En stor hinder i nuvarande stamcellsterapi är att bestämma den mest effektiva metoden för att leverera dessa celler att värdvävnader. Här beskriver vi ett kitosan-baserad leverans metod som är effektiv och enkel i tillvägagångssätt, samtidigt som fett som härrör stamceller för att behålla sin multipotens.
Multipotenta stamceller har visat sig vara mycket användbara när det gäller regenerativ medicin 1-3. Emellertid, i syfte att använda dessa celler effektivt för vävnadsregenerering, måste ett antal variabler beaktas. Dessa variabler inkluderar: den totala volymen och ytarean av implantationsstället, de mekaniska egenskaperna hos vävnaden och vävnaden mikromiljö, vilken innefattar mängden av vaskularisering och komponenterna i den extracellulära matrisen. Därför måste de material som används för att leverera dessa celler vara biokompatibla med en definierad kemisk sammansättning med bibehållande av en mekanisk hållfasthet som härmar värdvävnaden. Dessa material måste också vara permeabelt för syre och näringsämnen för att tillhandahålla en gynnsam mikromiljö för celler att fästa och föröka sig. Kitosan, en katjonisk polysackarid med utmärkt biokompatibilitet, kan lätt modifieras kemiskt och har en hög affinitet för att binda med in vivo-macromolecules 4-5. Kitosan efterliknar glykosaminoglykan del av den extracellulära matrisen, så att den kan fungera som ett substrat för cellvidfästning,-migration och-proliferation. I denna studie använder vi chitosan i form av mikrosfärer att leverera fett som härrör stamceller (ASC) i en kollagen baserat tredimensionell ställning 6. En ideal cell-till-mikrosfär-förhållandet bestämdes med avseende på inkubationstid och celldensitet för att uppnå maximala antalet celler som kan laddas. Gång ASC ympas på den kitosan-mikrosfärer (CSM), är de inbäddade i en kollagen byggnadsställning och kan upprätthållas i odling under längre tidsperioder. Sammanfattningsvis tillhandahåller denna studie en metod för att exakt leverera stamceller inom en tredimensionell byggnadsställning biomaterialet.
En stor hinder i stam cell-baserad terapi utvecklar effektiva metoder för leverans av celler till de angivna områden för reparation. Grund av en patient till en variabilitet vävnadstypen, skada storlek och djup, måste metoden för att leverera stamceller bestämmas från fall till fall. Även bädda stamceller i en matris och leverera dem till sårstället verkar vara ett nästa logiska strategi för tissue engineering, vissa tekniska hinder kvar. Detta inkluderar förmågan hos de inbäddade cellerna att fästa ti…
The authors have nothing to disclose.
Doz stöds av ett bidrag som beviljats från The Geneva Foundation. SN fick stöd av postdoktorsstipendium Grant från Pittsburgh Tissue Engineering Initiative.
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
Hanks BalancedSalt Solution (HBSS) | Gibco | 14175 | Consumable |
Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30071.03 | Consumable |
Collagenase Type II | Sigma-Aldrich | C6685 | Consumable |
70-μm nylon mesh filter | BD Biosciences | 352350 | Consumable |
100-μm nylon mesh filter | BD Biosciences | 352360 | Consumable |
MesenPRO Growth Medium System | Invitrogen | 12746-012 | Consumable |
L-glutamine | Gibco | 25030 | Consumable |
T75 Tissue Culture Flask | BD Biosciences | 137787 | Consumable |
Chitosan | Sigma-Aldrich | 448869 | Consumable |
Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 320099 | Consumable |
N-Octanol | Acros Organics | 150630025 | Consumable |
Sorbitan-Mono-oleate | Sigma-Aldrich | S6760 | Consumable |
Potassium Hydroxide | Sigma-Aldrich | P1767 | Consumable |
Acetone | Fisher Scientific | L-4859 | Consumable |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 270741 | Consumable |
Trinitro Benzenesulfonic Acid | Sigma-Aldrich | P2297 | Consumable |
Hydrochloric Acid | Sigma-Aldrich | 320331 | Consumable |
Ethyl Ether | Sigma-Aldrich | 472-484 | Consumable |
8-μm Tissue Culture Plate Inserts | BD Biosciences | 353097 | Consumable |
1.5-ml Microcentrifuge Tubes | Fisher | 05-408-129 | Consumable |
MTT Reagent | Invitrogen | M6494 | Consumable |
Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D8779 | Consumable |
Qtracker Cell Labeling Kit (Q tracker 655) | Molecular probes | Q2502PMP | Consumable |
Type 1 Collagen | Travigen | 3447-020-01 | Consumable |
Sodium Hydroxide | Sigma-Aldrich | S8045 | Consumable |
12-Well Tissue Culture Plates | BD Biosciences | 353043 | Consumable |
Centrifuge | Eppendorf | 5417R | Equipment |
Orbital Shaker | New Brunswick Scienctific | C24 | Equipment |
Humidified Incubator with Air-5% CO2 | Thermo Scientific | Model 370 | Equipment |
Overhead Stirrer | IKA | Visc6000 | Equipment |
Magnetic Stirrer | Corning | PC-210 | Equipment |
Vacuum Desiccator | – | – | Equipment |
Particle Size Analyzer | Malvern | STP2000 Spraytec | Equipment |
Water Bath | Fisher Scientific | Isotemp210 | Equipment |
Spectrophotometer | Beckman | Beckman Coulter DU800UV/Visible Spectrophotometer | Equipment |
Vortex | Diagger | 3030a | Equipment |
Microplate Reader | Molecular Devices | SpectraMax M2 | Equipment |
Light/Fluorescence Microscope | Olympus | IX71 | Equipment |
Confocal Microscope | Olympus | FV-500 Laser Scanning Confocal Microscope | Equipment |
Scanning Electron Microscope | Carl Zeiss MicroImaging | Leo 435 VP | Equipment |
Transmission Electron Microscope | JEOL | JEOL 1230 | Equipment |