量子点的生长曲线和平皿计数的细菌毒性检测的增溶作用和生物共轭
Summary
抗微生物或抗癌的应用，如半导体量子点（量子点）的纳米粒子可以被用于创建photoactivatable代理。此技术演示如何水溶解碲化镉（碲化镉）量子点，他们共轭抗生素，并执行基于生长曲线和平板计数的细菌抑制法。
Abstract
量子点（量子点）的大小取决于发射光谱荧光半导体纳米可以通过广泛的波长选择兴奋。量子点成像，诊断和治疗，由于其明亮，稳定的荧光1,2 3,4,5吸引了很多人的兴趣。量子点可以结合多种生物活性分子结合到细菌和哺乳动物细胞6。
量子点也被广泛的调查，有针对性的杀死细菌的细胞毒性药物。乘耐药菌株的出现，正在迅速成为一个公共健康危机，特别是在7革兰阴性菌的情况下。由于众所周知的某些纳米材料，特别是银的抗菌效果，有数以百计的研究研究纳米粒子的毒性细菌8。与其他类型的半导体纳米粒子，以及进行细菌研究，ESPECially纳米TiO 2 9,10-11，而且氧化锌12和其他包括CuO的13。在这些研究中一些比较菌株已执行，通常比较，用革兰氏阳性的革兰阴性应变。所有这些粒子毒性的机制是由于氧化作用：无论是光学生成的活性氧（ROS）的颗粒或直接释放的金属离子可以引起氧化毒性。即使这些材料，不同的研究结果差异很大。在一些研究中的革兰氏阳性的测试应变据说超过革兰氏阴性10敏感;有些是相反的14。这些研究已审查15。
在所有纳米研究，颗粒组成，大小，表面化学，样品老化/击穿，和波长，功率，光线照射的时间都可以显着影响的结果。此外，甲醇合成小号的副产品和溶剂必须考虑16 17。高通量筛选技术需要能够制定有效的新的纳米药物。
CdTe量子点有18单独或与抗生素联合抗微生物作用。在先前的研究中，我们发现，抗生素的耦合，以碲化镉可以增加对细菌的毒性，但下降到哺乳动物细胞的毒性，由于减少活性氧的生产共轭19。虽然这是不太可能将批准供人类使用含镉化合物，这类制剂可用于表面或水的杀菌消毒。
在这个协议中，我们给出一个简单的方法，以巯基丙酸（MPA）的溶解与CdTe量子点。量子点是准备在一个小时之内使用。然后，我们证明耦合抗菌剂。
该协议的第二部分演示了96抑菌试验用结合和游离量子点。读了许多小时的光密度，允许QD加法和光线照射后恢复期间，以及立即进行评估的影响。我们也说明了量化细菌生存的殖民地计数。
Protocol
1。量子溶这是一个对于CdTe的适当方法。类似的方法可以用来与其他类型的量子点，如磷化铟/硫化锌20和硒化镉/硫化锌21。 准备在15μM（光密度= 2.5在第一激子峰）的甲苯CdTe量子点的解决方案。 200μL此股票转移到玻璃小瓶。不要使用塑料！ 加入800μL的甲苯，1 mL的200 mM硼酸盐缓冲液（pH值9）和11.5米巯基丙酸（MPA）2μL。 例小瓶和大…
Discussion
纳米粒子代表一个充满希望的方式来创造新的抗微生物药物。生长曲线分析是一种方法来监测细菌细胞密度区分积极从生长抑制细胞生长的细胞。加上平板计数时，它可以让一个共轭抗生素潜力的深入分析。 96格式允许浓度相对高通量变化和其他条件，如光线照射;后者是光活化剂，如量子点是至关重要的。这个基本的方法上的许多变化是可能的，使它成为一个纳米毒理学的通用的方法。
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由NSERC个人发现程序的NSERC / CIHR协作的健康研究计划（CHRP）和NSERC的CREATE加拿大天体培训计划（CATP）。
Materials
| Name | Company | Catalog number | Comments (optional) |
| Borate Buffer Component #1 | Fisher | Boric acid A-74-1 | |
| Borate Buffer Component #2 | Sigma-Aldrich | Sodium Tetraborate B9876 | |
| MPA | Sigma-Aldrich | M5801 | |
| Vivaspin 500 | GE Healthcare | 28-9322 | Various MWCO available |
| Glass vials | Fisher | 03-338C | |
| EDC | Sigma-Aldrich | E6383 | |
| Polymyxin B | Sigma-Aldrich | P1004 | |
| Bacterial growth medium (LB) Component #1 | Fisher | NaCl S271 | |
| Bacterial growth medium (LB) Component #2 | BD | Tryptone 211705 | |
| Bacterial growth medium (LB) Component #3 | BD | Yeast Extract 211929 | |
| Lamp for light exposure | Custom | ||
| Clear-bottom 96-well plates | Fisher | 07-200-567 or 07-200-730 | |
| Fluorescence spectrometer | Molecular Devices | ||
| Absorbance plate reader | Molecular Devices | ||
| BactoAgar for solid media | Bioshop | AGR001.1 | |
| Petri dishes round | Fisher | 08-75-12 | |
| Petri dishes rectangular | Fisher | 08-757-11A |
References
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Quantum DotsSolubilizationBio-conjugationBacterial Toxicity AssaysGrowth CurvePlate CountFluorescenceImagingDiagnosticsTherapyCytotoxic AgentsTargeted Killing Of BacteriaMultiply-resistant Bacterial StrainsPublic Health CrisisGram Negative PathogensNanomaterialsAntimicrobial EffectToxicity Of Nanoparticles To BacteriaSemiconductor NanoparticlesTiO2ZnOCuOOxidationReactive Oxygen Species (ROS)Metal Ions
Cite This Article
Park, S., Chibli, H., Nadeau, J. Solubilization and Bio-conjugation of Quantum Dots and Bacterial Toxicity Assays by Growth Curve and Plate Count. J. Vis. Exp. (65), e3969, doi:10.3791/3969 (2012).