Aqui nós apresentamos um baixo custo, durável cryotolerant dispositivo para a recuperação de amostra de Dewar tanques cheios de nitrogênio líquido. A facilidade de construção e design modular do dispositivo faz com que o processo de recuperação da amostra de tanques criogênicos seguro e fácil.
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Artigo de método
Do-It-Yourself Dispositivo de Recuperação de amostras criopreservadas cair acidentalmente em Tanques de armazenamento criogênico
Neste artigo
Resumo
Resumo
O nitrogênio líquido é incolor, inodoro, extremamente frio (-196 ° C) líquido mantido sob pressão. É comummente usado como um fluido criogénico para armazenamento a longo prazo de materiais biológicos tais como sangue, células e tecidos 1,2. A natureza criogénico de azoto líquido, enquanto ideal para a preservação da amostra, pode causar congelação rápida dos tecidos vivos em contacto - conhecido como 'criogénico queimadura' 2, o que pode levar a queimaduras graves em pessoas intimamente envolvidas no armazenamento e recuperação de amostras de Dewars. Além disso, como o azoto líquido evapora que reduz a concentração de oxigénio no ar e pode causar asfixia, especialmente em espaços confinados 2.
Nos laboratórios, amostras biológicas são frequentemente armazenados em criotubos ou cryoboxes empilhados em prateleiras de aço inoxidável dentro dos tanques de Dewar 1. Estes suportes de armazenamento são fornecidos com um eixo de tempo para impedir caixas de deslizar para fora dos suportes e na parte inferior doDewars durante o manuseio de rotina. Com demasiada frequência, no entanto, caixas ou frascos com amostras preciosas escorregar e afundar até o fundo do tanque de nitrogênio líquido preenchido. Em tais casos, as amostras podem ser tediosamente recuperada após a transferência do azoto líquido para um recipiente de reserva ou descartá-lo. As caixas e frascos pode então ser recuperado a partir com relativa segurança Dewar esvaziado. No entanto, a natureza criogénico de azoto líquido e da sua taxa de expansão torna perigoso recuperação afundado amostra. É geralmente recomendado pelo Escritórios de segurança que a recuperação da amostra nunca ser realizada por uma única pessoa. Outra alternativa é usar comercialmente disponíveis grabbers frescos ou pinças para retirar os 3 frascos. No entanto, a visibilidade limitada dentro dos escuros cheios de líquidos Dewars representa uma grande limitação na sua utilização.
Neste artigo, descrevemos a construção de um dispositivo Cryotolerant recuperação DIY, que faz recuperação de amostra de Dewar contendo fluidos criogênicos tanto a segurança de umnd fáceis.
Protocolo
1. Montagem do dispositivo Cryotolerant para Recuperação de Cryoboxes
- Usando um alicate, endireitar um lado da face 3 Nota uma forte L-tie (Figura 1A) para fazer forte-tie em forma mostrada na Figura 1B:. As dimensões do tie-forte pode ser seleccionada dependendo do diâmetro do gargalo do Dewar .
- Garantir dois tão fortes de laços com uma cinta de T-tie forte (Figura 2) usando Crown porca e parafuso, anilha e parafuso para formar a base Cryoscoop como mostrado na Figura 3 (AB). Nota: Dois fortes são usadas para permitir a recuperação de 5 ½ x 5 ½ pol cryoboxes.
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Discussão
Um dos métodos mais comuns de recuperar cryoboxes e criotubos a partir do fundo do tanque Dewar é decantar azoto líquido para um recipiente de reserva e puxar para fora as amostras restantes no balão ou flutuando na azoto líquido decantado. Isto é, no entanto, uma prática insegura que pode provocar queimaduras criogénicos ou asfixia devido a exposição prolongada a vapores de azoto líquido 2. Outra forma comum de recuperação de criotubos caídos envolve o uso de pinças criotubo 3. No entanto, a visib.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
DIY criogênico dispositivo de recuperação tinha sido testado no decorrer dos projetos "Modelagem prenilação proteína bacteriana em células eucarióticas utilizando abordagens moleculares e de bioinformática", patrocinado pelo Prêmio Mary Louise Andrews para o programa de Pesquisa do Câncer, Virginia Academy of Science ", significado fisiológico da edição de RNA no Plasma Células dendríticas ", patrocinado pela F. Thomas Jeffress e Kate Miller Jeffress Memorial Trust e Contrato 16.740.11.0364 Estado (Ministério da Ciência e Educação, Rússia). Gostaríamos de agradecer a Beth Eom para obter ajuda com o experimento integridade do RNA.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários |
| Hillman Grupo Plated Slotted planas 1-3/8 x 4 pés; calibre 14 | Loja de ferragem local | N / A | 1 unidade necessária |
| Coroa Parafuso de aço inoxidável # 6 - 32 x 3/8 pol Oval Cabeça Parafuso Unidade Phillips | Loja de ferragem local | Modelo # 42281 | 4 unidades necessárias |
| Coroa Parafuso 3/8 pol x 1-1/2 pol zincado Arruelas de Aço Fender | Loja de ferragem local | Modelo # 20122 | 4 unidades necessárias |
| Coroa Parafuso galvanizado # 8-32 Nut Parafuso | Loja de ferragem local | Modelo # 18512 | 4 unidades necessárias |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 dentro Metade da Base | Hardware localfazer compras | Modelo # BC40Z | 2 unidades necessárias |
| 6 Simpson Strong-Tie pol x 6 pol Correia T | Loja de ferragem local | Modelo # 66T | 1 unidade necessária |
| Oneida 6 "peneira | Supermercados local | Modelo # 7859W | 1 unidade necessária |
| O Grupo Hillman Galvanizado Nuts Hex 3/8-16 | Loja de ferragem local | Modelo #: 810,509 | 6 unidades necessárias |
| O Grupo Hillman Galvanizado parafusos sextavados 3/8- 16 | Loja de ferragem local | 4 unidades necessárias | |
| Espuma para isolamento | Loja de ferragem local | 1 unidade necessária | |
| Chave de fenda | Loja de ferragem local | 1 unidade necessária | |
| Alicate | Loja de ferragem local | 1 unidade necessária |
Referências
- Kittel, P. Advances in Cryogenic Engineering. , Springer. 41(1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , Plenum Press. New York. (1996).
- Council, N. R.
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Reimpressões e permissões
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