Summary
שיטה זו מאפשרת ניטור של תאים בזמן אמת מדידות כמותיות של פרמטרים שונים הגירה סלולריים כגון מהירות, תזוזה, ומהירות. שלא כמו שיטות מסורתיות, גישה זו בזמן אמת אינה מבוססת על מדידות כמותיות נקודות קצה הגירה, אלא היא מאפשרת ניטור חישוב פרמטרים שונים ברציפות.
Abstract
נדידת תאים היא תהליך דינמי, וזה חשוב עבור ההתפתחות העוברית, תיקון רקמות, בתפקוד המערכת החיסונית, וכן הפלישה הגידול 1, 2. במהלך הנדידה כיוונית, התאים לנוע במהירות בתגובה האות chemotactic תאיים, או כתגובה לאותות פנימיים הניתנים על ידי 3 מכונות תנועתיות בסיסי. הגירה אקראית מתרחשת כאשר תא בעל כיווניות פנימי נמוך, מה שמאפשר לתאים לחקור את הסביבה המקומית שלהם.
נדידת תאים היא תהליך מורכב, בתא התגובה הראשונית עובר קיטוב ומרחיב בליטות לכיוון ההגירה 2. השיטות המסורתיות למדידת הגירה כגון assay הגירה בוידן קאמרית היא שיטה קלה למדידת chemotaxis במבחנה, המאפשרת מדידת הגירה כתוצאה נקודת הסיום. עם זאת, גישה זו לא מאפשרת מדידה של פרמטרים הגירה בודדים, וגם לא מאפשרים visualization של שינויים מורפולוגיים כי התא עובר במהלך ההעברה.
כאן, אנו מציגים שיטה המאפשרת לנו לעקוב אחר תאים נודדים בזמן אמת באמצעות וידאו - פקיעה מיקרוסקופיה זמן. מאז נדידת תאים ופלישה הם סימני ההיכר של סרטן, שיטה זו יחולו בחקר תאים סרטניים הגירה הפלישה במבחנה. הגירה אקראי של טסיות כבר נחשב לאחד הפרמטרים של 4 תפקוד טסיות, ולכן שיטה זו יכולה גם לעזור בלימוד פונקציות הטסיות. Assay זה יש את היתרון של להיות מהיר, אמין, לשחזור, ואינו דורש אופטימיזציה של מספרים סלולריים. כדי לשמור על תנאים מתאימים פיזיולוגית של תאים, מיקרוסקופ מצויד אספקת 2 CO ו התרמוסטט לטמפרטורה. תנועת התא מנוטר על ידי צילום תמונות באמצעות המצלמה מצויד המיקרוסקופ במרווחי זמן קבועים. נדידת תאים ניתן לחשב את המהירות הממוצעת על ידי מדידהעקירה שות ל מוצע נפ, המחושב על ידי תוכנה Slidebook.
Protocol
1. הכנת צלחת מצופה קולגן
- לדלל קולגן לריכוז סופי של 10 מיקרוגרם / מ"ל ב Opti-ממ התקשורת.
- מעיל 6 צלחות גם עם קולגן, על ידי הוספת 1.5 מ"ל משלב 1 זה גם כן. דגירה בין לילה ב 4 ° C.
- למחרת, לשטוף את הצלחת 2 פעמים עם פוספט 1x שנאגרו מלוחים (PBS) ולאחסן אותן ב PBS.
2. תא הכנה זריעה על צלחת 6 גם
הערה: השתמש בתקשורת חמות PBS על מנת להבטיח תנאים אופטימליים עבור תנועת התא
- לגדול מד"א-MB-231 (שד פולשני לסרטן קו תאים) בדלילות שינוי Dulbecco הנשרים בינוני (DMEM) עם 10% בסרום שור עוברית (FBS). בדוגמה זו, אנו משתמשים מד"א-MB-231, עם זאת, בשיטה זו ניתן להחיל על כל קווי סרטניים ולא חסיד תאים סרטניים.
- שטפו פעמיים עם תאים חמים 1x PBS ולאסוף ידי trypsinization. לבדוק תאים תחת מיקרוסקופ כדי suמחדש כי תאי מנותקים כראוי על ידי הטיפול טריפסין.
- אוספים את התאים על ידי הוספת DMEM בינוני עם 10% FBS, בעדינות לסובב את התאים ב 1000 גרם במשך 5 דקות. Resuspend תא גלולה בעדינות DMEM בינוני עם FBS 10%.
- לשבור את התא על ידי גלולה pipetting מעלה מטה בעדינות. חשוב לשבור אשכולות תאים לתאים בודדים עד כמה שניתן.
- לספור את התאים לדלל את הריכוז הסופי של 50,000 תאים / מ"ל DMEM התקשורת עם FBS 10%. לוותר על 2 מ"ל גם לתוך כל אחד.
- דגירה את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס תרבות רקמות בחממה במשך הלילה, עד תחילת מיקרוסקופיה זמן לשגות.
- כדי להבטיח שטח מספיק עבור הגירה, ליצור פצע באמצעות קצה פיפטה, לשטוף את הצלחת עם 1X PBS כדי להסיר שאריות (נוצר כתוצאה של הפצע) ולהוסיף DMEM עם FBS 10%. בדוק במיקרוסקופ על תאים צפים. אם מספר גדול של תאים הן צף, לחזור על התהליך כביסה. עכשיו, צלחת מוכנה להיות על הגדרתמיקרוסקופ לרכישת התמונה.
3. מיקרוסקופ התקנה ייבוא תמונות אוטומטי
יש כמה תוכנות הדמיה חבילות השולטים מיקרוסקופ לרכישת תמונה אוטומטי. כאן, אנו משתמשים Slidebook התוכנה 5.0 הדמיה רכישות אוטומטיים מבוצעים על מיקרוסקופ אולימפוס (Olympus IX81), מצמידים את המצלמה C9100-EM Hamamatsu, שהוא מצוין חי תאים יישומים בהם מהירות הרכישה phototoxicity מינימלית הוא בעל חשיבות עליונה. המערכת כוללת בשלב העליון חדר בקרה סביבתית (תא נויה Live) ואת הבקר בשלב אוטומטית XY (לפני Proscan). תמונות נרכשות עם מטרה 10X Ph1/0.30 UPLANFL, במצב השדה מואר, באמצעות מרווח זמן מוגדר. פרוטוקול הבאה מתארת את רכישת התמונה.
- הפעל את המיקרוסקופ, המצלמה, מכשיר הדמיה תא חי. מקם את הצלחת על הבמה מיקרוסקופיים. מכסים את הצלחת על ידי סביבתיים נייד נויה חייםronmental חדר הבקרה, אשר מחובר עם אספקת CO 2 ו חיישני טמפרטורה. הגדר את התרמוסטט על 37 ° C ו-CO 2 על 5%.
- SlideBook התוכנה מאפשרת בחירה אובייקטיבית אוטומטי לחלוטין, בחירת אורך הגל מעבר קל בין טכניקות שדה ניאון ובהיר. על מנת להגדיר פרמטרים שונים של מוקד שליטה, תוכנה פתוחה SlideBook> ללכת בשורת התפריט> בחר להתמקד שליטה, על ידי לחיצה>
ובחר הפרמטרים הבאים: - ב "תיבת המטרה", מגדירים את המטרה על ידי בחירה מתפריט החלון. שים לב כי אנו משתמשים מטרת השלב שבחרת באופן ידני את הטבעת בשלב המתאים הקבל. אם באמצעות מערכת אוטומטית עם הקבל, זה ייקבע באופן אוטומטי באמצעות תוכנית תוכנה. לחילופין, אם לא צריח הקבל אובייקטיבי ולא הם אוטומטיים כל אלה צריכים לבחור ידניתלי.
- בתיבת "מסנן הגדר":
- בחר בהגדרות לכוון את נתיב האור העינית או המצלמה הגלילה כדי לראות את המסננים הזמינים ("לחיות" את העינית, "widefield" עבור מצלמה במערכת שלנו).
- בחר את המסנן המתאים brightfield תאורה (בערכה שלנו למעלה, אפשרות זו שכותרתו "דסק" המייצגת עמדה פתוחה נתיב האור brightfield).
- בחר את מקור האור על ידי לחיצה על "מוארת פתח" כדי לפתוח את התריס בתחום בהיר.
- כדי להציג את הדוגמה תחת פיסת העין, בחר את המסנן בתחום בהיר (תנוחת "6" במערכת שלנו) על הצריח. אחרי בתחילה הצגת המדגם דרך העינית כדי למצוא בשדות המתאימים ולהביא מדגם אל המוקד (צעדים 3.2.1 ל 3.2.2.3). להזיז את הצריח מסנן לשנות את נתיב האור אל המצלמה עבור לכידת תמונה (עמדה "1" במערכת שלנו).
- בשלב אוטומטיות מאפשר מבחר שונה XY תיאוםTES לתפוס בתחומים שונים של הריבית במהלך רכישת התמונה. בתוכנה SlideBook, עובר לפקד המוקד, בחר "XY", בחר במיקומים שונים אם כי חתיכת העין, ולאחר מכן לחץ על "נקודת סט" מנעול במקום אחד עבור לכידת תמונה (איור 1).
- לכוונן את הפוקוס של תמונת המצלמה המוצג על המסך. זה ניתן לעשות גם באמצעות פקדים ידניים על מיקרוסקופ או בקרות מחשב, אשר יכול להתאים את המיקוד במרווחים נאה הרבה יותר.
- באמצעות הפקדים בחלון "בקרת פוקוס", להתאים את המיקום Z הבמה. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, להתמקד בליטות הסלולר שטוח ליד קשר עם הצלחת.
- כדי לסייע עם התמקדות השתמשו במחוון כדי להתאים את זמני החשיפה להיות בטווח המתאים למיקוד. אם מספר רב של עמדות XY נבחרו, לשנות את הפוקוס לתפקיד כל אדם: תחת שליטה המוקד> XY> נקודת ביקור. הערה: זה נעשה כדי להפוך את ה ספק,בכל שדות ממוקדים כראוי עבור תמונה אופטימלית.
- להשתמש בתוכנה כדי להגדיר פרמטרים ללכוד חלון. ב SlideBook, פתח את לכידת ידי בחירת
משורת התפריטים. ראה איור 2. לאחר מכן לבדוק את הפרמטרים הבאים. - בדוק לכידת> סוג כמו זמן לשגות.
- יש לבדוק את מערכת סינון: שדה רוחב: DIC (עבור התמונה בשדה בהיר).
- "לשגות לכידת זמן" הוא מספר נקודות זמן, כי יהיה בשבי (זה יכול להשתנות, תלוי בסוג התא). הוא משך את האורך הכולל של זמן הניסוי. יחידת זמן [ב אלפיות השנייה (MS), שניות (ים), דקות (מ ') או שעות (ח)] ניתן לבחור מתוך התפריט הנפתח.
- "מרווח" הוא עיכוב בין תחילת timepoint 1 ותחילת timepoint הבא. בעת ההקלדה ב 2 של ערכים אלה, השדה 3 תחושב אוטומטית.
- ללכוד מספר רב של XY: בחר "רברשימת נקודה "לתפקיד יותר מ 1 XY.
- שם הקובץ. בדוגמה שניתנה, יש לנו את השם '231 '.
- כדי להימנע צפוי לסגור את המחשב עקב מספר רב של תמונות, להשתמש "אפשרות סליל" כדי לשמור את הקובץ. זה לא חובה, אבל מומלץ מאוד. לשם כך, תחת כיבוש contro l> בחר מתקדם> Spool> לכידת לזיכרון ולשמור את הקובץ סליל אחרי כל נקודות הזמן. עיון מיקום לשמירת הספר שקופיות קובץ (איור 3). הסרט שנוצר אפשר לייבא מאוחר יותר מהמיקום המיועד. שלבי ההתקנה מיקרוסקופ כבר לסכם הקובץ 3.1 .
ובחר הפרמטרים הבאים: 
משורת התפריטים. ראה איור 2. לאחר מכן לבדוק את הפרמטרים הבאים. 4. תמונה עיבוד וניתוח של הגירה: חישוב מהירות תזוזה
בדוגמה זו, עיבוד התמונה נעשה על ידי SlideBoאישור 5, 6 5.0 התוכנה. ישנן תוכניות שונות כגון ImageJ 7 לעיבוד תמונה וניתוח.
- לייבא את הקבצים SlideBook שנוצר תמונות של שדות שונים בנקודות זמן שונות. עבור אל שורת התפריטים> תחת 'תמונה'> ייבוא> ספר שקופיות סליל> לבחור את הקובץ הרצוי (איור 4 א).
- כאן המטרה שלנו היא לעקוב אחר התנועה של תאים בודדים. זה יכול להיעשות באמצעות מעקב אוטומטי או מעקב פרטני. בדוגמה, השתמשנו מעקב ידני, שכן הדבר מאפשר שלילת חפצים בקלות, וזה קשה יותר עם מעקב אוטומטי.
- פתח את הקובץ SlideBook, בו אנו צריכים לבצע מעקב. בתפריט: מסכת בחר> מעקב פרוטוקול החלקיקים> פרוטוקול החלקיקים מעקב ידני (איור 4 ב). יופיע חלון עם נקודות התחלה וסיום זמן 4C (איור).
- Begin כדי לעקוב אחר תנועה של תאים בודדים על ידי לחיצה על מרכז תא (גרעין). עקוב אחר כ 10 תאים של כל סרט, ולפחות שלושה סרטים שונים יש לבחור ממקומות שונים, כך כ 30 תאים ינותחו מניסוי 1. כל ניסוי יש לחזור שלוש פעמים. כדי לאפשר גישה בלתי מוטה, בחר בתאים ממקומות שונים כגון כמה תאים מהחזית, במרכז ועוד פינות על "אישור", לאחר מעקב נעשה.
- הגירה אקראי יכול להיות מנותח על ידי מדידת שינויים וכו ', מהירות מהירות או עקירה כדי לנתח את הנתונים, תחת תפריט> מסכת בחר> מעקב אחר החלקיקים> מעקב אחר פרוטוקול החלקיקים. בחר פרמטרים מעקב כמתואר, להלן: (5 א איור):
- עקוב אחר עם - לבחור את הפרמטר שאתה רוצה לעקוב אחר מתוך הרשימה הנפתחת. בדוגמה זו, השתמשנו, מרכז שטח (את הקואורדינטות של מרכז האובמקרינים).
- לחץ על "לעקוב אחר ולהמשיך". לאחר מעקב מושלם, זה יהיה באופן אוטומטי להתקדם לשלב הבא.
- בחר הסטטיסטיקות הרצויות עבור כל נתיב, כמו עקירה המהירות הממוצעת (ראה איור 5 ב '):
- מהירות ממוצעת - מרחק המסעות הכולל חלקי הזמן הנדרש לעבור את המרחק.
- עקירה מוחלטת - את המרחק הכולל שעובר האובייקט.
- לחץ על "חישוב המשך" אם אתה רוצה להתקדם לשלב הבא, או פשוט לבחור "חשב" אם אתה רוצה להציג את הנתונים הסטטיסטיים, מבלי לעבור לשלב הבא. קובץ ייווצר אותו ניתן לשמור כקובץ טקסט יכול להיות מאוחר יותר לייצא ל-Excel.
- על מנת לעקוב אחר אובייקטים באמצעות פרוטוקול מעקב אוטומטי, 1 מסכת יש ליצור.
- בחר מסכת> Image קטע> חלון קטע יופיע> בחר עד לסף מושגת כך ספטמברarating אובייקט אחד מאחרים> לחץ להחיל> אישור (ראה תרשים 5 ג). שלב 4.5.1 זהה.
- הסרה של אובייקטים קטנים יותר - סמן תיבה זו כדי להסיר באופן סלקטיבי עצמים קטנים יותר בגודל נתון. הזן את גודל בתחום העריכה ולבחור באפשרות מיקרון או פיקסלים כיחידה. זה משמש כדי להסיר חפצים שגרמו לעתים קרובות על ידי פסולת.
- תנועה מינימלית - הכנס את המספר המינימלי של נקודות זמן, כי צריך להיות במעקב על מנת לקבוע נתיב.
- מקסימום תנועה - הזן את התנועה המקסימלית שאתה מצפה מאובייקט נתון מנקודת פעם אחת לבאה אחריה.
- צעדים כדי לנתח את הנתונים זהים מעקב ידני (עיין בשלבים 4.5.2 ל 4.6.2).
5. נציג תוצאות
דוגמה של ניתוח ההגירה אקראי לכמת כמו מבחינת מהירות תזוזה (איור 6). לאחר ייצוא הקובץ לאo Excel, הנתונים להתוות באמצעות תיבת העלילה שפם. ניתוח סטטיסטי השוואת עקירה מוחלטת המהירות הממוצעת בין הבדיקה והבקרה מתבצע באמצעות מאן ויטני, מבחן. מדגם הבדיקה מראה על עלייה המהירות הממוצעת לעומת שליטה. מדגם הבדיקה מראה על עלייה עקירה מוחלטת לעומת שליטה.
סרט שליטה מבחן: בקרת מד"א-MB-231 ו מבחן מד"א-MB-231 תאים היו זרועים על קולגן בן לילה. זמן לשגות מיקרוסקופ וידאו נערך על ידי מיקרוסקופ אולימפוס, מצמידים את המצלמה EM-Hamamatsu. התמונות נלקחות בהפרש של שעה 1 עבור סכום כולל של 18 שעות במהלך הגירה אקראי. נא לראות את הסרט 1 ו 2 סרט ההגירה אקראי לבקרה דגימות הבדיקה.
מיקרוסקופ ההתקנה:
באיור 1. הגדרת מספר רב של נקודות על התמונה ללכוד.
איור 2. שלבים המתארים שליטה ללכוד. לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה .
איור 3. כיצד לשמור מספר רב של תמונות.
dflinebreak "> עיבוד תמונה וניתוח של הגירה.
איור 4 א. שלבים כדי לייבא תמונה לניתוח נתונים.
איור 4 ב '. השלבים לניתוח נתונים באמצעות פרוטוקול החלקיקים מעקב.
איור המתאר 4C. חלון נתיב באורך של חלקיקים מסומנים.
השלבים של ניתוח נתונים.
איור 5 א. שלבים המתארים הפרמטרים של פרוטוקול מעקב אחר החלקיקים.
איור 5 ב '. מבחר נתונים סטטיסטיים נתיב להיות מנותח.
איור 5 ג. הצעדים הבאים כדי ליצור מסכה על פרוטוקול מעקב אוטומטי.
איור 6. מהירות ממוצעת (איור6 א) ועקירה (איור 6 ב) הוא להתוות העלילה שפם. מדגם הבדיקה מציגה גידול של מהירות תזוזה כמו להשוות לשלוט.
סרטים
סרט 1. הגירה של תאים שליטה. לחץ כאן כדי להציג את הסרט .
סרט 2. הגירה של תאים הבדיקה. לחץ כאן כדי להציג את הסרט .
בקרת מד"א-MB-231 ו מבחן מד"א-MB-231 תאים היו זרע בדלילות על קולגן את הלילה. זמן לשגות מיקרוסקופ וידאו נערך על ידי מיקרוסקופ אולימפוס, מצמידים את המצלמה EM-Hamamatsu. התמונות נלקחות בהפרש של 1hour במשך 18 שעות במהלך הגירה אקראי. אנא ראה את הסרטים של הגירה אקראי לבקרה הבדיקה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בזמן אמת אקראי assay הגירה מאפשרת מדויק, ניתוח רגישות, של הגירה פרמטרים סלולריים כגון מהירות תזוזה. שיטה זו אינה מצטמצמת אך בסופו של דבר המדידה ערך הנקודה, ולכן הוא כמותי יותר. מאז, תאים מנוטרים במדיום DMEM רגיל עם סרום, זה מפחית את ההשפעה המזיקה של הדגירה כבר תקשורת חופשית בסרום. הוכח כי הגירה של תאים תלויה עיצוב ושבירת קשר סלולריים עם תשתית 8, אם כן, בשיטה זו ניתן להשתמש כדי ללמוד את ההשפעה של מתחת לקרקע שונות על הגירה.
אחד השלבים הקריטיים כולל שליטה נכונה של הטמפרטורה על 37 מעלות צלזיוס ו - CO 2 של 5% על מנת להבטיח העברה אופטימלית. Assay מאפשר גמישות לפקח התגובות נודדות בנקודות הזמן הרצוי, אולם הוא עשוי לדרוש אופטימיזציה של מספר נקודות זמן. לדוגמה, כמה תאים שיש להם שיעורי הגירה נמוכים יותר ייתכן שיהיה צורך במעקב במשך Loזמן nger לעומת תאים בעלי שיעורי ההגירה הגבוהים יותר.
Microenvironment של הגידול הוא אחד הגורמים המכריעים היווצרות סרטן. סרטן תוצאות האינטראקציה של תאים סרטניים עם תאים המקיפים כגון לתאי אנדותל, סטרומה ותאים דלקתיים 9. Assay זה יכול להיות שונה כדי ללמוד כיצד ההגירה של תאים סרטניים מושפעים microenvironment. אחת הדרכים שבה ניתן להשיג היא על ידי לימוד ההגירה של תאים סרטניים שכותרתו fluorescently הגדלים אוכלוסיה מעורבת של תאים שונים כגון תאים סטומה האנדותל. שיטה זו יכולה לשמש גם כדי ללמוד ריפוי פצעים בזמן אמת.
זמן לשגות מיקרוסקופ יכול להיות שונה כדי לפקח על הפלישה התא, חלוקת התא, אפופטוזיס והדינמיקה lamellipodial ודינמיקה הדבקה באמצעות מוקד עדשות ברזולוציה גבוהה יותר.
אחת המגבלות של שיטה זו הוא שהיא אינה מאפשרת פיקוח של רשות ההגירהtion in vivo. מאחר ואין ציוד זמין שיכול למדוד הגירה בזמן אמת בגוף, זה סוג של assay אינו מתאים בהגירה vivo. זה גם לא מאפשר לנו להבהיר את המנגנון הביוכימי ורכיבים איתות כי הם חשוב נדידת תאים. על מנת לענות על מסלולי איתות, חשוב לבצע ניסויים ביוכימיים. ראה הפניות לקבוצות השתמשו בשיטה זו על הגירה אקראי 6, 10-14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין לנו מה למסור.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות אמנדה Struckhoff לעזרה ראשונית עם הניסוי. עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם המכון הלאומי לבריאות 5RO1CA115706.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH30243.01 | |
| FBS | Gemini Bio Products | 100-106 | |
| Opti-Mem | Invitrogen | 31985-070 | |
| Collagen | BD Biosciences | 354231 | |
| Microscope with Live Cell chamber & Automated XY stage controller | Olympus Corporation | Olympus 1X81 | |
| Environmental control chamber | Neue | Neue Live Cell Chamber | Ours has a custom built rectangular glass plate top for appropriate optics through the top of the chamber. The rectangular shape accommodates multi-well plates used in many of our experiments. |
| Automated XY stage | Prior Scientific | Prior Proscan | This allows precise return to multiply selected XY positions during time lapse microscopy. |
| Camera | Hamamatsu EM camera C9100 | ||
| Software | Typically purchased through microscope vendor such as Olympus | Slide Book 5 |
References
- Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84, 359-369 (1996).
- Ridley, A. J. Cell migration: integrating signals from front to back. Science. 302, 1704-1709 (2003).
- Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. Random versus directionally persistent cell migration. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 538-549 (2009).
- Valone, F. H., Austen, K. F., Goetzl, E. J. Modulation of the random migration of human platelets. J. Clin. Invest. 54, 1100-1106 (1974).
- Biehlmaier, O., Hehl, J., Csucs, G. Acquisition speed comparison of microscope software programs. Microsc. Res. Tech. 74, 539-545 (2011).
- Struckhoff, A. P. Dynamic regulation of ROCK in tumor cells controls CXCR4-driven adhesion events. J. Cell. Sci. 123, 401-412 (2010).
- Abramoff, M. D., Magelhaes, P. J., Ram, S. J. Image Processing with ImageJ. Biophoton. Internat. 11, 36-42 (2004).
- Greenberg, J. H., Seppa, S., Seppa, H., Tyl Hewitt, A. Role of collagen and fibronectin in neural crest cell adhesion and migration. Dev. Biol. 87, 259-266 (1981).
- Albini, A., Sporn, M. B. The tumour microenvironment as a target for chemoprevention. Nat. Rev. Cancer. 7, 139-147 (2007).
- Yu, Y. P., Luo, J. H. Myopodin-mediated suppression of prostate cancer cell migration involves interaction with zyxin. Cancer. Res. 66, 7414-7419 (2006).
- Teng, T. S., Lin, B., Manser, E., Ng, D. C., Cao, X. Stat3 promotes directional cell migration by regulating Rac1 activity via its activator betaPIX. J. Cell. Sci. 122, 4150-4159 (2009).
- Wozniak, M. A., Kwong, L., Chodniewicz, D., Klemke, R. L., Keely, P. J. R-Ras controls membrane protrusion and cell migration through the spatial regulation of Rac and Rho. Mol. Biol. Cell. 16, 84-96 (2005).
- Orr, A. W., Elzie, C. A., Kucik, D. F., Murphy-Ullrich, J. E. Thrombospondin signaling through the calreticulin/LDL receptor-related protein co-complex stimulates random and directed cell migration. J. Cell Sci. 116, 2917-2927 (2003).
- Smith, A., Bracke, M., Leitinger, B., Porter, J. C., Hogg, N. LFA-1-induced T cell migration on ICAM-1 involves regulation of MLCK-mediated attachment and ROCK-dependent detachment. J. Cell Sci. 116, 3123-3133 (2003).
