcool al 70% l'orecchio è trafitto con un pugno all'orecchio per i roditori. Una regione con i vasi sanguigni devono essere evitati. Sedazione o anestesia con una miscela 09:01 di ketamina (50 mg / kg) e Xilacine (20 mg / kg) per via intraperitoneale in un volume di 260 300μl-25-G ago è raccomandato. Infine, gli animali sono pesati mettendoli in una trappola o scatola che sono condizionate da un bilancia di precisione.

2. Parassiti

Promastigoti di Leishmania dermotropic, come L. amazonensis, sono coltivate in bifasico Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) terreno di coltura a 26 ° C. Metaciclici (stazionaria) fase promastigoti (5 giorni) areused per infettare i criceti. In breve, i parassiti vengono raccolte, lavate due volte con tampone fosfato salino (PBS), contati e regolata a 1 x 10 7 (per i maschi) o 1,5 x 10 7 (per le femmine) parassiti in 0,1 ml di PBS per inoculare maschio o femmina, rispettivamente,tuttavia, la dimensione inoculums può variare a seconda della specie Leishmania (procedura non mostrato nel video).

3. Infezione sperimentale

Una zona della pelle è rasato prima dell'inoculazione. Brevemente, gli animali anestetizzati sono posti in posizione supina e con forbici, il pelo viene rimosso due centimetri dalla base della coda. Dopo ripulire la zona rasata con soluzione salina sterile l'inoculo parassita viene iniettata per via intradermica fino a quando si forma una papula.

4. Follow-up clinico

Gli animali vengono monitorati ogni 7 giorni fino a 4 - 6 settimane dopo l'inoculazione per l'aspetto della lesione. Poco tempo, gli animali vengono immobilizzati in una trappola e la zona della pelle inoculato viene palpato. Quindi, l'area indurimento dell'ulcera formatosi viene delineato e la larghezza e la lunghezza della dell'ulcera sono misurate con un calibro digitale.

2. Trattamento dei criceti

1. Adminstrazione dei composti

Lo schema di trattamento ha inizio quando gli animali hanno sviluppato lesioni ulcerate (4-6 settimane post-inoculazione). Gli animali sono distribuiti in gruppi di 5-6 animali per ciascun composto da testare. Composti possono essere somministrati da attualità, orale, intramuscolare o intralesionale. Prima dell'applicazione di sostanze stupefacenti, i criceti sono anestetizzati e la zona della lesione viene pulito con soluzione fisiologica o PBS. Quando il composto viene applicato via topica o intralesionale, i criceti sono immobilizzati in trappole che consentono esporre l'area da trattare, mentre, quando il composto viene somministrato per via orale o intramuscolare i criceti sono saldamente fissati dalla base del collo. a) applicazione topica: il composto isapplied sulla lesione e dopo pochi minuti l'animale viene restituito al cage.b) Per l'iniezione intramuscolare, il farmaco viene iniettato (200 pl massimo) attraverso i muscoli semitendinoso e semimembranoso dei quarti posteriori. c) Per le ammini oralestrazione, il farmaco viene fornito al animale (200 pl massimo) attraverso un oro-gastriche 14G sonda collegata ad una siringa da 1 ml. d) Per l'iniezione intralesionale il farmaco (100 massimo pl) viene iniettato progressivamente alla base dell'ulcera utilizzando un ago 26G calibro con lo smusso posizionato verso il basso. L'intera area della lesione è coperta dalla rotazione dell'ago. I trattamenti sono somministrati giornalmente durante 10-20 giorni, secondo lo schema definito terapeutico.

2. Follow-up clinico

Poiché in questo modello sperimentale l'efficacia di nuovi composti antileishmanial viene determinata secondo la guarigione e la cicatrizzazione di lesioni dopo il trattamento, un monitoraggio clinico di ciascun animale viene effettuata settimanale al termine dell'applicazione del composto e fino a tre mesi dopo. Durante il controllo, il tipo di lesione è descritto e l'indurimento e la superficie dell'ulcera sono misurate con un calibro digitale. La presenza di lesioni in diverse regioni alinoculazione così come la comparsa di recidive della lesione è anche descritto e registrato. Ogni due settimane, gli animali vengono pesati e le lesioni sono raffigurati. Gli animali vengono osservati quotidianamente per monitorare: a) aspetto fisico (capelli, il coordinamento, la temperatura, gli occhi, la posizione delle orecchie, governare, defecazione, presenza di liquido ascitico, agitazione e la disidratazione) e b) il comportamento (sveglio, attento, curioso, attento , rimane con il gruppo, attende al cibo e bevande, e difficile da catturare). Il sito di applicazione del composto si osserva anche per la presenza di iperemia, infiammazione, e la rimozione dei capelli e pungente.

Criceti sono anche dissanguamento al giorno 45 dopo la fine del trattamento per determinare i valori ematologici e sierologico che potrebbero essere associati alla tossicità dei composti (vedi sotto).

L'efficacia di ogni trattamento viene valutata confrontando le dimensioni delle lesioni prima e dopo i trattamenti, utilizzando il seguente punteggio SYSTem: indurito (guarigione del 100% dell'area e completa scomparsa della lesione); miglioramento clinico (riducendo la dimensione della lesione in> 50% della superficie); fallimento clinico (aumento della dimensione della lesione); ricaduta della lesione dopo la cura). Alla fine dello studio, gli animali vengono sacrificati per inalazione di CO2 anestesia precedente. Dopo la morte, i campioni necessari per le analisi parassitologiche, istologici e sierologici vengono prese.

3. Esami parassitologici

La presenza di Leishmania nei campioni di pelle (lesione o una cicatrice), fegato, milza e rene è determinata direttamente esaminando strisci colorati con Giemsa 1 e l'esame istopatologico di questi tessuti (vedi sotto).

L'onere parassita nel sito della lesione è stimato con il test di diluizione limite in base a Tito e colleghi (1985) 2. Brevemente, un piccolo pezzo di tessuto viene rimossoda ciascun animale, pesato e omogeneizzato in soluzione di PBS freddo utilizzando uno stantuffo della siringa. La sospensione ottenuta viene centrifugata a 600 g per 10 min a 4 ° C. Successivamente, i supernatanti vengono scartati ed i pellet vengono risospesi in mezzo RPMI 1640 integrato con 1% di antibiotici e 10% siero di vitello fetale. Una 100 l della sospensione sono trasferiti a ciascuno dei 96 pozzetti di piastra di microtitolazione contenente sovrapposto NNN media con 50 pl media Schneider e mantenuta a 26 ° C. Il numero di parassiti vitali in ciascun campione è determinata dalla diluizione massima alla quale promastigoti potrebbe essere rilevata da un esame al microscopio invertito ogni settimana per un mese.

4. L'esame istopatologico della lesione cutanea (o una cicatrice) e in altri tessuti

Un terzo pezzo del campione bioptico prelevato dal fegato pelle, rene ed è fissato in formalina al 10% ed inclusi in paraffina. Campioni dalla milza e il cuore potrebbe anche essere trattati. Finque sezioni micron dei tessuti fissi sono state colorate con haemotoxilin-eosina ed esaminato sotto un microscopio ottico utilizzando 200X, 400X o immersione in olio 1000X per studiare l'architettura micro, le caratteristiche del infiltrato cellulare, e la presenza o assenza di parassiti. Microfotografie sono prese e le immagini digitali catturate.

5. Valutazione della tossicità del trattamento

Attività tossica del composto si basa sulla condizione fisica e il comportamento degli animali secondo i parametri monitorati durante il follow-up clinico (vedi sopra). Tossicità è anche determinata secondo i parametri ematologici e metabolici in campioni di sangue e variazioni istopatologiche osservati in sezioni di tessuto colorate con haemotoxilin-eosina come descritto sopra.

I campioni di sangue sono presi dal cuore, preferibilmente il ventricolo. Per prova ematologica, il sangue viene trasferito in provette EDTA anticoagulante ed elaborata in basedi standardizzare i protocolli per esame emocromocitometrico completo. Per test sierologici, il sangue viene trasferito a 1,5 fiale eppendorf e centrifugata per ottenere il siero per l'analisi dei livelli di creatinina metabolico, ALT e BUN misurata utilizzando la chimica Kodak Ektachemdry 3.

6. Analisi dei dati

I dati provenienti da animali trattati e non trattati vengono confrontati utilizzando il test Anova. Significatività è fissato a p <0,05.

4. Rappresentativi risultati

Riassunto

Il modello criceto della leishmaniosi cutanea è stato migliorato con l'obiettivo di utilizzare questo modello per lo screening di stupefacenti efficacia. Lo sviluppo della lesione ed i parametri parassitologici sono stati studiati al momento dell'infezione primaria nella pelle cutanea di criceti. Inbred criceti maschi e femmine d'oro (Mesocricetus auratus), 6-8 settimane, sono stati iniettati per via intradermica con 1 x 10 7 (per i maschi) o 1,5 x 10 7 (per le femmine) metacyclIC (fase stazionaria) promastigoti di L. amazonensis. Noduli apparso 20 - 35 giorni pi, con ulcere formano dopo 4-6 settimane pi Dopo l'infezione è stata istituita, l'efficacia di antimonio pentavalente (SBV) in due dosi è stato evalauted. I criceti sono stati randomizzati in tre gruppi di 5 animali ciascuno e trattati con meglumina antimoniato a 80 o 120 mg SBV / kg al giorno per 10 giorni per via intramuscolare. Il terzo gruppo è stato trattato per via intramuscolare con PBS come placebo. Un gruppo di tre animali sono stati trattati e usato come controllo negativo. La risposta a ciascun trattamento è stata seguita fino 3 mesi dopo la fine del periodo di trattamento.

1. Il decorso clinico dopo la L. infezione amazonensis del criceto dorato (Mesocricetus auratus)

Criceti infetti nella pelle dorsale costantemente di sviluppare ulcere clinicamente evidente dell'epidermide a 4-6 settimane dopo l'infezione. Le lesioni iniziano con piccoli noduli e ulcere che terminanoaumento delle dimensioni in funzione del tempo post-infezione e raggiungere quello che era considerato una dimensione ottimale per la valutazione dell'effetto di farmaci sperimentali dalla quarta alla sesta settimana post-infezione (18,99 a 54,7 mm 2 a 4 settimane e 35,55 a 92,71 mm 2 a 6 settimana) (Figures1, 2). Le lesioni successivamente mantenuto un ulcera evidente per un massimo di 20 settimane post-infezione, momento in cui sono stati chiusi gli esperimenti (Figura 1).

Infezione da L. amazonensis non influisce sul peso corporeo di criceti che varia da 104,9 a 124,69 e 129,71 gr a 134,02 gr di criceti infetti e non infetti, rispettivamente (p> 0.05, Anova). Gli animali hanno guadagnato una media di 25,58 ± 5,98% del peso corporeo durante lo studio. I valori dei parametri sierici di creatinina e di alanina amino transferasi (ALT) e emocromo erano simili ai valori riferimenti a criceti infetti e non infetti Leishmania. Solo il panino di azoto ureico (BUN) è stato un livello diugmented nel 60% degli animali infetti.

Analisi istopatologica delle lesioni in criceti infetti con L. amazonensis hanno mostrato differenze correlate a questi animali non infetti. In generale, biopsie cutanee di criceti infetti mostrano alcuna reazione infiammatoria o qualsiasi alterazione istologica (Figura 3a), mentre quelli infettati con L. amazonensis sviluppare una dermatite granulomatosa e abbondante presenza di macrofagi infiltranti del derma (Figura 3b). Analisi istopatologiche di tessuti di criceti infetti con L. amazonensis e trattati con meglumina antimoniato a dosi di 80 e 120 mg SBV / kg / giorno durante 10 giorni hanno dimostrato cambiamenti associati al processo di infezione simili a quelle osservate nel gruppo di controllo (non trattato e infetta). In generale, i campioni di pelle di criceti hanno mostrato un livello di lieve plasmacellule (20%) e PMN (80%) cellule accompagnati da moderata infiltrazione di linfociti (80%), e un lieve (20%) o grave (80%) infiltrzione di macrofagi (Tabella 2). Queste osservazioni corrispondono a una diagnosi di dermatite granulomatosa, un evento infiammatoria che compromette il derma e muscolo soggiacente. Questa è la lesione principale associato alla infezione, che è compatibile con la manifestazione grave della leishmaniosi cutanea in tutti gli animali dello studio. Questa associazione è statisticamente correlata quando il chi-quadrato di Pearson, che ha prodotto p <0,05. Campioni di reni di 60-100% degli animali ha mostrato iperplasia moderata nella corteccia renale e glomeruli accompagnati da una leggera atrofia dei reni nel 75% degli animali. Queste osservazioni sono compatibili con glomerulonefritis membrana proliferativa, una diagnosi che è stato precedentemente associato ad infezione da infezione da Leishmania altri. Statistical Association era grande con un chi-quadrato di Pearson p <0,05. I fegati di 40-100% degli animali in tutti i gruppi hanno mostrato lievi variazioni vacuolari negli epatociti, che possono essere assoed ai processi fisiologici quali l'accumulo di glicogeno epatocitario. Altre anomalie del tessuto del fegato come la degenerazione grassa, fibrosi, e la congestione corrispondere al processo di infezione. Altre osservazioni quali cambiamenti vacuolari in epatociti, cardiomegalies, la presenza di inclusioni di eosinofili intracitoplasmatici, nonché la vacuolizzazione delle cellule nei tubi renali non sono statisticamente associati (p> 0,05) ad un effetto tossico del composto testato e probabilmente a causa di un processo fisiologico nei criceti.

2. L'efficacia terapeutica di antimoniato di meglumina nel modello criceto

Il fenotipo clinico di criceti infetti a tempi differenti dopo trattamento è riassunto in Tabella 1. Il trattamento con antimoniato di meglumina intramuscolare alla dose di 120 mg SBV / kg / giorno per 10 giorni peso era molto efficace che induce regressione completa del L. lesioni amazonensis in tutti gli animali (Figura 4). La percentuale di guarigione è stata del 100% entro il 2 e 8 settimane periodo post-trattamento. Tuttavia, dopo tre mesi la recidiva della lesione è stata osservata nel 20% dei criceti. Quando meglumina antimoniato è stato somministrato a 80 mg SBV / kg di peso corporeo, guarigione completa è stata osservata solo in 3 animali. Negli altri due animali la lesione è diminuito del 33,9 e 69,0%, rispettivamente (Figura 5). Dopo tre mesi, L. amazonensis rimasto presente nella pelle di tutti gli animali trattati con meglumina antimoniato alla dose di 80 mg SBV / kg / giorno e solo uno degli animali trattati con 120 mg SBV / kg / giorno di antimoniato di meglumina. Una dose terapeutica di intramuscolare 120 mg SBV / kg / giorno durante 10 giorni è stato determinato.

Usando il saggio di diluizione limitante, il numero stimato di parassiti ha mostrato una riduzione significativa per il gruppo trattato con meglumina antimoniato rispetto al negativo (non trattato) e controllo del veicolo (placebo) gruppo trattato (p <0,001). Parassiti vitali (0,4-1, 6 parassiti per mg di tessuto cutaneo) sono stati rilevati nel sito di lesione di animali non trattati e quelli trattati con PBS. I parassiti sono stati isolati da solo quegli animali che non rispondono al trattamento con meglumina antimoniato: un animale trattato con 120 mg / kg / giorno (Figura 5b) e due criceti trattati con 80 mg / kg / giorno (Figura 5c). Nessuna differenza è stata osservata nel carico parassita di criceti che non curare dopo aver ricevuto meglumina antimonite rispetto agli animali non trattati o trattati con PBS.

Nel istopatologia delle biopsie cutanee da criceti trattati con meglumina antimoniato per via intramuscolare a 120 mg SBV / kg / die non sono parassiti osservato; pochi macrofagi e linfociti infiltranti il ​​derma sono visti (Figura 6a, 6b). Al contrario, quando criceti sono stati trattati con meglumina antimoniato a 80 mg SBV / kg / giorno, dermatite granulomatosa con abbondante presenza di macrofagi infiltranti del derma ampiamente si osserva (figura 6c, 6d).

Utilizzando lo stesso schema terapeutico per studio di efficacia, la tossicità di meglumina antimoniato a 80 e 120 mg SBV / kg di peso corporeo è stato valutato. Stato di salute generale e del peso corporeo sono stati monitorati fino a 3 mesi dopo l'ultima somministrazione. Il trattamento con non ha influenzato il peso corporeo di criceti che varia da 104,9 a 124,69 e 129,71 gr a 134,02 gr di criceti infetti e non infetti, rispettivamente. Gli animali hanno guadagnato una media di 27,59 ± 4,22% del peso corporeo durante il trattamento e 28,74 ± 2,26% durante il follow-up (p> 0.05, Anova). Perdita di peso non è stata osservata in ogni gruppo di trattamento (dati non mostrati). I valori dei parametri sierici di creatinina e di alanina amino transferasi (ALT) e emocromo erano simili ai valori riferimenti a criceti antimoniato di meglumina trattati e non trattati. Solo il panino di azoto ureico (BUN), livello è stato aumentato nel 20% degli animali trattati.

Histopathological analisi dei tessuti provenienti da criceti infetti con L. amazonensis e trattati con meglumina antimoniato a dosi di 80 e 120 mg SBV / kg / giorno durante 10 giorni hanno mostrato variazioni associati a tossicità del farmaco.

Tabella 1
un tampone fosfato saline, giorni B dopo il trattamento.
Tabella 1. Fenotipo clinico di L. amazonensis infettati sperimentalmente criceti dopo il trattamento con meglumina antimoniato

L'efficacia di ciascun trattamento è stata valutata confrontando le dimensioni lesione prima e dopo i trattamenti, utilizzando il seguente sistema di punteggio: cure (guarigione del 100% dell'area e completa scomparsa della lesione); miglioramento clinico (riducendo la dimensione della lesione in> 50% dell'area); fallimento clinico (aumento della dimensione della lesione); recidiva (riattivazione della lesione dopo l'indurimento).


A: assente segno; NA: non applicabile; m: lievi; M: moderato; S: grave; PMN: neutrofili polimorfonucleati; NSL: No significativa lesione; GDM: dermatomiosite granulomatosa; PGD: dermatite piogranulomatosa. 1. Linfangiectasia; 2. Mineral materiale simile.
Tabella 2. Istopatologia della pelle di criceti infettati sperimentalmente con L. amazonensis e trattati con meglumina antimoniato

Figura 1
Corso di Figura 1. Dello sviluppo della lesione cutanea dopo l'infezione nei criceti inoculati via intradermica con 1-1,5 x 10 7 L. metaciclici amazonensis (fase stazionaria) promastigoti nel corso di 20 settimane. Asse y rappresenta la superficie dell'ulcera in mm.

Figura 2
Figura 2. Photogstoria raphyic di sviluppo di ulcerante lesione nella pelle dorsale di un criceto dorato dopo inoculazione intradermica di 10 x 10 7 a 2 settimane (a), 4 settimane (b) e 6 settimane (c).

Figura 3
Figura 3 biopsia della pelle da (a) criceto non infetto e non trattati:. Nessuna reazione infiammatoria non significativa alterazione istologica si osserva, (b) infetti e non trattati hamster: dermatite granulomatosa con presenza di cellule giganti multinucleate (freccia più asterisco) e parassiti abbondanti (nero frecce) e macrofagi (frecce bianche) infiltrante il derma. Ematossilina-eosina 400x macchia.

Figura 4
Storia di Figura 4. Fotografica di risposta clinica di criceti infetti con L. amazonensis e trattato con intramuscolare meglumina antimoniato a 120 mg SBV / kg / giorno Durin g 10 giorni. Immagini mostrano l'aspetto della lesione prima del trattamento (a), alla fine del trattamento (giorno 10) (b), e durante il follow-up: giorno 30 (c), 60 (d) e 90 (e) dopo trattamento.

Figura 5
Figura 5. Efficacia di antimoniato di meglumina nel trattamento della leishmaniosi cutanea in criceti. Criceti dorati sono stati infettati con L. amazonensis nella pelle dorsale. Dopo 6 settimane di infezione erano trattati (a) o trattate intramuscolare per dieci giorni con PBS solo (b), meglumina antimoniato SBV 120 mg / kg / giorno (c) o SBV 80 mg / kg / giorno (d). I grafici mostrano la percentuale di riduzione della dimensione della lesione alla fine del trattamento (giorno 0), e al giorno 15, 30, 60 e 90 di follow-up dopo la fine del trattamento. p <0.001 per 120 o 80 mg SBV / kg / die vs veicolo e non il trattamento.

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Figura 6. Biopsia cutanea da criceti infettati e trattati con antinmoniate intramuscolare megumine a 120 mg SBV / kg / giorno (a, b) e 80 mg SBV / kg / giorno (c, d). Presenza di macrofagi e linfociti scarse infiltrazione del derma. Non si osservano parassiti. Ematossilina-Eosina macchia 200x (a), 1000x (c) dermatite granulomatosa con presenza abbondante di macrofagi infiltranti il ​​derma ampiamente (c);. Macrofagi schiumosi con parassiti fagocitati. Ematossilina-Eosina macchia 200x (b), 1000x (d).

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Discussion

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Leishmaniosi cutanea è endemica nelle regioni tropicali ed neotropicale. E 'spesso definito come un gruppo di malattie a causa del variegato spettro di manifestazioni cliniche, che vanno da piccoli noduli cutanei lordo distruzione dei tessuti della mucosa. Maggior parte dei farmaci disponibili sono costose, richiedono regimi di trattamento a lungo e stanno diventando sempre più inefficace, rendendo necessaria la scoperta di nuovi farmaci.

Il modello di topo è ampiamente utilizzato, ma presenta alcuni inconvenienti. Così, per esempio, sulla base della lesione che si è sviluppato dopo l'iniezione intradermica di promastigoti di dermotropic specie di Leishmania, i topi possono essere divisi in tre gruppi: uno altamente sensibili per infezione persistente caratterizzato da una lesione espansione ulcerosa, come mostrato nella BALB / c e topi DBA / 2, DBA / 3; un gruppo relativamente resistente in cui le lesioni possono risolversi entro 8 settimane come si vede nella CBA / H, C3H/He e A / J e un gruppo altamente resistente in cui nessun reale lesione tipicacal della leishmaniosi cutanea sviluppa l'iniezione come visto in NZB e topi C57BL / 6 4. In contrasto con il modello murino di leishmaniosi cutanea dove il corso della malattia notevolmente variato tra vari ceppi di topi inbred comuni e specie di Leishmania, il criceto dorato, Mesocricetus auratus è considerato adeguato il bio-modello per valutare farmaci contro specie di Leishmania come sono suscettibili all'infezione da diverse specie di Leishmania. 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14. Semina del metaciclici (fase stazionaria) promastigoti di una delle specie dermotropic Leishmania è in grado di provocare lesioni cutanee tra uno e due mesi dopo l'inoculazione. Le lesioni diventano evidenti 20 giorni pi come papule che si sono evoluti per i noduli e poi, a ulcere. A seconda del sito di inoculazione (pe muso, foodpad, orecchie o la coda base) il criceto mostra una evoluzione prevedibile della malattia dopo l'infezione sperimentale, la maggior parte dei thtempo e caratterizzata dallo sviluppo di una lesione ulcerosa cronica locali simili a quelli osservati negli esseri umani affetti da leishmaniosi cutanea. Tuttavia, come negli esseri umani, lesioni variata in dimensioni a seconda dello stato immunitario di ogni individuo e quindi, in alcuni criceti tentativo di risolvere la lesione e la conseguente riduzione delle dimensioni della lesione può essere visto.

Anche se questo articolo si descrive l'infezione sperimentale nella pelle dorsale di criceti con promastigoti di L. amazonesis, questo modello è anche fattibile per altre specie di Leishmania dermotropic, cambiando soltanto la dimensione dell'inoculo. In sintesi, l'approccio di iniezione intradermica di promastigoti alla pelle dorsale dimostra che le caratteristiche cliniche e patologiche di leishmaniosi cutanea indotta nella pelle dorsale di criceti sono molto simili alla malattia umana. Inoltre, il follow-up clinico di ulcere dopo trattamento con composti specifici o dtappeti è facilitato in questo modello di CL indotta in pelle dorsale. L'evoluzione delle lesioni è facilmente determinata confrontando la dimensione della lesione ottenute prima e dopo il trattamento. La risposta clinica in termini di cura è facilmente seguita secondo la riepitelizzazione (come visibile nella figura 4). Si conclude che l'infezione sperimentale nella pelle dorsale di criceti con specie di Leishmania rappresenta un modello utile per convalidare il potenziale di composti che sono candidati per i farmaci antileishmanial.

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Disclosures

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Acknowledgments

Questo studio è stato sostenuto dalle concessioni dal Comitato per la Ricerca presso l'Università di Antioquia (CODI), l'Istituto Colombiano per lo sviluppo di Scienza e Tecnologia - COLCIENCIAS e il Centro per lo sviluppo dei prodotti contro le malattie tropicali - CIDEPRO.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A
Xilacine Reagent Synthesis
PBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher Scientific 15-077-958
Giemsa Reagent Sigma-Aldrich GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis
Microscopy Equipment Nikon Instruments YS2-T

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References

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Leishmaniosi cutanea nella pelle dorsale di criceti: ​​un modello utile per lo screening delle droghe Antileishmanial
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Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).More

Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).

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