Summary
मजबूर तैरना परीक्षण कृन्तकों में संभावित एंटी प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए एक प्रयोगात्मक दृष्टिकोण के रूप में मान्य है. प्रायोगिक पशुओं के पानी और भागने से संबंधित गतिशीलता व्यवहार के एक टैंक में रखा जाता है की मात्रा है. इस परीक्षण के माउस संस्करण के लिए सामान्य प्रक्रियाओं का वर्णन कर रहे हैं.
Abstract
मजबूर तैरना परीक्षण एक कृंतक व्यवहार एंटी दवाओं, नए यौगिकों के एंटी प्रभावकारिता, और प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती है कि प्रतिपादन या राज्यों की तरह अवसादग्रस्तता को रोकने के उद्देश्य से कर रहे हैं के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया परीक्षण है. चूहे कि पानी से भरा है और उनके भागने से संबंधित गतिशीलता व्यवहार मापा जाता है एक अपरिहार्य पारदर्शी टैंक में रखा जाता है. मजबूर तैरना परीक्षण करने के लिए मज़बूती से आचरण सरल है और यह कम से कम विशेष उपकरणों की आवश्यकता है. मजबूर तैरना परीक्षण के सफल कार्यान्वयन के कुछ प्रक्रियात्मक विवरण और चूहों को न्यूनतम अनुचित तनाव के पालन की आवश्यकता है. प्रोटोकॉल विवरण और साथ वीडियो में, हम व्याख्या कैसे इस परीक्षण के संभावित नुकसान है कि परिणामों की व्याख्या और कैसे उन से बचने के लिए हानिकारक हो सकता है पर जोर देने के साथ माउस संस्करण का संचालन करने के लिए. इसके अतिरिक्त, हम व्याख्या कैसे परीक्षण में प्रकट व्यवहार का मूल्यांकन कर रहे हैं.
Protocol
1. सामग्री और विधि
1.1. पानी के टैंक
बेलनाकार टैंक (30 सेमी ऊंचाई x 20 सेमी व्यास) माउस मजबूर हमारी प्रयोगशाला में तैरने परीक्षण (FST) के लिए आवश्यक पारदर्शी Plexiglas का निर्माण कर रहे हैं, इस सामग्री के रूप में टैंक और दुर्घटनाओं गिलास से बेहतर के लगातार आंदोलन को झेलने में सक्षम है. जल स्तर नीचे से 15 सेमी है और करने के लिए सुनिश्चित करें कि पानी की मात्रा चूहों भर के अनुरूप है टैंक पर चिह्नित किया जाना चाहिए. टैंकों की संख्या आदर्श कम से कम दो बार के रूप में एक समय में परीक्षण किया जा रहा है चूहों की संख्या के रूप में कई किया जाना चाहिए, ताकि दूसरा पानी की टंकी सेट करते हुए पहला सेट प्रयोग में है भरा जा सकता है. टैंक के आयामों के एक तरीका है कि चूहों टैंक के नीचे स्पर्श, या तो उनके पैर या उनके पूंछ के साथ तैराकी परीक्षण के दौरान, करने में सक्षम नहीं होगा में चुना जाना चाहिए. टंकी की ऊंचाई काफी उच्च टैंक से भागने से चूहों को रोकने होना चाहिए. कृपया ध्यान देंकि टैंक का व्यास और पानी की गहराई महत्वपूर्ण पैरामीटर है कि करने के लिए चूहों के व्यवहार (इन मुद्दों के एक विस्तृत विश्लेषण के लिए 1-3 देखें) को बदलने के लिए समायोजित किया जा सकता हैं.
1.2. थर्मामीटर
एक पानी की प्रतिरोधी अवरक्त थर्मामीटर बेहतर है, के बाद से तापमान के तेजी से माप परीक्षण करने के लिए आवश्यक समय की राशि कम कर देता है. हालांकि, एक गिलास पारा थर्मामीटर भी इस कार्य के लिए पर्याप्त होगा.
1.3. घड़ी
1.4. वीडियो रिकॉर्डिंग डिवाइस
हम एक वीडियो कैमरा एक तिपाई के द्वारा समर्थित का उपयोग करें. इस परीक्षण के बाद से आमतौर पर एकाधिक एक ही समय में परीक्षण किया जा रहा है जानवरों शामिल है, जीना स्कोरिंग बहुत मुश्किल हो सकता है और उचित नहीं है. पर्याप्त उच्च संकल्प में वीडियो कैमरा रिकॉर्ड करने के लिए है कि व्यवहार स्कोरिंग के लिए बाद में उपयोग किया जाएगा एक गुणवत्ता के चित्र प्रस्तुत करना चाहिए. हमेशा यकीन है कि वहाँ startin पहले कैमरे में पर्याप्त रिकॉर्डिंग स्मृति हैछ परीक्षण. हम एक वीडियो कैमरा है कि यांत्रिक मीडिया के उपयोग (यानी वीडियो कैसेट) के बिना डिजिटल रिकॉर्ड का उपयोग करें, डिजिटल वीडियो के हस्तांतरण के लिए अनुमति देता है. यदि वहाँ टैंक है, जो उपरि फ्लोरोसेंट रोशनी के साथ प्रयोगशाला वातावरण में हो सकता है पर अत्यधिक प्रतिबिंब हैं, आप अपने कैमरे के साथ एक polarizing लेंस फिल्टर का उपयोग करना चाहते हो सकता है.
1.5. परकार
हमारी प्रयोगशाला में हम डिवाइडर के दो सेट (35 सेमी ऊंचाई x 22 सेमी चौड़ाई x 22 सेमी गहराई) है. ये तीन दीवारों के साथ आयताकार हैं और दोनों पृष्ठभूमि के रूप में और टैंक के बीच डिवाइडर के लिए परीक्षण के दौरान एक दूसरे को देख और संभवतः उनके व्यवहार फेरबदल से चूहों को रोकने के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं. एक सेट सूरजमुखी मनुष्य और हल्के रंग जानवरों के लिए काला हो सकता है, दूसरे सेट काले रंग पशुओं के लिए रंग का प्रकाश हो क्रम में करने के लिए उच्च विपरीत प्रदान कर सकते हैं. experimenter यकीन है कि डिवाइडर की सतहों पीढ़ी चिंतनशील इतना है कि वे कैमरा छवियों को बदलने, या प्रमुख घ रेंडर नहीं कर रहे हैं बनाना चाहिएरोशनी के स्तर के बीच ifferences.
1.6. सफेद शोर जनरेटर
यह प्रयोगशाला वातावरण में जो अचानक जोर शोर सुना जा सकता है कि संभावित पशुओं को डराना चाहते हैं कर सकते हैं की जरूरत है. शोर जनरेटर जैसे आंतरायिक परेशान लगता है मुखौटा जाएगा. सफेद शोर जनरेटर की मात्रा का स्तर अन्य परिवेश और अप्रत्याशित शोर ऊपर होना करने के लिए चुना जाना चाहिए. हमारे प्रयोगात्मक कमरे में परिवेश शोर स्तर (सफेद शोर जनरेटर सक्रिय के बिना) 60 DB है. स्थान जहां टैंक में रखा जाता है पर सक्रिय सफेद शोर जनरेटर के साथ कुल शोर स्तर 70-72 DB है. हालांकि यह ध्यान दिया जाना चाहिए चाहिए कि ये आंकड़े केवल उदाहरण के रूप में प्रदान की जाती हैं, और प्रत्येक प्रयोगशाला सही शोर के स्तर उनके अद्वितीय पर्यावरण और परिस्थितियों के अनुसार चयन करना चाहिए.
1.7. कागज और गर्मी दीपक सुखाने
उनके घर पिंजरों में जानवरों लौटने से पहले, यह महत्वपूर्ण है के लिए सूखीउन्हें धीरे से कागज तौलिए का उपयोग और यह उपयोगी है एक गर्मी दीपक का उपयोग (कुछ जोखिम तापमान से अधिक नहीं करता है 32 डिग्री सेल्सियस) हाइपोथर्मिया को रोकने.
2. व्यवहार प्रक्रिया
- समग्र प्रयोगात्मक डिजाइन अपने प्रयोग के लिए विशिष्ट चर के बीच उचित counterbalancing प्रतिबिंबित करना चाहिए. उदाहरण के लिए, हमारे प्रयोगों में, हम हर FST सत्र (यानी, अगर वहाँ चार उपचार समूहों रहे हैं, प्रत्येक प्रत्येक सत्र में प्रतिनिधित्व किया जाएगा) में समान रूप से प्रत्येक समूह का प्रतिनिधित्व करने का प्रयास करें. इसके अलावा, चूहों घुमाया जाता है, प्रत्येक उपचार समूह से ऐसे कि चूहों प्रत्येक सत्र में एक अलग टैंक में रखा जाता है.
- कैमरा और स्थिति में डिवाइडर रखें. कैमरे के रूप में संभव के रूप में बंद के क्रम में चूहों के उच्चतम संभव संकल्प को प्राप्त करना चाहिए.
- टैंक नल कमरे के तापमान (23-25 डिग्री सेल्सियस) में निर्धारित स्तर, जो टैंक की दीवारों पर चिह्नित करने के लिए सेट पानी से भरा जाना चाहिए. यदि अपनी सुविधा के लगातार गर्म / ठंडा वा नहीं हैआतंकवाद, तुम गर्म पानी और / या बर्फ तैयार करने के लिए जल्दी से सही तापमान के लिए पानी लाने के लिए चाहते हो सकता है. अवरक्त थर्मामीटर के साथ पानी के तापमान की जाँच करें. एक गर्म पानी के स्तर के लिए और ठंडे पानी के अलावा के लिए एक दूसरे निशान - वैकल्पिक रूप से, अगर गर्म और ठंडे पानी के तापमान को अपनी सुविधा पर लगातार कर रहे हैं, आप टैंक दो अंक पर आकर्षित कर सकते हैं करने के लिए सही अंतिम करीब पानी तेजी से तापमान.
- सफेद शोर जनरेटर प्रारंभ, अगर इस्तेमाल किया जा रहा है, पहले चूहों कमरा परीक्षण करने के लिए शुरू कर रहे हैं. सफेद शोर के स्तर केवल बाहरी शोर मुखौटा करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए. एक उच्च मात्रा से बचें और सुनिश्चित करें कि सफेद शोर का एक ही स्तर के सभी जानवरों के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है.
- परीक्षण के कमरे में पशुओं को ले आओ. यदि कॉलोनी कमरा जहां जानवरों रहते हैं और परीक्षण के कमरे में आसन्न हैं या एक दूसरे के बहुत करीब है, परिवेश की स्थिति के समान हैं और चलती अशांति के पिंजरे के दौरान कम से कम है, तो कोई दशानुकूलन पेरीआयुध डिपो आवश्यक हो जाएगा. अन्यथा, परीक्षण के कमरे में दशानुकूलन (आम तौर पर एक कम से कम घंटे) की अवधि के लिए पशुओं जगह. यदि एक दशानुकूलन अवधि आवश्यक है, तो सुनिश्चित करें कि आदत जानवरों किया जा रहा है एक ही कमरे में एक ही समय में परीक्षण चूहों द्वारा प्रभावित नहीं होगा. कृपया पता है कि घ्राण और अल्ट्रासोनिक cues एक ही कमरे में रखा अन्य जानवरों द्वारा महसूस किया जा सकता है है.
- पानी के टैंक में पशुओं को रखने से पहले वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करो .
- इसकी पूंछ द्वारा पशु पकड़ो, और धीरे और धीरे धीरे पानी में जगह है. एक बार चूहों के पानी में है, धीरे धीरे पूंछ जारी. आमतौर पर, इस प्रक्रिया का उपयोग किया जा रहा है पानी के नीचे डूब से जानवर के सिर को रोकने जाएगा.
- टैंक में चूहों को एक क्रम में रिकॉर्डिंग की बाधा कम से कम हो जाएगा में रखें. यह आदेश, जाहिर है, समूहों और अन्य अपने प्रयोगात्मक डिजाइन करने के लिए विशिष्ट आवश्यकताओं के counterbalancing के साथ संयोजन के रूप में फैसला किया जाना चाहिए.
- एक बार सभी चूहों स्टॉपवॉच पर उलटी गिनती टैंक, शुरू में कर रहे हैं. चूहों के लिए सामान्य परीक्षण लंबाई FST में छह मिनट है.
- परीक्षण के दौरान कुछ आप जानवरों से एक उचित दूरी पर हैं और किसी भी आंदोलनों या शोर है कि जानवरों के द्वारा देखा जा सकता है है बनाने के लिए नहीं हो. चूहे पानी में आसानी से नाव कर सकते हैं, तथापि, यदि या तो चूहों की एक नई नस्ल या स्विमिंग व्यवहार पर उनके प्रभाव के पिछले ज्ञान के बिना परीक्षण किया जा रहा है एक नया परिसर, experimenter जानवरों और अधिक बारीकी से निगरानी करनी चाहिए. चूहों के लिए इसके विपरीत में, चूहों आमतौर पर FST दौरान नहीं गोता करते हैं, लेकिन डाइविंग की घटना में माउस टैंक से हटाया जाना चाहिए. यदि experimenter के कमरे में चूहों कि एक माउस तैराकी और तैरते व्यवहार बनाए रखने के लिए और यदि आवश्यक परीक्षण को रोकने के कर सकते हैं घटना में वीडियो द्वारा निगरानी की जानी चाहिए छोड़ देता है.
- छह मिनट के परीक्षण अवधि के अंत में रिकॉर्डिंग बंद करो. हमारी प्रयोगशाला में, हम है कि बहुत अंत में पशुओं को पहचानती है कैमरा के सामने में एक नोट दिखाप्रत्येक रिकॉर्डिंग की. जब इस दृष्टिकोण का उपयोग कर बाद में रिकॉर्डिंग स्कोरिंग व्यक्ति पशुओं की पहचान नहीं जानते के बाद से पहचान केवल रिकॉर्डिंग के बहुत अंत में दिखाया गया है. यह किसी की पहचान और समस्याओं है कि बाद में पाए जाते हैं रिकॉर्डिंग करने के लिए संबंधित हो सकता है रखने के रिकॉर्ड को रोकता है. रिकॉर्ड रखने की रणनीति है कि इस्तेमाल किया जा रहा है के बावजूद, यह स्पष्ट रूप से पशुओं की पहचान और भी व्यक्ति बाद में समूह कार्य के ज्ञान होने से परीक्षण स्कोरिंग को रोकने चाहिए.
- उसी क्रम में उनके पूंछ से पानी से पशुओं निकालें कि आप उन्हें में डाल दिया और धीरे से उन्हें एक सुखाने कागज और जगह के साथ अपने homecage में वापस सूख.
3. व्यवहार विश्लेषण
- माउस FST के संस्करण आम तौर पर, शुरू से ही खत्म, छह मिनट देर है. हालांकि, आम तौर पर परीक्षण के केवल अंतिम चार मिनट का विश्लेषण कर रहे हैं. यह तथ्य यह है कि ज्यादातर चूहों FST की शुरुआत में बहुत सक्रिय रहे हैं की वजह से है, और पीपहले दो मिनट के दौरान इलाज के otential प्रभाव छिप जा सकता है.
- हमारी प्रयोगशाला में हम वीडियो फ़ाइलों को सीधे एक पीसी के लिए कैमरे से अपलोड पीसी पर विश्लेषण करते हैं.
- व्यवहार विश्लेषण के दौरान समय है कि प्रत्येक चूहों मोबाइल खर्च करता है मापा जाता है. गतिशीलता समय की कुल राशि तो परीक्षण के समय के 240 सेकंड से subtracted है और तब गतिहीनता समय के रूप में कहा है. हालांकि यह संभव है सीधे गतिहीनता समय को मापने, हमारी प्रयोगशाला में हम यह आसान का पता लगाने और ऐसे आंदोलनों की कमी के बजाय सक्रिय आंदोलनों उपाय पाया है.
- व्यवहार आमतौर पर विश्लेषण और FST में पर्यवेक्षकों के बीच परिवर्तनशीलता का सबसे बड़ा स्रोत का सबसे महत्वपूर्ण पहलू आंदोलनों कि सदाशयी गतिशीलता के रूप में गिना जाता है की सही पहचान है. हमारे FST में गतिशीलता के लिए परिचालन परिभाषा उन लोगों की तुलना किसी भी अन्य आंदोलनों शरीर के संतुलन और 4 पानी के ऊपर सिर रखने के लिए आवश्यक है. चूहे आम तौर पर पानी में तैरने लगते हैं आसानी से, लेकिन वे अभी भी छोटे आंदोलनों प्रकट करने के लिए अपने शरीर संतुलन और पानी के ऊपर अपने सिर रखो. इन कार्यों बचने के लिए और गतिशीलता के रूप में रन नहीं चाहिए करने की कोशिश नहीं कर रहे हैं. इसके अलावा गतिशीलता के एक एकल मुक्केबाज़ी के बाद, भी अनिवार्य रूप से स्थिर हालांकि, चूहों अभी भी गति का एक परिणाम के रूप में पानी में बहाव कर सकते हैं. इन आंदोलनों को भी गतिशीलता के रूप में नहीं बने चाहिए.
- हमारी प्रयोगशाला में, हम समय मापन के लिए एक स्क्रीन पर स्टॉपवॉच सॉफ्टवेयर (Xnote स्टॉपवॉच, dnSoft अनुसंधान समूह) का उपयोग करें. दो अलग - अलग stopwatches स्क्रीन पर इस्तेमाल किया जाता है. पहली स्टॉपवॉच 240 सेकंड और चेतावनियों से नीचे पर्यवेक्षक मायने रखता है जब व्यवहार विश्लेषण अवधि समाप्त होता है. दूसरा स्टॉपवॉच उपाय समय मोबाइल बिताया. कुछ स्टॉपवॉच सॉफ्टवेयर कुंजी असाइन करने के लिए शुरू और कार्यों को बंद करो, ताकि स्क्रीन पर stopwatches कुंजीपटल से नियंत्रित किया जा सकता करने की क्षमता है. हमारी प्रयोगशाला में, एक नियमित कुंजीपटल के बजाय, हम सामान्यतः के रूप में जाना एक इनपुट डिवाइस का उपयोग करें'एक gamepad stopwatches नियंत्रण.
- जब एक पीसी का उपयोग करने के लिए यों गतिहीनता, अगर वहाँ एक से अधिक परीक्षण और स्क्रीन पर मौजूद माउस अन्य जानवरों को कवर (आप अन्य प्रोग्राम विंडो का उपयोग करें या शारीरिक रूप से कागज के साथ स्क्रीन को कवर कर सकते हैं), यह एक अच्छा विचार है, ताकि उनके आंदोलनों पर्यवेक्षक विचलित नहीं होगा.
- यदि एक स्टॉपवॉच पर स्क्रीन प्रयोग किया जाता है, लेकिन सभी स्टॉपवॉच के millisecond दशमलव को कवर करने के लिए कुछ किया जाना है. इस के लिए कारण के पर्यवेक्षक में पूर्वाग्रह को रोकने के लिए, जबकि अभी भी अगर घड़ी चल रहा है या नहीं चल रहा है निर्धारित करने के लिए करने की क्षमता की अनुमति है. चूंकि पर्यवेक्षक, जबकि पशुओं के समूह कार्य को अंधा, चूहों में गतिशीलता के स्तर की एक सामान्य विचार होगा, वहाँ कुछ घटनेवाला पूर्वाग्रह अगर वह गतिशीलता समय की कुल राशि है कि विशेष रूप से माउस के लिए बीता देखने की अनुमति दी है हो सकता है विश्लेषण सत्र के पूरा होने से पहले. स्टॉपवॉच को कवर करके, वह सिर्फ इतना पता है कि स्टॉपवॉच किसी भी बिंदु पर या बंद है, लेकिन wil जाएगाकुल समय बीता और इसलिए किसी भी पूर्वाग्रह से प्रभावित नहीं कर सकते हैं नहीं जानते.
- कोई भी पर्यवेक्षक अंतर विश्वसनीयता का परीक्षण हर नए पर्यवेक्षक के लिए आयोजित किया जाना चाहिए परीक्षण पशुओं से डेटा एकत्रित करने की शुरुआत से पहले. हमारी प्रयोगशाला में, प्रत्येक नए पर्यवेक्षक पहली बार एक अनुभवी पर्यवेक्षक स्कोरिंग देखता है. नई पर्यवेक्षक लाभ गतिहीनता से गतिशीलता अंतर विश्वास के बाद, वे तो अनुभवी पर्यवेक्षक देख रहा है और किसी भी गलतियों की ओर इशारा करते के साथ स्कोर. एक बार इस चरण को सफलतापूर्वक पूरा हो गया है, नई पर्यवेक्षक FST वीडियो है कि हम प्रशिक्षण प्रयोजनों के लिए हमारी प्रयोगशाला में रखने का एक विशिष्ट सेट का विश्लेषण करेगा. अंतर पर्यवेक्षक सहसंबंध के बाद ही एक उच्च स्तरीय अनुभवी पर्यवेक्षक के साथ प्राप्त की है एक अन्वेषक वास्तविक प्रयोगों में FST वीडियो का विश्लेषण शुरू नहीं करता है. हम इन प्रशिक्षण विश्लेषण से डाटा भविष्य में उपयोग के लिए प्रयोगशाला के लिए एक आंतरिक मानक का गठन करने के लिए संग्रह. हम उपभेदों के बीच तरीके में मतभेद है जिसमें वे mobi व्यक्त मनायामें lity (और गतिहीनता), व्यवहार, और लिंगों के बीच मतलब गतिहीनता समय. जब एक नया तनाव, लिंग, या आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस मॉडल प्रयोगशाला में परीक्षण किया है यह फिर से विश्वसनीयता विश्लेषण के इस प्रकार का कार्य करने के लिए आवश्यक है.
4. प्रतिनिधि परिणाम
अपने आधारभूत गतिहीनता और एक विशिष्ट 5-11 दवा जवाब के संदर्भ में आनुवंशिक अलग जन्मजात और outbred माउस उपभेदों के बीच चिह्नित मतभेद हैं . उदाहरण के लिए, हम माउस उपभेदों के एक पैनल (चित्रा 1) 5 में लिथियम अंतर एंटी - तरह प्रतिक्रियाओं की पहचान की. इस प्रयोग के प्रायोगिक जानकारी कर सकते हैं अल. एट, 5 २०११ में प्रकाशित कर रहे हैं.
चित्रा 1 मजबूर तैरना परीक्षण में गतिहीनता समय (सेकंड में), खारा, 200, 300, या 400 मिलीग्राम / किग्रा के विभिन्न सहज और कहां में एक एकल आईपी इंजेक्शन के बाद पांच घंटेमाउस उपभेदों tbred. *: पी <0.05, **: पी <0.01, ***: पी <.001 खारा समूह, Dunnett अस्थायी पद परीक्षण की तुलना में एक महत्वपूर्ण अंतर को निरूपित. डेटा मतलब ± SEM के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. समूह के प्रति प्रत्येक तनाव के लिए पशुओं की संख्या 6-8 (चित्रा 5 से reproduced) है .
नहीं सभी माउस उपभेदों FST के लिए उपयुक्त हैं. ब्लैक स्विस, एनआईएच, स्विस, और / FVB न्यू जर्सी जैसे कुछ उपभेदों, नियंत्रण की शर्तों के तहत कम या लगभग कोई गतिहीनता दिखाने के लिए, इसलिए एक मंजिल प्रभाव (चित्रा 1) 5 का प्रतिनिधित्व. आधारभूत गतिहीनता की कमी को प्रभावी ढंग से प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती की एक विरोधी अवसाद प्रभाव का पता लगाने को रोकता है. यह भी संभव है, जबकि बहुत दुर्लभ, कि कुछ माउस उपभेदों aberrantly व्यवहार और परीक्षण के दौरान टैंक में डुबकी कर सकते हैं भले ही वे फ्लोट कर सकते हैं. ऐसा ही एक तनाव DBA/1OlaHsd है (हमारी प्रयोगशाला में अप्रकाशित अवलोकन). इस तरह उपभेदों FST के लिए उपयुक्त नहीं हैं. क्योंकि यह डाइविंग जोखिम की, लेकिन smalएल, जब एक नई नस्ल है कि पहले नहीं किया गया है FST या एक माउस एक उपन्यास आनुवंशिक हेरफेर शरण में परीक्षण परीक्षण, यह जरूरी है ध्यान प्रारंभिक परीक्षणों का पालन करने के लिए चूहों बचाव अगर वे हानिकारक व्यवहार में संलग्न है.
प्रयोगात्मक डिजाइन में यहाँ वर्णित है, कई जानवरों (पाँच) एक ही समय में परीक्षण कर रहे हैं. जबकि डिवाइडर का उपयोग हम परीक्षण के दौरान एक दूसरे को देखने से चूहों को रोकने, और सफेद शोर जनरेटर श्रव्य vocalizations दबा, हमारे सेट अप सभी अल्ट्रासोनिक या घ्राण cues प्रेषित किया जा रहा से नहीं रोकता है. हालांकि संभावना नहीं है परीक्षण की प्रकृति दिया है, इन चूहों के व्यवहार को प्रभावित कर सकता है. एक इस समस्या के समाधान के लिए पशुओं को व्यक्तिगत परीक्षा होगी. हालांकि, इस दृष्टिकोण की अपनी समस्याएं हैं. उदाहरण के लिए, आमतौर पर, प्रत्येक सत्र में परीक्षण पशुओं वही homecage से आते हैं. यह randomization और प्रयोगात्मक चर के counterbalancing अनुमति देता है. परीक्षण चूहों व्यक्तिly homecage से एक समय में एक माउस को हटाने का मतलब होगा. यह दोहराया और सामाजिक पदानुक्रम के पीछे छोड़ दिया है दूसरों के बीच में पिंजरे में अशांति तनाव का कारण होगा. परीक्षण के साथ एक और मुद्दा अकेले समय की कमी हैं. एक समय में एक माउस परीक्षण कई घंटे एक स्थिति में चूहों circadian चक्र के अलग अलग समय पर परीक्षण कर रहे हैं में जिसके परिणामस्वरूप में प्रयोग का विस्तार होगा. इस दिन के प्रभाव के confounding समय बना सकते हैं. शोधकर्ताओं ने मन में इन मुद्दों को रखने, जबकि उनके प्रयोगों के डिजाइन चाहिए.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
FST (कभी कभी कहा जाता Porsolt तैरना परीक्षण) पहले चूहों के लिए विकसित किया गया था और फिर Porsolt और 12,13 सहयोगियों द्वारा चूहों के लिए संशोधित है. ऊपर वर्णित हमारी प्रयोगशाला में सफल प्रोटोकॉल के अलावा, मोटे तौर पर सूक्ष्म परीक्षण संशोधनों के एक नंबर प्रकाशित किया गया है (Hascoët और Bourin देख एक पूरा समीक्षा के लिए 1). यह एक आम विरोधी अवसाद दवाओं और मूल और preclinical अनुसंधान 3,14-16 में विभिन्न व्यवहार और neurobiological जोड़तोड़ के प्रभाव की प्रभावकारिता के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया परीक्षण है. यह एक स्थिति में "व्यवहार निराशा" प्रेरित है प्रतिपादन के रूप में वर्णित किया गया है, वह है, जानवर आशा खो देता है 13 तनावपूर्ण वातावरण बच. मजबूर तैरना परीक्षण के माउस संस्करण एक अपेक्षाकृत छोटे और कम लागत व्यवहार परीक्षण है कि चूहों का कोई प्रशिक्षण की आवश्यकता है और न्यूनतम उपकरणों के साथ आयोजित किया जा सकता है. यह परीक्षण, जो आम तौर पर शामिल चूहे संस्करण करने के लिए इसके विपरीत में हैपानी की टंकी के लिए जोखिम एक पूर्व परीक्षण 17 दिन के लिए दिन .
इसकी लोकप्रियता की वजह से वहाँ FST में विभिन्न antidepressants के प्रभाव के बारे में डेटा का एक खजाना है. यह शोधकर्ताओं की तुलना करने के लिए और दूसरों के साथ अपने स्वयं के परिणाम इसके विपरीत (2009 1 समीक्षा के लिए Hascoët और Bourin देख) की अनुमति देता है. FST के इन विशेषताओं शैक्षणिक और औद्योगिक सेटिंग्स जहां विश्वसनीयता और उपन्यास यौगिकों के उच्च throughput प्रदर्शन के लिए आवश्यक हैं में दवाओं की खोज अनुसंधान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण उपकरण बनाते हैं. FST की एक अतिरिक्त सुविधा वाणिज्यिक स्वचालित व्यवहार विश्लेषण प्रणाली है कि डेटा संग्रह प्रक्रिया 18-20 तेज कर सकते हैं की उपलब्धता है . हालांकि, हमारे अनुभव में, इन स्वचालित प्रणाली मानव स्कोरिंग द्वारा व्यापक सत्यापन की आवश्यकता होती है. इसके अतिरिक्त, स्वचालित मानकों को पुनः समायोजन जब अलग अलग उपभेदों का उपयोग हो सकता है, खासकर पृष्ठभूमि विपरीत परिवर्तन के स्तर पर, या अलग एस के चूहों के साथ जबizes या व्यवहार प्रतिक्रियाओं.
एक अन्य क्षेत्र है जिसमें FST प्रयोग किया जाता है neurogenetic अनुसंधान में जो अवसाद से संबंधित व्यवहार के आनुवंशिक आधार की जांच है. अध्ययन के इन प्रकार के के साथ या विरोधी अवसाद दवाओं और आनुवंशिक रूप से संशोधित या चुनिंदा नस्ल चूहों और उनके जंगली प्रकार 6,21-23 समकक्षों की तुलना का उपयोग के बिना विभिन्न माउस उपभेदों की तुलना शामिल है. इस संबंध में, FST बुनियादी मूड विकारों के तंत्रिका जीव विज्ञान और आनुवंशिकी के लिए संबंधित अनुसंधान के क्षेत्र में उपयोगी साबित हो गया है. हालांकि, FST मानव अवसाद के एक पूर्ण स्पेक्ट्रम के अनुरूप नहीं है. हालांकि वहाँ अपवाद हैं, FST भविष्य कहनेवाला वैधता की एक काफी स्तर है, क्योंकि यह उचित यौगिकों कि विरोधी depressants और असंवेदनशील के रूप में उन है कि 24,25 प्रभावी नहीं हैं मनुष्यों में प्रभावी रहे हैं के प्रति संवेदनशील है. चूंकि FST के व्यवहार परिणाम एक आयामी है यह केवल परिसर या पूर्व के एंटी प्रभावकारिता का संकेत कर सकते हैंperimental जोड़तोड़, लेकिन यह उन दोनों के बीच यंत्रवत मतभेद नहीं अंतर कर सकते हैं. यह FST, जहां चूहों दोनों तैराकी और व्यवहार है कि serotonin और 26 यौगिकों अभिनय norepinephrine के बीच अंतर कर सकते हैं चढ़ाई प्रकट चूहे संस्करण के साथ विपरीत में है. इसके अलावा किसी भी जोड़तोड़ कि समग्र गतिविधि के स्तर को प्रभावित कर सकते हैं संभवतः नकली निष्कर्ष करने के लिए अग्रणी FST में गतिहीनता बदल सकता है. इसलिए यह महत्वपूर्ण है अलग व्यवहार परीक्षण है कि खुले मैदान परीक्षण 1,27 के रूप में ऐसे समग्र गतिविधि को मापने के साथ FST के परिणामों को सत्यापित. यह फायदेमंद है को ध्यान में रखना है कि FST मानव हालत का प्रतिनिधित्व नहीं करता है, और किस हद तक FST और मानव अवसाद ओवरलैप में मॉडल जानवरों द्वारा प्रकट व्यवहार के अंतर्निहित neurobiological तंत्र पूरी तरह से स्पष्ट नहीं है 28. हालांकि, सीमाओं के इन प्रकार के लिए दवाओं की खोज और सत्यापन उपकरण के रूप में FST की उपयोगिता नहीं अवमूल्यन करना चाहिए.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखक ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा.
Acknowledgments
इस अध्ययन को अनुदान NIHM MH091816 R01 और R21 TDG MH084043 द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Water tanks | |||
| Thermometer | |||
| Timer | |||
| Video Camera | |||
| White Noise Generator (optional) | |||
| Drying Paper |
References
- Hascoét, M., Bourin, M. In Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. 42, 85-118 (2009).
- Sunal, R., Gümüçel, aB., Kayaalp, S. O. Effect of changes in swimming area on results of "behavioral despair test". Pharmacology Biochemistry and Behavior. 49, 891-896 (1994).
- Petit-Demouliere, B., Chenu, F., Bourin, M. Forced swimming test in mice: a review of antidepressant activity. Psychopharmacology. (Berl). 177, 245-255 (2005).
- Cryan, J. F., Markou, A., Lucki, I. Assessing antidepressant activity in rodents: recent developments and future needs. Trends in Pharmacological Sciences. 23, 238-245 (2002).
- Can, A. Antidepressant-like responses to lithium in genetically diverse mouse strains. Genes, Brain and Behavior. 10, 434-443 (2011).
- Lucki, I., Dalvi, A., Mayorga, A. J. Sensitivity to the effects of pharmacologically selective antidepressants in different strains of mice. Psychopharmacology. (Berl). 155, 315-322 (2001).
- David, D. J., Renard, C. E., Jolliet, P., Hascoet, M., Bourin, M. Antidepressant-like effects in various mice strains in the forced swimming test. Psychopharmacology (Berl). 166, 373-382 (2003).
- Bai, F., Li, X., Clay, M., Lindstrom, T., Skolnick, P. Intra- and interstrain differences in models of "behavioral despair". Pharmacol. Biochem. Behav. 70, 187-192 (2001).
- Guzzetti, S. Strain differences in paroxetine-induced reduction of immobility time in the forced swimming test in mice: Role of serotonin. European Journal of Pharmacology. 594, 117-124 (2008).
- Cervo, L. Genotype-dependent activity of tryptophan hydroxylase-2 determines the response to citalopram in a mouse model of depression. J. Neurosci. 25, 8165-8172 (2005).
- Jiao, J., Nitzke, A., Doukas, D., Seiglie, M., Dulawa, S. Antidepressant response to chronic citalopram treatment in eight inbred mouse strains. Psychopharmacology. 213, 509-520 (2011).
- Porsolt, R. D., Pichon, M. L. e, Jalfre, M. Depression: a new animal model sensitive to antidepressant treatments. Nature. 266, 730-732 (1977).
- Porsolt, R. D., Bertin, A., Jalfre, M. Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants. Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 229, 327-336 (1977).
- Porsolt, R. D., Bertin, A., Jalfre, M. "Behavioural despair" in rats and mice: strain differences and the effects of imipramine. Eur. J. Pharmacol. 51, 291-294 (1978).
- Mineur, Y. S., Belzung, C., Crusio, W. E. Effects of unpredictable chronic mild stress on anxiety and depression-like behavior in mice. Behav. Brain. Res. 175, 43-50 (2006).
- Millstein, R. A., Holmes, A. Effects of repeated maternal separation on anxiety- and depression-related phenotypes in different mouse strains. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 31, 3-17 (2007).
- Cryan, J. F., Valentino, R. J., Lucki, I. Assessing substrates underlying the behavioral effects of antidepressants using the modified rat forced swimming test. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 29, 547-569 (2005).
- Crowley, J. J., Jones, O. 'L. eary, F, O., Lucki, I. Automated tests for measuring the effects of antidepressants in mice. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 78, 269-274 (2004).
- Kurtuncu, M., Luka, L. J., Dimitrijevic, N., Uz, T., Manev, H. Reliability assessment of an automated forced swim test device using two mouse strains. Journal of Neuroscience Methods. 149, 26-30 (2005).
- Hayashi, E., Shimamura, M., Kuratani, K., Kinoshita, M., Hara, H. Automated experimental system capturing three behavioral components during murine forced swim test. Life Sciences. 88, 411-417 (2011).
- Cryan, J., Page, M., Lucki, I. Differential behavioral effects of the antidepressants reboxetine, fluoxetine, and moclobemide in a modified forced swim test following chronic treatment. Psychopharmacology. 182, 335-344 (2005).
- Gould, T. D. Beta-catenin overexpression in the mouse brain phenocopies lithium-sensitive behaviors. Neuropsychopharmacology. 32, 2173-2183 (2007).
- Can, A., Grahame, N. J., Gould, T. D. Affect-related related behaviors in mice selectively bred for high and low voluntary alcohol consumption. Behav. Genet. , (2011).
- McKinney, W. T., Bunney, W. E. Animal Model of Depression: I Review of Evidence: Implications for Research. Arch. Gen. Psychiatry. 21, 240-248 (1969).
- Willner, P. The validity of animal models of depression. Psychopharmacology.(Berl). 83, 1-16 (1984).
- Detke, M. J., Lucki, I. Detection of serotonergic and noradrenergic antidepressants in the rat forced swimming test: the effects of water depth. Behav. Brain Res. 73, 43-46 (1995).
- Gould, T. D., Dao, D. T., Kovacsics, C. E. In Mood and Anxiety Related Phenotypes in mice: characterization using behavioral tests. Gould, T. D. 42, Humana Press. (2009).
- Bourin, M., Fiocco, A. J., Clenet, F. How valuable are animal models in defining antidepressant activity. Human Psychopharmacology: Clinical and Experimental. 16, 9-21 (2001).
