Doe-het-zelf-Inrichting voor Herstel van gecryopreserveerde monsters per ongeluk laat vallen in cryogene opslagtanks
Summary
Hier presenteren we een goedkope, duurzame cryotolerant apparaat voor het monster opvragen uit Dewar tanks gevuld met vloeibare stikstof. Het gemak van de bouw en de modulaire opbouw van het apparaat maakt het proces van het monster ophalen van cryogene tanks veilig en gemakkelijk.
Abstract
Vloeibare stikstof is kleurloos, geurloos, extreem koud (-196 ° C) vloeistof onder druk gehouden. Het wordt algemeen gebruikt als een cryogene vloeistof voor langdurige opslag van biologische materialen zoals bloed, cellen en weefsels 1,2. De cryogene aard van vloeibare stikstof, terwijl het ideaal voor het monster het behoud, kan leiden tot snel invriezen van levende weefsels bij contact – bekend als 'cryogene brandwonden "2, die kan leiden tot ernstige bevriezingsverschijnselen in de personen die nauw betrokken zijn bij de opslag en het ophalen van monsters van Dewars. Bovendien, zoals vloeibare stikstof verdampt vermindert de zuurstofconcentratie in de lucht kan veroorzaken asfyxie, vooral in afgesloten ruimten 2.
In laboratoria, zijn biologische monsters vaak opgeslagen in cryovials of cryoboxes gestapeld in roestvrij stalen rekken binnen de Dewar tanks 1. Deze stellingen zijn voorzien van een lange as dozen wegglijdt uit de rekken en in de onderzijde vanDewars tijdens routine behandeling. Maar al te vaak, echter, dozen of flesjes met kostbare stalen slip uit en zinken naar de bodem van vloeibare stikstof gevulde tank. In dergelijke gevallen kan monsters moeizaam teruggevonden na overdracht van de vloeibare stikstof in een extra container of ontdoen. De dozen en flacons kunnen dan relatief veilig hersteld van geleegd Dewar. Echter, de cryogene aard van vloeibare stikstof en de uitbreiding tarief maakt gezonken monster ophalen gevaarlijk. Het wordt algemeen aanbevolen door Veiligheid Kantoren die monster ophalen nooit worden uitgevoerd door een enkele persoon. Een ander alternatief is om in de handel verkrijgbare koele grijpers, tangen te gebruiken te trekken uit de flesjes 3. Echter, beperkte zichtbaarheid in de donkere vloeistof gevulde Dewars vormt een belangrijke beperking in het gebruik ervan.
In dit artikel beschrijven we de bouw van een Cryotolerant DIY vanginrichting, welk monster ophalen maakt van Dewar met cryogene vloeistoffen zowel veilig als eenND eenvoudig.
Protocol
Discussion
Een van de meest voorkomende methoden van het ophalen van cryoboxes en cryovials van de bodem van de Dewar tank is om vloeibare stikstof decanteren in een vrije container en trek de monsters die nog in de kolf of drijvend in de afgegoten vloeibare stikstof. Dit is echter een onveilige die cryogene brandwonden of stikken door langdurige blootstelling aan vloeibare stikstof dampen 2. Andere veel voorkomende manier van het ophalen van gevallen cryovials betreft het gebruik van cryovial tang 3. Echter,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DIY cryogene ophalen van het apparaat had getest in de loop van de projecten "Modeling bacteriële eiwitten prenylatie in eukaryote cellen met behulp van bio-informatica en moleculaire aanpak" wordt gesponsord door Mary Louise Andrews Award for Cancer Research programma, Virginia Academie van Wetenschappen, "fysiologische betekenis van RNA bewerken in Plasma Dendritische cellen "gesponsord door The Thomas F. Jeffress en Kate Miller Jeffress Memorial Trust en staat Contract 16.740.11.0364 (Ministerie van Wetenschap en Onderwijs, Rusland). We willen Beth Eom bedanken voor hulp bij het RNA integriteit experiment.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
