Summary
यहाँ, हम एक तेजी से विश्वसनीय और सरल करने के लिए सबसे कम तापमान है, जिस पर चूहों या चूहों nocifensive व्यवहार दिखाने का निर्धारण प्रक्रिया का वर्णन,
Abstract
दर्दनाक मधुमेह न्युरोपटी (पी डी एन) hyperalgesia यानी, हानिकारक प्रोत्साहन के प्रति संवेदनशीलता में वृद्धि हुई, और परपीड़ा अर्थात, सामान्य रूप से अहानिकर एक उत्तेजनाओं के लिए hypersensitivity द्वारा विशेषता है. Hyperalgesia और परपीड़ा 2 मधुमेह हो सकता है के कई अलग कृंतक मॉडल में अध्ययन किया गया है. हालांकि, के रूप में Bölcskei एट अल, पशु मॉडल में "दर्द" के संकल्प ने कहा इसके व्यक्तिपरक प्रकृति के 3 वजह से चुनौती दे रहा है. इसके अलावा, थर्मल उत्तेजनाओं के लिए हानिकारक व्यवहार प्रतिक्रियाओं का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया पारंपरिक तरीकों आमतौर पर reproducibility और औषधीय संवेदनशीलता 3 की कमी है. उदाहरण के लिए, गर्म थाली 4 Ankier की विधि का उपयोग करके बच निकलना, और वापसी या / या तो हिंद और / या पहले से पंजे चाट लगातार उच्च थर्मल उत्तेजनाओं (52-55 डिग्री सेल्सियस) पर पलटा सुप्तावस्था के रूप में मात्रा निर्धारित है. हालांकि, जानवरों है कि थर्मल उत्तेजना के लिए hyperalgesic reproducibly पुनः में मतभेद नहीं दिखा हैफ्लेक्स उन पूर्व दहलीज 3,5 तापमान का उपयोग सुप्तावस्था. Bölcskei एट अल. 6 की हाल ही में वर्णित विधि के रूप में यहाँ वर्णित प्रक्रियाओं के थर्मल nociceptive थ्रेसहोल्ड की तेजी से, संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य (TNTs) चूहों और चूहों में दृढ़ संकल्प के लिए अनुमति देता है. विधि धीरे धीरे बढ़ती थर्मल ज्यादातर माउस / चूहा तल सतह की त्वचा के लिए लागू उत्तेजना का उपयोग करता है. विधि विशेष रूप से पी डी एन के रूप में hyperalgesic राज्यों दौरान विरोधी nociception के अध्ययन के लिए संवेदनशील है. bellow वर्णित प्रक्रियाओं के विस्तार से Almási एट 5 अल और Bölcskei एट अल 3 में प्रकाशित लोगों पर आधारित हैं. प्रक्रियाओं यहाँ वर्णित प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग समिति (LACUC), राइट राज्य विश्वविद्यालय अनुमोदित किया गया है.
Protocol
चूहों और चूहों के TNTs का उपयोग करके निर्धारित कर रहे हैं वृद्धिशील गर्म थाली पीड़ाशून्यता मीटर [iHPAM, आई आई टी सी इंक जीवन विज्ञान (वुडलैंड हिल्स, सीए)]. डाटा अधिग्रहण के लिए एक गर्मी को नियंत्रित इकाई, सॉफ्टवेयर (आई आई टी सी पार्ट # शीतल श्रृंखला 8) एक पीसी (पर्सनल हीटिंग नीचे प्रणाली और एक Plexiglas अवलोकन ऊपर कक्ष के साथ एक एल्यूमीनियम थाली (10 x 20 सेमी): उपकरण घटकों कई होते हैं दूरदराज के शुरू करने के लिए) कंप्यूटर और एक footswitch को रोकने के लिए, या इकाई का नियंत्रण रीसेट. हीटिंग सिस्टम भी शुरू / रोक / हीटिंग की प्रक्रिया के उपकरण के सामने में एक कीपैड के माध्यम से मैन्युअल रूप से रीसेट करने की अनुमति देता है. iHPAM विभिन्न हीटिंग दर, / standby के cutoff के तापमान के लिए सेट किया जा सकता है.
1. उपकरण सेट अप
- परीक्षण पशुओं से पहले, नेत्रहीन इकाई का निरीक्षण करने के लिए चुना हीटिंग दर (जैसे, 6 डिग्री सेल्सियस / मिनट), अतिरिक्त और कटौती बंद अंतिम प्रारंभिक तापमान (उदाहरण के लिए, 28 डिग्री सेल्सियस और 55 डिग्री सेल्सियस, क्रमशः) की पुष्टि.
- सभी कनेक्शन सत्यापित करें. परिणामों की इलेक्ट्रॉनिक प्रतिलिपि रखने के लिए, एक कंप्यूटर सॉफ्टवेयर श्रृंखला 8 चल इकाई से जुड़ा होना चाहिए. वैकल्पिक रूप से, यूनिट के सीरियल पोर्ट के माध्यम से परिणामों की मुश्किल प्रतियां बाहर मुद्रित कर सकते हैं.
- उपकरण टेस्ट. Footswitch एक बार प्रेस सॉफ्टवेयर सीरीज 8 डेटा अभिलेख सुनिश्चित करें: प्रारंभिक आपातोपयोगी, अंतिम cutoff के तापमान और काट तापमान तक पहुँचने के लिए आवश्यक सेकंड में समय के.
- आगे नियंत्रण परीक्षण के रूप में, जांचकर्ताओं प्रयोगों में शामिल स्वयं डिवाइस पर अनुभव की आवश्यकता हो सकती है. दर्द धारणा के पल (46-48 डिग्री सेल्सियस) पर धातु की थाली से हाथ वापस लेना न तो त्वचा को नुकसान नहीं पहुँचा चाहिए और न ही किसी भी बाद में असुविधा का उत्पादन.
- एक बार इकाई निर्धारित किया गया है और 1.3 और 1.4 कदम से परिणाम के रिकार्ड वे तुलना में किया जा सकता है. यह संभावित समस्याओं है कि इकाई के उपयोग अमान्य कर सकता का पता लगाने में उपयोगी है. उदाहरण के लिए, प्रारंभिक / आपातोपयोगी अंतिम कट ऑफ टेम्पे के बीच फ़र्कratures और इकाई की वास्तविक पढ़ने, और / या इकाई और वास्तविक तापमान प्लेट हाथ वापसी के लिए आवश्यक द्वारा प्रदर्शित तापमान के बीच मतभेद.
2. परीक्षण सामान्य पशु
या तो युवा या वयस्क Wistar चूहों [प्रसवोत्तर उम्र (पी) 21-25 दिन], या किसी भी आनुवंशिक पृष्ठभूमि या लिंग के चूहों (p21-25) का इस्तेमाल किया जा सकता है. हमारे प्रयोगों में इस्तेमाल किया चूहों तनाव C57BL/6J के हैं.
- रात से पहले के प्रयोगों का प्रदर्शन किया जा करने के लिए बेंच जहां iHPAM रखा है पर अपने पिंजरों रखकर पशुओं जलवायु के अनुकूल बनाना. परीक्षण के प्रदर्शन से पहले दो घंटे, iHPAM पर बारी करने के लिए इकाई की पृष्ठभूमि शोर के साथ पशुओं को परिचित. इस बिंदु पर, iHPAM स्थापित किया जा सकता है और परीक्षण सत्यापित करने के लिए उचित समारोह में (चरण 1 देखें). खाद्य और पानी का परीक्षण भर में यथेच्छ प्रदान की जाती है, जब जानवर अवलोकन कक्ष में है (2.1 चरण देखें) को छोड़कर.
नोट: यह छोटा सा भूत हैortant के लिए नहीं लगता है कि व्यवहार प्रयोगों प्रयोगशाला परिस्थितियों में डिफ़ॉल्ट रूप से नियंत्रित कर रहे हैं. आनुवांशिक और पर्यावरणीय कारकों है कि व्यवहार के अध्ययन (7 समीक्षा) के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं के लिए विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए. - धीरे एक सामान्य / माउस चूहा इकाई की हीटिंग थाली के शीर्ष पर Plexiglass अवलोकन कक्ष में जगह है. पशु गर्म सतह (28 डिग्री सेल्सियस पर सेट) के जलवायु के अनुकूल बनाना करने के लिए जब तक पशु एक सहज व्यवहार से पता चलता है की अनुमति दें.
नोट: यह परिस्थितियों के अंतर्गत सामान्य वयस्क चूहों एक प्रारंभिक खोजपूर्ण व्यवहार दिखाने के लिए, कभी कभी अवलोकन चैम्बर के ढक्कन की ओर खड़े जबकि सूँघने. कुछ ही मिनटों के बाद, चूहों सौंदर्य की आकस्मिक bouts और एक आराम से व्यवहार दिखा सकते हैं. कभी कभी, चूहों एक आराम से शरीर मुद्रा (प्रवण विस्तार) के साथ करना है, जबकि लापरवाही आसपास सूँघने. सामान्य चूहों आमतौर पर चूहों की तुलना में अधिक सक्रिय हैं. हालांकि, चूहों कुछ मिनट के बाद एक सुकून की खोजपूर्ण व्यवहार मैं दिखाने केअवलोकन कक्ष एन. यह असाधारण या तो बचने के व्यवहार (जैसे, कूद, अवलोकन कक्ष से भागने की कोशिश कर) या रक्षात्मक व्यवहार (जैसे, चिल्ला) का पालन करने के लिए दुर्लभ है. यह भी ध्यान दें महत्वपूर्ण है कि चूहों दर्द एक माउस से 8 दूसरे से संवाद कर सकते हैं. इसलिए, यह परीक्षण चूहों अलग पिंजरों में रखा करने के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है. - जगह अवलोकन कक्ष के पीछे में दर्पण है, सभी कोणों पर टिप्पणियों की अनुमति. एक तिपाई जोत एक डिजिटल वीडियो कैमरा की मदद से हो सकता है सही समय पर जो nocifensive व्यवहार दर्द से बचने हुआ था निर्धारित कर सकते हैं.
- एक बार जानवर footswitch दबाव थाली ऊपर अवलोकन कक्ष गर्मी में आरामदायक है. जब प्लेट तापमान 6 डिग्री सेल्सियस / मिनट की दर पर गरमा रही है, सामान्य जानवरों nocifensive या तो पंजा - हिंद से जुड़े व्यवहार एक्ज़िबिट * आमतौर पर तापमान 46 से 48 ° सी 3,5,9,10 उग्र. इस प्रकार, पशु ठेठ हटा प्रपत्र observ हैलगभग 3 मिनट के बाद व्यावहारिक कक्ष.
नोट: एक चूहे या माउस अर्थात् के ठेठ nocifensive प्रतिक्रिया अवलोकन, हिंद पंजा चाट, जबकि मिलाते और / या उठाने, थर्मल उत्तेजना को समाप्त करने के लिए पर्याप्त है. यह footswitch दबाव के द्वारा प्राप्त किया है. इस समय, सॉफ्टवेयर थाली तापमान रिकॉर्ड और प्लेट तुरंत नीचे ठंडा आपातोपयोगी तापमान (28 डिग्री सेल्सियस) तक तक पहुँच (~ 0.5 मिनट). इस तापमान यानी, एक है कि किसी भी nocifensive प्रतिक्रिया उदाहरण भी देते हैं सामान्य पशु (नियंत्रण) के हानिकारक गर्मी सीमा (टीएनटी) के रूप में माना जाता है.
* कभी कभी, विशेष रूप से चूहों में, हानिकारक तापमान nocifensive व्यवहार पहले एक में मनाया जा सकता है या दोनों (उदाहरण के लिए, जबकि बैठे चाट) forepaws, कुछ सेकंड पहले हिंद - पंजे. हालांकि, पहले से पंजा चाट सौंदर्य व्यवहार का एक सामान्य घटक है. इसलिए, केवल हिंद पंजा प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन कर रहे हैं. अवसरों में चूहों उनके हिंद पंजे के रूप में अच्छी तरह से दूल्हे सकता है. हालांकि, सामान्य संवारने पता करनापिछले कुछ सेकंड से अधिक ओ.टी., गहन नहीं शामिल चाट करता है और आमतौर पर अपने पंजे की सफाई के बाद समाप्त होता है. - धीरे थाली से पशु हटा दें और अपने संबंधित पिंजरे में जगह है. गर्मी सीमा माप तो अन्य नियंत्रण (सामान्य) पशु के लिए दोहराया है.
नोट: TNTs अवलोकन कक्ष से पशु हटाने के बिना 1-2 मिनट के अंतराल पर एक ही पशुओं में निर्धारित किया जा सकता है. चूहों या चूहों में टीएनटी determinations के कई दिनों के दौरान कई बार दोहराया जा सकता है. यह विशेष रूप से एक व्यक्ति जानवर का मतलब टीएनटी के रूप में अच्छी तरह के रूप में उम्र के साथ भिन्नता निर्धारित करने के लिए उपयोगी है. - टीएनटी नियंत्रण जानवरों के तीन या अधिक थ्रेसहोल्ड ± SEM के मतलब के रूप में व्यक्त किया है.
- प्राप्त डेटा का सांख्यिकीय विश्लेषण करने के लिए चूहों या चूहों के अलग उपचार समूहों की तुलना करने के लिए किया जाता है. अंतर का विश्लेषण सहित पैरामीट्रिक प्रक्रियाओं उचित जहां डेटा सामान्य रूप से वितरित कर रहे हैं इस्तेमाल कर सकते हैं और जहां उपचार समूहों होमोसेक्सुअलskedastic, जब इन शर्तों को संतुष्ट किया गया है निम्नलिखित दृष्टिकोण को लागू किया जा सकता है. विचरण के विश्लेषण न्यूमैन - Keuls कई माप अर्थात् में मतभेद है, साथ / उपचार के बिना या अलग समय अंक (जैसे, चित्रा 3 में डेटा) पर व्यक्तिगत TNTs दोहराया का पता लगाने के परीक्षण के द्वारा पीछा किया. बनती विद्यार्थी t-परीक्षण बनाम से पहले नशीली दवाओं के उपचार के बाद दो डेटा अर्थात् समूहों, TNTs की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, टी परीक्षण unpaired में टीएनटी परिवर्तन में मतभेदों को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है वाहन का इलाज पशुओं बनाम दवा इलाज (जैसे चित्रा 4 में डेटा).
3. परीक्षण मधुमेह पशु
streptozotocin मधुमेह (STZ) प्रेरित चूहे सबसे अधिक इस्तेमाल किया जानवर पी डी एन के तंत्र का अध्ययन और मॉडल के लिए दर्दनिवारक दवाओं और 11,12 के उपचारों का आकलन है. चूहे STZ की एक एकल intraperitoneal खुराक (60 मिलीग्राम / किग्रा) ख कर सकते हैं के द्वारा मधुमेह बनायाई 3 11 मधुमेह की शुरुआत के बाद तीसरे सप्ताह के दौरान थर्मल hyperalgesia के लिए परीक्षण किया गया. यह नोट करना महत्वपूर्ण है कि नहीं सभी मधुमेह चूहों पी डी एन विकसित करना है. हालांकि, जानवरों है कि hyperalgesia (~ 50%) विकसित हो आसानी से पहचाना जा सकता है. दरअसल, उनके TNTs सामान्य * से कम कर रहे हैं.
* STZ मधुमेह चूहों की TNTs का निर्धारण करने के लिए, एक प्रारंभिक के 15 प्लेट तापमान ° बजाय सी 28 डिग्री सेल्सियस प्रयोग किया जाता है. इन बदलाव के लिए कारण है पी डी एन के साथ सबसे अधिक मधुमेह पशुओं के के 2,11 hyperalgesic की उम्मीद कर रहे हैं. इसलिए, वे सामान्य हानिकारक गर्मी थ्रेसहोल्ड से कम होगा (जैसे, 45 <डिग्री सेल्सियस).
- एक चूहे मधुमेह परीक्षण उपकरण के शीर्ष पर अवलोकन कक्ष में रखा गया है. पशु थाली की सतह के लिए जलवायु का अभ्यस्त बनाना जब तक पशु एक सहज व्यवहार से पता चलता है की अनुमति दी है.
नोट: आमतौर पर, एक मधुमेह चूहे सामान्य व्यवहार के ज्यादा नहीं दिखाती है. मधुमेह चूहों आमतौर पर hypoactive, सुस्त हैं, अक्सर दिखाप्रतिबंधित आंदोलनों और धीमी गति से संवारने. यह दुर्लभ अवलोकन चैम्बर के ढक्कन की ओर स्टैंडिंग निरीक्षण. कुछ मिनट के बाद, मधुमेह चूहों शांति आकस्मिक आसपास के सूँघने के साथ कक्ष के एक कोने में रह सकते हैं. - एक बार मधुमेह पशु अवलोकन कक्ष में आरामदायक है, प्लेट गरम किया जाता है 2.3 चरण में मधुमेह चूहा nocifensive व्यवहार या तो हिंद / सामने पंजा शामिल प्रदर्शन कर सकते हैं. यह आमतौर पर गैर हानिकारक प्लेट (जैसे, <45 डिग्री सेल्सियस) तापमान, या तापमान 6 ° / सी मिनट वृद्धि के साथ कक्ष में अधिक से अधिक 5 मिनट के बाद होता है.
नोट: एक युवा वयस्क मधुमेह चूहे की nocifensive प्रतिक्रिया की है कि एक सामान्य चूहे से अलग नहीं है. हालांकि, न्यूनतम तापमान इस तरह के व्यवहार evoking काफी कम है. - 2.4 चरण देखें
- प्रयोग की दिन में तीन से अधिक थ्रेसहोल्ड का मतलब ° के रूप में व्यक्त सी ± SEM के diabeti की हानिकारक गर्मी सीमा माना जाता हैग पशु.
नोट: एक करने के लिए एक समान प्रतिमान सामान्य या मधुमेह चूहों के लिए समझाया गर्मी थ्रेसहोल्ड के पर थर्मल विरोधी nocifensive के दर्दनाशक दवाओं के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए पीछा किया जा सकता है.
4. परीक्षण analgesia
दवाओं के विरोधी nociceptive गुण (जैसे, दर्दनाशक दवाओं) के रूप में के रूप में अच्छी तरह के रूप में न्यूनतम प्रभावी खुराक pharmacologic मापदंडों का निर्धारण आसानी से ऊपर समझाया चरणों का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है. यह भविष्यवाणी की है कि एक एनाल्जेसिक / चूहों को दिलाई उचित खुराक काफी उनके TNTs के वृद्धि होगी. यह विशेष रूप से थर्मल hyperalgesia साथ 3 पशुओं में संवेदनशील है. हालांकि, परिणामों की व्याख्या में पूर्वाग्रह से बचने के लिए, एक पशु समूह के व्यवहार के अवलोकन में शामिल जांचकर्ताओं को पता है या नहीं पता है अगर पशुओं का इलाज किया गया था या नहीं होना चाहिए. इसके अलावा, पर्यवेक्षक द्वारा अंतःक्षिप्त किया जा दवाओं के एक और अन्वेषक के द्वारा तैयार किया जा सकता है और लेबलए, बी, सी, आदि खुराक प्रिंटआउट में प्रदान की जाती है, की पहचान पशु प्रति व्यक्ति खुराक लिस्टिंग.
दवा का परीक्षण किया जा रहा है पर निर्भर करता है, सामान्य या मधुमेह 5-15 मिनट पूर्व व्यवहार परीक्षण जानवरों के लिए एक संभावित एनाल्जेसिक के विभिन्न खुराक प्रशासित किया जा सकता है. उचित नियंत्रण शामिल किया जाना चाहिए (यानी, उम्र मिलान वाहन इंजेक्शन के साथ जानवरों अकेले और / या मधुमेह चूहों के बिना पी डी एन) और समान शर्तों का उपयोग कर परीक्षण किया है (जैसे, थाली की एक ही शुरू तापमान). दवाओं की पुरानी प्रभाव के रूप में अच्छी तरह से परीक्षण किया जा सकता है.
5. प्रतिनिधि परिणाम
सबसे कम प्लेट युवा वयस्क सामान्य गैर इलाज चूहों या चूहों या तो पंजा - हिंद में nocifensive प्रतिक्रियाओं evoking तापमान निर्धारित किया गया है निम्न चरणों का पालन 2-6 करने के लिए 2-1. चित्रा 1, टीएनटी के सामान्य युवा वयस्क चूहों और चूहों में दिखाया गया 47.2 0.2 ± ° 47.5 सी और ± 0.5 डिग्री सेल्सियस, क्रमशः.
हम observed व्यक्ति (2A चित्रा) TNTs और न ही एक ही उम्र के व्यक्तियों के बीच TNTs (चित्रा 2B) की महत्वपूर्ण परिवर्तन की न तो महत्वपूर्ण दैनिक परिवर्तन. टीएनटी लिंग कारण मतभेद (नहीं दिखाया गया है) मनाया गया.
STZ मधुमेह युवा वयस्क चूहों के TNTs एक समान फैशन में सामान्य चूहों (3.1 चरण के लिए 3.3) के लिए के रूप में निर्धारित किया गया है. हालांकि, शुरू की थाली तापमान 15 से स्थापित किया गया था ° सी बजाय 28 डिग्री सेल्सियस STZ मधुमेह चूहों के nocifensive व्यवहार कम से कम तीन बार एक व्यक्ति और एक दैनिक ग्यारह दिनों के बाद STZ इंजेक्शन शुरू फैशन में मूल्यांकन किया गया था. के रूप में चित्रा 3, STZ मधुमेह चूहों की टीएनटी में एक उल्लेखनीय गिरावट (पी <0.01) में दिखाया स्पष्ट दो सप्ताह के बाद STZ इंजेक्शन हो जाता है. STZ से मधुमेह चूहों का मतलब टीएनटी था 45.6 ± 0.1 ° C (n = 16, 14-23 दिन से जमा मान).
मधुमेह चूहों नॉरमा की तुलना में काफी कम टीएनटी का प्रदर्शनएल पी डी एन है पर विचार किया गया. इन चूहों को एक एनाल्जेसिक के तीव्र विरोधी nociceptive गुण के (एक मिश्रित) का परीक्षण किया गया. TNTs सामान्य और मधुमेह या तो परिसर या परीक्षण के पहले पांच मिनट में वाहन अकेले की एक खुराक के साथ इंजेक्शन चूहों में निर्धारित किया गया है. के रूप में चित्रा 4 में दिखाया गया है, अंतर - peritoneal परिसर की एक खुराक काफी मधुमेह चूहों की TNTs वृद्धि हुई है जब वाहन अकेले (45.6 डिग्री सेल्सियस बनाम 47.6 डिग्री सेल्सियस, क्रमशः) के साथ इलाज चूहों की तुलना में. एक परिसर के विरोधी nocifensive प्रभाव भी सामान्य चूहों में मनाया गया, हालांकि महत्वपूर्ण (पी <0.01), यह कम स्पष्ट (47.4 डिग्री सेल्सियस बनाम 48.0 डिग्री सेल्सियस, क्रमशः)
आकृति 1. सामान्य युवा वयस्क चूहों या चूहों की TNTs का दृढ़ संकल्प: युवा वयस्क (p21-24) चूहों या चूहों (P20-21) की TNTs iHPAM में परीक्षण किया गया कदम abo उल्लिखितve. 12 चूहों और 25 चूहों की कुल परीक्षण किया गया. माप कई दिनों के दौरान प्रदर्शन किया गया और परिणाम जमा थे. परिणाम ± SEM के मतलब के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. न्यूनतम और अधिकतम मानों टीएनटी इन चूहों में दर्ज 46.2 डिग्री सेल्सियस और 48.6 ° क्रमशः सी थे. चूहों के मामले में, अधिकतम और न्यूनतम टीएनटी दर्ज मूल्यों 48.8 डिग्री सेल्सियस और 44.9 डिग्री सेल्सियस, क्रमशः थे.
चित्रा 2. चूहों और चूहों में TNTs की उम्र निर्भरता: ए) साजिश रची चार साल की उम्र के 21 दिनों के 5 दिनों के दौरान कम से कम तीन बार दैनिक निर्धारित की सामान्य चूहों (n = 4) TNTs बी) चूहों की TNTs के संकेत पर एक बार निर्धारित littermates. उम्र. प्रत्येक निर्धारण बिंदु के शीर्ष पर संख्या इस्तेमाल littermates की संख्या का प्रतिनिधित्व करता है.
चित्रा 3. हम मधुमेह चूहों hyperalgesic 3 के हो जाते हैंमधुमेह की शुरुआत के बाद ई.के.एस.: छह (6 n =) उम्र मिलान युवा वयस्क चूहों STZ मधुमेह के TNTs हर दिन निर्धारित किया गया है मधुमेह के 11 पद शामिल दिनों शुरू. दिखाया दैनिक टीएनटी औसत (± SEM के मतलब है) कर रहे हैं. मधुमेह के 11-13 दिनों के बाद STZ इंजेक्शन के बीच निर्धारित TNTs सामान्य श्रेणी के भीतर (लाल रेखा) थे. दो सप्ताह के बाद STZ इंजेक्शन TNTs 45.1 में काफी कमी आई है 0.4 ± ° C (पी <0.05).
चित्रा 4. STZ मधुमेह चूहों में तीव्र विरोधी nocifensive के परिसर बी के प्रभाव युवा वयस्क सामान्य (नीला समूह n = 12) चूहों और उम्र. मिलान STZ-यह मधुमेह hyperalgesic चूहों के (हरे रंग समूह n = 6) iHPAM में वाहन की intraperitoneal इंजेक्शन के बाद परीक्षण किया गया (अंधेरे सलाखों) या मिश्रित (प्रकाश सलाखों). मतलब टीएनटी ± प्रत्येक उपचार (वाहन नियंत्रण या एक इलाज यौगिक) के लिए SEM दिखाए जाते हैं. तारों के सांख्यिकीय मतभेद निरूपित(पी <0.05).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
क्लासिक गर्म थाली थर्मल 4,13 hyperalgesia यों परीक्षण करने के लिए इसी प्रकार, यहाँ nociception की परख वर्णित चूहों और चूहों में nocifensive व्यवहार मात्रा ठहराना करने के लिए एक तेज और विश्वसनीय रास्ता देता है. हालांकि, क्लासिक परीक्षण के विपरीत, वृद्धिशील गर्म थाली विधि गैर इनवेसिव और वास्तव में तनाव से मुक्त है. हालांकि कुछ को नियंत्रित करने के लिए परीक्षण करने के लिए (यानी, पशु अवलोकन कक्ष में होना चाहिए) के लिए आवश्यक है, चूहों या चूहों के समान क्षेत्रों (उदाहरण के लिए, आवास के पिंजरों) के आदी रहे हैं.
वर्णित शर्तों के तहत, सामान्य युवा वयस्क चूहों और चूहों के 47 डिग्री सेल्सियस के आसपास तापमान पर nocifensive व्यवहार दिखाया हालांकि इन थ्रेसहोल्ड थोड़ा अन्य 3,5,13 जांचकर्ताओं द्वारा सूचना दी की तुलना में अधिक हैं, हमारे परिणाम 46-48 के थर्मल nociceptive सीमा के साथ समझौते में हैं डिग्री सेल्सियस 14 मानव में मनाया 15, बंदरों और अन्य पशु मॉडल 10. एडवेंचर्सces के हमारे अध्ययन और 3,5,13 प्रकाशित उन से TNTs में प्रयुक्त जानवर की उम्र से संबंधित हो सकता है. दरअसल, थर्मल nociceptive थ्रेसहोल्ड चूहों के उन है कि उम्र के 4 विकेटकीपर या 16 पुराने हैं की तुलना में युवा वयस्क चूहों में उच्च रहे हैं.
अंत में, ऊपर उल्लिखित चरणों का पालन, वृद्धिशील गर्म थाली पीड़ाशून्यता मीटर के सामान्य / मधुमेह एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके में चूहों या चूहों के थर्मामीटरों nociceptive थ्रेसहोल्ड के निर्धारण की अनुमति देता है. इसके अलावा, विशेष रूप से hyperalgesic चूहों के लिए दर्दनाशक दवाओं, के प्रशासन पर, टीएनटी में वृद्धि सांख्यिकीय पता लगाया जा सकता है. इस विधि के लिए कम से कम तनाव की शर्तों के तहत चूहों और चूहों में संभावित दर्दनाशक दवाओं स्क्रीन के लिए उपयोगी हो सकता है.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
हम के एनाल्जेसिक इन प्रयोगों में इस्तेमाल की पहचान का खुलासा नहीं करने का फैसला किया है. यहाँ दिखाया परिणामों का हिस्सा 71 अमेरिकन डायबिटीज एसोसिएशन (सैन डिएगो सीए) और 47 वें मधुमेह (लिस्बन, पुर्तगाल) के अध्ययन के लिए यूरोपीय संघ की वार्षिक बैठक के प्रथम वैज्ञानिक सत्र में प्रस्तुत किया गया है.
Acknowledgments
इस काम अमेरिकन डायबिटीज एसोसिएशन (एडीए), अनुदान JF1-10-14 (MDiF) द्वारा वित्त पोषित किया गया था. हम WSU में पशु संसाधन प्रयोगशाला के कर्मियों को धन्यवाद देना चाहूंगा. लेखक कृतज्ञता नील Paton, पीएच.डी. से डेटा का सांख्यिकीय विश्लेषण के साथ सहायता स्वीकार करते हैं
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incremental Hot-Plate Analgesia Meter | IITC Inc. Life Science | Part #PE34 | |
| Soft Series 8 | IITC Inc. Life Science | Part # Series8 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572201 |
References
- Baron, R. Peripheral neuropathic pain: From mechanisms to symptoms. Clin. J. Pain. 16, S12-S20 (2000).
- Calcutt, N. A., Jorge, M. C., Yaksh, T. L., Chaplan, S. R. Tactile allodynia and formalin hyperalgesia in streptozotocin-diabetic rats: Effects of insulin, aldose reductase inhibition and lidocaine. Pain. 68, 293-299 (1996).
- Bolcskei, K., Petho, G., Szolcsanyi, J. Noxious heat threshold measured with slowly increasing temperatures: Novel rat thermal hyperalgesia models. Methods Mol. Biol. 617, 57-66 (2010).
- Ankier, S. I. New hot plate tests to quantify antinociceptive and narcotic antagonist activities. Eur. J. Pharmacol. 27, 1-4 (1974).
- Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: A novel heat allodynia model sensitive to analgesics. Br. J. Pharmacol. 139, 49-58 (2003).
- Bolcskei, K., Horvath, D., Szolcsanyi, J., Petho, G. Heat injury-induced drop of the noxious heat threshold measured with an increasing-temperature water bath: A novel rat thermal hyperalgesia model. Eur. J. Pharmacol. 564, 80-87 (2007).
- Chesler, E. J., Wilson, S. G., Lariviere, W. R., Rodriguez-Zas, S. L., Mogil, J. S. Identification and ranking of genetic and laboratory environment factors influencing a behavioral trait, thermal nociception, via computational analysis of a large data archive. Neurosci. Biobehav. Rev. 26, 907-923 (2002).
- Langford, D. J., Crager, S. E., Shehzad, Z., Smith, S. B., Sotocinal, S. G., Levenstadt, J. S., Chanda, M. L., Levitin, D. J., Mogil, J. S. Social modulation of pain as evidence for empathy in mice. Science. 312, 1967-1970 (2006).
- Hunt, S. P., Koltzenburg, M. The neurobiology of pain. , Oxford University Press. New York. (2005).
- Willis, W. D. The pain system : The neural basis of nociceptive transmission in the mammalian nervous system. , Basel, New York, Karger. (1985).
- Calcutt, N. Modeling diabetic sensory neuropathy in rats. In: Methods in molecular medicine. Pain research: Methods and protocols. , Humana Press. Totowa, N.J. (2004).
- Bars, D. L. e, Gozariu, M., Cadden, S. W. Animal models of nociception. Pharmacol. Rev. 53, 597-652 (2001).
- Shaikh, A. S., Somani, R. S. Animal models and biomarkers of neuropathy in diabetic rodents. Indian J. Pharmacol. 42, 129-134 (2010).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32, 77-88 (1988).
- Hardy, J. D. Method for the rapid measurement of skin temperature during exposure to intense thermal radiation. J. Appl. Physiol. 5, 559-566 (1953).
- Sumino, R., Dubner, R., Starkman, S. Responses of small myelinated "warm" fibers to noxious heat stimuli applied to the monkey's face. Brain Res. 62, 260-263 (1973).
- Hammond, D. L., Ruda, M. A. Developmental alterations in thermal nociceptive threshold and the distribution of immunoreactive calcitonin gene-related peptide and substance p after neonatal administration of capsaicin in the rat. Neurosci. Lett. 97, 57-62 (1989).
