Основной<em> Caenorhabditis Элеганс</em> Методы синхронизации и наблюдения
Summary
Легкость поддержания и распространения нематоды<em> С. Элеганс</em> Сделать хорошую модель организма для работы. Возможность синхронизации червей позволяет работа со значительным количеством субъектов, в то же стадии развития, что способствует изучению одного конкретного процесса у многих животных.
Abstract
Исследования в области молекулярной и эволюционной биологии из Элеганс нематоды Caenorhabditis было начато в начале семидесятых годов Сидней Бреннер и с тех пор он широко используется в качестве модельного организма 1. C. Элеганс имеет основные атрибуты, такие как простота, прозрачность и коротким жизненным циклом, которые сделали его подходящим экспериментальной системы для фундаментальных биологических исследований на протяжении многих лет 2. Открытия в этой нематоды имеют далеко идущие последствия, так как многие клеточные и молекулярные процессы, контроль за развитием животного эволюционного консервативных 3.
C. Элеганс жизненный цикл проходит через зачаточном состоянии и четыре личиночной стадии до животных в зрелом возрасте. Развитие может занять от 2 до 4 дней в зависимости от температуры. В каждом из этапов несколько характерных черт можно наблюдать. Знание его полного линии ячейки 4,5 с глубоким annotatионных его генома превратить эту нематоду в большой модели в таких областях как нейробиология 6, 7,8 старения, стволовых клеток, биология 9 и зародышевой линии биологии 10.
Дополнительной функцией, которая делает C. Элеганс привлекательная модель для работы с является возможность получения популяции червей синхронизированы на определенном этапе в относительно легкий протокол. Простота обслуживания и распространяется эта нематода добавлена возможность синхронизации обеспечивает мощный инструмент для получения большого количества червей, которые могут быть использованы для широкого круга малых и высокой пропускной экспериментов, таких как экраны RNAi, микрочипы, массивные последовательности, иммуноблот или гибридизация, среди других.
Благодаря своей прозрачности, C. Элеганс структур можно выделить под микроскопом с помощью дифференциальных помех контрастной микроскопии, также известный как Nomarski микроскопиископировать. Использование флуоресцентных связующего ДНК DAPI (4 ',6-диамидино-2-фенилиндола), например, может привести к конкретной идентификации и локализации отдельных клеток, а также внутриклеточных структур / дефекты, связанные с ними.
Protocol
Discussion
Нематоды Синхронизация
Несколько отбеливания решения были описаны. Мы пытались пять различных рецептов (см. таблицу), а в наших руках, они не показывают существенные различия в синхронизации червь населения (рис. 1). Однако наши эксперименты показывают, ч…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы выразить признательность MICINN (PTA программы поддержки Монтсеррат Порт-де-ла Рива), AGAUR (PhD стипендий для Лауры Fontrodona), Институту Salud Carlos III (Мигель Сервет программы поддержки Хулиан Ceron) и Мари Кюри IRG, ISCIII и IDIBELL для финансирования лаборатории.
References
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
- Wood, W. B. . The nematode Caenorhabditis elegans. , (1988).
- Potts, M. B., Cameron, S. Cell lineage and cell death: Caenorhabditis elegans and cancer research. Nat. Rev. Cancer. 11, 50-58 (2011).
- Kimble, J., Hirsh, D. The postembryonic cell lineages of the hermaphrodite and male gonads in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 70, 396-417 (1979).
- Sulston, J. E., Horvitz, H. R. Post-embryonic cell lineages of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).
- Hobert, O. Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans. WormBook. , 1-24 (2010).
- Depuydt, G., Vanfleteren, J. R., Braeckman, B. P. Protein metabolism and lifespan in Caenorhabditis elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 81-107 (2010).
- Jia, K., Levine, B. Autophagy and longevity: lessons from C. elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 47-60 (2010).
- Joshi, P. M., Riddle, M. R., Djabrayan, N. J., Rothman, J. H. Caenorhabditis elegans as a model for stem cell biology. Dev. Dyn. 239, 1539-1554 (2010).
- Waters, K. A., Reinke, V. Extrinsic and intrinsic control of germ cell proliferation in Caenorhabditis elegans. Mol. Reprod. Dev. 78, 151-160 (2011).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. , (2006).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev. Biol. 8, 49 (2008).
- Olahova, M. A redox-sensitive peroxiredoxin that is important for longevity has tissue- and stress-specific roles in stress resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19839-19344 (2008).
- Voisine, C. Identification of potential therapeutic drugs for huntington’s disease using Caenorhabditis elegans. PLoS One. 2, e504 (2007).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
- Aceves, J., Erlij, D., Martinez-Maranon, R. The mechanism of the paralysing action of tetramisole on Ascaris somatic muscle. Br. J. Pharmacol. 38, 602-607 (1970).
- Shaham, S. Methods in cell biology. Wormbook. , (2006).
- Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbardm, E. J. Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition. Genetics. 163 (1), 115-132 (2003).
- Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).
