Summary

Cryopreserved नमूने की वसूली के लिए डिवाइस - यह खुद गलती क्रायोजेनिक भंडारण टैंक में गिरा

Published: May 11, 2012
doi:

Summary

यहाँ हम देवर तरल नाइट्रोजन से भरा टैंक से नमूना पुनर्प्राप्ति के लिए एक कम लागत, टिकाऊ cryotolerant युक्ति उपस्थित थे. निर्माण और डिवाइस की मॉड्यूलर डिजाइन के आराम क्रायोजेनिक टैंक से नमूना पुनर्प्राप्ति की प्रक्रिया सुरक्षित और आसान बनाता है.

Abstract

तरल नाइट्रोजन बेरंग, बिना गंध, बहुत ठंड (-196 डिग्री सेल्सियस) तरल दबाव में रखा है. यह आमतौर पर रक्त कोशिकाओं और ऊतकों 1,2 के रूप में जैविक सामग्री की लंबी अवधि के भंडारण के लिए एक क्रायोजेनिक तरल पदार्थ के रूप में प्रयोग किया जाता है. क्रायोजेनिक तरल नाइट्रोजन प्रकृति, जबकि नमूना संरक्षण के लिए आदर्श है, संपर्क पर जीवित ऊतकों की तेजी से ठंड का कारण बन सकते हैं – के रूप में क्रायोजेनिक जला 2 'में जाना जाता है, जो निकट Dewars से नमूने का भंडारण और पुनर्प्राप्ति में शामिल व्यक्तियों में गंभीर शीतदंश के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसके अतिरिक्त, के रूप में तरल नाइट्रोजन evaporates के यह हवा में ऑक्सीजन एकाग्रता कम कर देता है और श्वासावरोध सीमित दो रिक्त स्थान में विशेष रूप से, कारण हो सकता है.

प्रयोगशालाओं में, जैविक नमूने अक्सर cryovials या cryoboxes देवर के भीतर एक टैंक स्टेनलेस स्टील के रैक में खड़ी में जमा हो जाती है. इन भंडारण रैक एक लंबे समय के रैक से बाहर फिसल से रोकने के बक्से शाफ्ट के साथ और नीचे में प्रदान की जाती हैंदिनचर्या से निपटने के दौरान dewars. सब भी अक्सर, तथापि, बक्से या शीशियों कीमती नमूनों के साथ बाहर पर्ची और तरल नाइट्रोजन भरे टैंक के नीचे सिंक करने के लिए. ऐसे मामलों में, नमूने उबाते हुए एक अतिरिक्त कंटेनर या यह discarding में तरल नाइट्रोजन के हस्तांतरण के बाद लिया जा सकता है. बक्से और शीशियों तो अपेक्षाकृत सुरक्षित रूप से खाली देवर से बरामद हो सकता है. हालांकि, तरल नाइट्रोजन और इसके विस्तार की दर के क्रायोजेनिक प्रकृति के धँसा नमूना पुनर्प्राप्ति खतरनाक बनाता है. यह आमतौर पर सुरक्षा कार्यालय द्वारा सिफारिश की है कि नमूना पुनर्प्राप्ति बाहर एक ही व्यक्ति द्वारा किया जा कभी नहीं. एक अन्य विकल्प के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध शांत grabbers या चिमटे का उपयोग करने के लिए 3 शीशियों खींच रहा है. हालांकि, अंधेरे तरल भरा Dewars के भीतर सीमित दृश्यता अपने प्रयोग में एक प्रमुख सीमा बन गया है.

इस अनुच्छेद में, हम एक Cryotolerant DIY पुनर्प्राप्ति उपकरण है, जो देवर से नमूना पुनर्प्राप्ति करता है क्रायोजेनिक तरल पदार्थ युक्त दोनों सुरक्षित एक के निर्माण का वर्णनआसान एन डी.

Protocol

1. Cryotolerant डिवाइस के Cryoboxes की पुनर्प्राप्ति के लिए विधानसभा . सरौता का प्रयोग, बाहर तीन पक्षीय मजबूत टाई करने के लिए (चित्रा 1 ए) एक एल आकार मजबूत टाई चित्रा 1 बी में दिखाया नोट के एक पक्ष क?…

Discussion

एक देवर टैंक के नीचे से cryoboxes और cryovials पुन: प्राप्त करने का सबसे आम तरीकों में से एक खाली कंटेनर में तरल नाइट्रोजन छानना और बाहर खींच नमूने कुप्पी में शेष या में decanted तरल नाइट्रोजन चल रहा है. यह है, तथापि, एक असु?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

DIY क्रायोजेनिक पुनर्प्राप्ति युक्ति यूकेरियोटिक कोशिकाओं में जैव सूचना विज्ञान और आणविक दृष्टिकोण का उपयोग कर मॉडलिंग बैक्टीरियल प्रोटीन prenylation "कैंसर रिसर्च प्रोग्राम, वर्जीनिया विज्ञान अकादमी के लिए मरियम लुईस एंड्रयूज पुरस्कार द्वारा प्रायोजित," प्लाज्मा में शाही सेना संपादन की शारीरिक मतलब परियोजनाओं के पाठ्यक्रम में परीक्षण किया गया था वृक्ष के समान कोशिकाओं "थॉमस एफ Jeffress और केट मिलर Jeffress मेमोरियल ट्रस्ट और राज्य 16.740.11.0364 अनुबंध (विज्ञान और शिक्षा मंत्रालय, रूस) के द्वारा प्रायोजित. हम के बेथ EOM आरएनए अखंडता के प्रयोग के साथ सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge Local Hardware shop N/A 1 unit required
Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw Local Hardware shop Model # 42281 4 units required
Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers Local Hardware shop Model # 20122 4 units required
Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut Local Hardware shop Model # 18512 4 units required
Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base Local Hardware shop Model # BC40Z 2 units required
Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap Local Hardware shop Model # 66T 1 unit required
Oneida 6″ Mesh Strainer Local Grocery shop Model # 7859W 1 unit required
The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 Local Hardware shop Model #:810509 6 units required
The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 Local Hardware shop   4 units required
Foam for insulation Local Hardware shop   1 unit required
Screw Driver Local Hardware shop   1 unit required
Pliers Local Hardware shop   1 unit required

References

  1. Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
  2. Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
  3. Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
  4. Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
  5. Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
  6. Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
  7. Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
  8. Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
  9. Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
  10. Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).

Play Video

Cite This Article
Mehta, R., Baranova, A., Birerdinc, A. Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks. J. Vis. Exp. (63), e3903, doi:10.3791/3903 (2012).

View Video