Gjør-det-selv Enhet for gjenoppretting av Cryopreserved Prøver uhell falt inn Kryogeniske lagertanker
Summary
Her presenterer vi en lav kostnad, slitesterk cryotolerant enhet for sample henting fra Dewar tanker fylt med flytende nitrogen. Den enkle konstruksjonen og modulære utformingen av enheten gjør prosessen med prøven henting fra kryogene tanker trygt og enkelt.
Abstract
Flytende nitrogen er fargeløs, luktfri, ekstremt kaldt (-196 ° C) væsken holdes under press. Den brukes ofte som en kryogen væske for langsiktig lagring av biologisk materiale som blod, celler og vev 1,2. Den kryogenisk natur flytende nitrogen, mens ideell for prøve bevaring, kan føre til rask frysing av levende vev ved kontakt – kjent som "kryogen burn '2, som kan føre til alvorlig forfrysning i personer involvert i lagring og gjenfinning av prøver fra Dewars. I tillegg, som flytende nitrogen fordamper det reduserer oksygenkonsentrasjonen i luften og kan forårsake kvelning, spesielt i trange rom 2.
I laboratorier, er biologiske prøver ofte lagret i cryovials eller cryoboxes stablet i rustfritt stål reoler innenfor Dewar tanks 1. Disse lagring stativer er utstyrt med en lang sjakt for å hindre bokser sklir ut fra stativet og inn i bunnen avDewars under rutinemessig håndtering. Alt for ofte, men bokser eller flasker med edle prøver gli ut og synker til bunnen av flytende nitrogen fylt tanken. I slike tilfeller kan prøvene tediously hentes Etter overføring av flytende nitrogen til et ekstra container eller forkaster det. Boksene og hetteglass kan da være relativt trygt utvinnes fra tømt Dewar. Men gjør kryogenisk natur flytende nitrogen og dens ekspansjon sats nedsunket prøven henting farlig. Det er ofte anbefalt av Safety Kontorer at prøven gjenfinning aldri utføres av en enkelt person. Et annet alternativ er å bruke kommersielt tilgjengelige kule grabbers eller tang for å trekke ut de hetteglassene 3. Samtidig er begrenset sikt i de mørke væskefylte Dewars en stor begrensning i bruken.
I denne artikkelen beskriver vi byggingen av et Cryotolerant DIY henting enhet, som gjør prøven henting fra Dewar inneholder kryogene væsker både sikkert ennd enkle.
Protocol
Discussion
En av de vanligste metodene for å hente cryoboxes og cryovials fra bunnen av Dewar tanken er å decant flytende nitrogen i en ekstra container og trekke ut prøvene som er igjen i flasken eller flytende i dekantert flytende nitrogen. Dette er imidlertid en utrygg praksis som kan forårsake kryogeniske forbrenninger eller kvelning på grunn av langvarig eksponering for flytende nitrogen damper to. Annen vanlig måte å hente falne cryovials innebærer bruk av cryovial tang 3. Imidlertid begrenser b…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DIY kryogenisk gjenfinning enheten hadde blitt testet i løpet av de prosjektene "Modeling bakterieprotein prenylation i eukaryote celler ved hjelp av bioinformatikk og molekylær tilnærminger" sponset av Mary Louise Andrews Award for Cancer Research Program, Virginia Academy of Science, "Physiological Meaning of RNA Redigering i Plasma Dendrittiske celler "sponset av Thomas F. Jeffress og Kate Miller Jeffress Memorial Trust og State Kontrakt 16.740.11.0364 (Departementet for vitenskap og utdanning, Russland). Vi ønsker å takke Beth Eom for hjelp med RNA integritet eksperimentet.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
