Den intraluminal midten cerebral okklusjon modell i mus er her presentert. Omfanget av cerebral infarkt er evaluert av en nevrologisk score og Cresyl fiolett flekker, en alternativ flekker til TTC, som tilbyr den store fordelen til å teste i parallelle mange interessegrupper markører.
Hjerneslag er den tredje årsak til dødelighet og den ledende årsak til uførhet i verden. Iskemiske hjerneslag står for ca 80% av alle slag. Imidlertid er trombolytisk vevsplasminogenaktivator (tPA) den eneste behandling av akutt hjerneinfarkt som eksisterer. Dette førte forskerne å utvikle flere hjerneinfarkt modeller i en rekke arter. To hovedtyper av gnagere modeller har blitt utviklet: modeller av global cerebral iskemi eller fokale cerebral iskemi. Å etterligne iskemisk slag hos pasienter, i hvorav ca 80% trombotiske eller embolisk hjerneslag inntreffer i territoriet til midten cerebral arterie (MCA), den intraluminal midten cerebral arterie okklusjon (MCAO) modellen er ganske relevant for hjerneslag studier. Denne modellen ble først utviklet i rotter ved Koizumi et al. I 1986 1. På grunn av den enkle genetiske manipulasjon i mus, har disse modeller også blitt utviklet i denne arten 2-3.
innhold "> Heri presenterer vi transient MCA okklusjon prosedyren i C57/Bl6 mus. Tidligere studier har rapportert at fysiske egenskaper sperreinnretningen som spissen diameter, lengde, form og fleksibilitet er kritisk for reproduserbarheten av infarktvolum 4. Heri, har en kommersiell silisium belagt monofilamenter (Doccol Corporation) blitt brukt. En annen stor fordel er at dette monofilament reduserer risikoen for å indusere subaraknoidal blødninger. Bruke Zeiss stereo-mikroskop STEMI 2000 ble silisium belagt monofilament innført i den interne carotisar (ICA) via et snitt i den eksterne karotidarterie (ECA) inntil monofilamentet occludes basen av MCA. Blodstrøm ble gjenopprettet en time senere ved fjernelse av monofilamentet å etterligne restaurering av blodstrøm etter lysis av en tromboembolisk blodpropp i mennesker. Omfanget av cerebral infarkt kan evalueres først med en neurologisk score og ved måling av den infarktvolum.Iskemiske mus ble dermed analysert for nevrologisk score på ulike post-reperfusjon ganger. Å vurdere infarktvolum, farging med 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (TTC) ble vanligvis utført. Heri, brukte vi Cresyl fiolett farging siden det gir mulighet til å teste mange kritiske markører ved immunhistokjemi. I denne videoen, rapporterer vi MCAO prosedyre, nevrologiske score og evaluering av infarktvolum ved Cresyl fiolett farging.Ulike takts modellene er utviklet for å etterligne hjerneslag konsekvenser hos pasienter. Valget av den firetaktsmotor avhenger biologiske spørsmålet. Den intraluminal MCAO modellen etterligner en av de mest vanlige typer av iskemisk slag hos pasienter og er mindre invasiv og mer konsistent enn Tamura modellen 4,7. Det er en veldig interessant modell for neuroprotection, neurorepair og celledød analyser. Suksessen av intraluminal modellen avhenger av mange faktorer, slik som animalsk kjønn, alder og vekt, temperatur, anestesi og tidspunktet for kirurgi, som må bli kontrollert. De fysiske proprieties av sperreinnretningen (tips diameter, lengde, form og fexibility) er kritisk for konsistensen av MCAO 4. Heri, bruker vi 12 mm lange 6-0 monofilament belagt med silikon på 9-10 mm fra Doccol Corporation. Den store fordelen med denne monofilament er å redusere subaraknoidal blødninger og fordi dens lengde dekket alle ICAlengde, gjenværende blodstrøm, som kommer fra fremre og bakre kommunisere arteriene Circle of Willis og PPA, forhindres og variasjon i infarktvolum reduseres (15% av variasjonen i våre hender) 8. Sutur av CCA reduserer også variabiliteten i det infarktvolum 9.
Omfanget av hjerneskade følgende tMCAO kan vurderes ved forskjellige måter. Nevrologiske underskudd kan måles som tidligere nevnt. Imidlertid er det vanskelig å ha et effektivt tiltak ved denne måten. Omfanget av infarktet er ofte utført av TTC farging. Mer nylig, er magnetisk resonans teknikker også brukt, et spesielt interessant teknologi for neurobeskyttende behandlinger. For å forstå de underliggende cellulære mekanismene som er involvert i slag som neurorepair, celledød eller celleproliferasjon, er studiet av ulike markører ved immunhistokjemi kritisk og meget informativ. Dermed vår protocol av hjernen delen forberedelsene har den store fordelen at disse analysene, og reduserer antall mus som brukes. Videre Tureyen et al. Ti har rapportert at det er god korrelasjon mellom Cresyl fiolett flekker og TTC.
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble støttet av en CIHR TEAM stipend # 82946 CTP, en CIHR stipend # MOP 102741, samt en Canada stol # 216684 og en Strauss Foundation. ER ble støttet av et fellesskap fra den kanadiske Heart & Stroke Foundation.
Description | Company | Catalogue number |
Stereo microscope | Zeiss | Stemi 2000 |
Fiber-Light High Intensity Illuminator | Dolan-Jenner Industries Inc. | |
Anesthesia system for isoflurane | ||
Isoflurane | CDMV | 108737 |
Heating blanket | Gaymar Medsearch | TP22G |
Infrared heating lamp | ||
Ultra fine tweezers, style 5 | Electron Microscopy Sciences | 78320-5TI |
Vannas Scissors 3 mm Cutting Edge, Straight | Electron Microscopy Sciences | 72932-01 |
Style LA-1 and MPF-1 All smooth blades | Electron Microscopy Sciences | 77926-5S |
Negative action tweezers, style KOPINC 5 | Electron Microscopy Sciences | 72850-F |
Dissecting scissors 5 1/2″ Straight | Cedarlane | 72960 |
Autoclip starter set | Harvard apparatus | 34-0557 |
BD Autoclip Wound Closing Syst., 9mm long,100/pk | Fisher | 01-804-5 |
5-0 suture | Harvard apparatus | 517763 |
Suture material PDS II monofilament violet, 5-0, RB-1; Z303H | CDMV | 6167 |
12 mm-long 6-0 silicon-coated monofilament suture | Doccol Corporation | 60SPRePK5 |
Seringes 1ml | Fisher | 14-823-2F |
Needles 26G1/2 | Fisher | BD-305111 |
C57BL/6 mice | IRCM |