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Neuroscience

성인 쥐의 특정 두뇌 영역의 Excitotoxic 병변에 대한 Stereotaxic 외과

Published: July 19, 2012 doi: 10.3791/4079

Summary

stereotaxic 좌표를 사용하여 excitotoxin의 주입에 의한 특정 뇌 영역의 타겟으로 절제 (들)은 설명되어 있습니다. 이 기술은 또한 쥐의 두뇌로 다른 화학 물질의 주입을 위해 적응 수 있습니다.

Abstract

설치류 동물과 인간을 포함한 포유류에서 많은 행동 기능이 이산 뇌 영역에 의해 주로 매개된다. 행동이나 다른 실험 결과에 대한 다양한 뇌 영역의 안목 기능을위한 일반적인 방법은 함수의 지역화된 절제를 구현하는 것입니다. 인간에서 지역화된 뇌 병변과 환자 집단은 종종 손상된 영역의 기본적인 기능을 드러내는 희망으로 결손을 위해 공부하고 있습니다. 설치류에서, 하나는 실험적으로 특정 뇌 영역의 병변을 일으킬 수.

장애는 여러 가지 방법으로 수행할 수 있습니다. 전해 병변은화된 손상을 일으킬 수 있지만 세포 유형의 다양성뿐만 아니라 병변 사이트 가까이 될 일이 다른 뇌 영역에서 선법 섬유를 손상시킬 것이다. 셀 타입의 특정 발기인을 사용하여 유전자 기술은 또한 특정 사이트 타겟팅을 설정할 수 있습니다 Inducible. 이 기술은 대상 뇌의 영역에 따라 복잡하고 항상 실용적 아닙니다. Excitotstereotaxic 수술을 사용 oxic 병변은 대조적으로, 지역 glial 세포를 손상하거나 섬유 선법없이 흥분성의 뉴런을 lesioning 가장 신뢰할 수 있고 실용적인 방법 중 하나입니다.

여기서는 excitotoxin, basolateral 편도의 복합에 N-메틸-D-aspartate (NMDA)의 stereotaxic 주입을위한 프로토콜을 제시한다. 해부 학적 징후를 사용하여, 우리는 타겟 뇌 영역의 위치를​​ 확인하고 바로 목표 위 장소에 주사 바늘을 내리고 stereotaxic 좌표를 적용합니다. 그러면 인근 뉴런의 excitotoxic 죽음 그 결과 두뇌에 우리 excitotoxin을 불어 넣다. 선택이 우리의 실험 대상이 생쥐는 있지만, 같은 방법은 장비와 좌표에서 적절한 조정으로 다른 포유 동물에 적용할 수 있습니다.

이 방법은 basolateral 편도 1-6, 다른 편도의 핵 6, 7, 해마 8, 엔트 포함한 뇌 영역의 다양한 사용될 수 있습니다orhinal 피질 9 전두엽 피질 10. 그것은 또한 바이러스성 벡터 1, 11와 같은 생물 학적 화합물을 불어 넣다하는 데 사용할 수 있습니다. 기본 stereotaxic 기술은 또한 흥미 화합물에 더 오래 노출되어서 있도록 더 영구적인 삼투 펌프의 주입을 위해 적응 수 있습니다.

Protocol

마취 및 진통제 : 마취하기 전에 30 분 거리에 있으며, 진통제에 대한 0.05 밀리그램 / kg 피하 buprenorphine와 쥐 투입. 30-40 MG / kg intraperitoneal 나트륨 pentobarbital로 마취를 시작하라. 이 시점에서, 또한 (2 밀리그램 / kg 피하) 추가로 진통제로서 호흡 (0.4 밀리그램 / kg, 피하)와 meloxicam을 방지하기 위해 아트로 핀을 주사. 오분 후, 쥐 여전히 모바일 또는 발가락이 핀치에 반응하는 경우 쥐의 고통에 응답하지 않는 밀리그램 / kg (intraperitoneal)까지, 5시 pentobarbital 나트륨의 후속 투입을 제공합니다. 첫 절개를 수행하기 전에 국소 마취를 위해 절개 사이트에서 lidocaine을 (5 밀리그램 / kg, intradermal) 주사. 여섯 시간에서 여덟 시간 초기 주입 후 진통제를위한 0.05 밀리그램 / kg 피하 buprenorphine와 쥐 투입. 필요한 경우이 일반적으로 필요하지 않습니다하지만 Buprenorphine는 이후 모든 6~8시간을 주입 수 있습니다.

그것은주의하는 것이 중요하다 그 마취를 C 다른 형태의이 excitotoxic 병변을 방해. 케타민을은 설치류 동물의 마취 중 일반적으로 사용되는 형태입니다 비록 그것이 NMDA 수용체 길항제이기 때문에 예를 들어, 그것은 NMDA로 유도된 병변을 방해할 수 있습니다. 그것은 병변 크기를 줄일하지 않습니다 유도 마취의 방법을 선택하는 것이 중요합니다. 가스 마취가 원하는 경우, 여기에 설명된 내용을 포함하여 대부분의 stereotaxic 장치는 방독면 어댑터를 수용할 수 있습니다.

참고 : 재료는 특정 시약 아래 장비의 테이블에 추가로 설명되어 있습니다.

1. 펌프 및 Stereotax의 작성

  1. 멸균 물을 10 μl 해밀턴 주사기를 작성하고 6 주사기 프로그래머블 펌프의 캐디에 그 파일을 탑재합니다. 펌프에 채워 홀더에 주사기 플런저의 끝을 고정합니다.
  2. 미리 기입은 바늘 1 개 ML의 주사기를 사용하여 멸균 물을 PE20 튜브를 가스 소독. 치료되고, 해밀턴 주사기에 튜브의 열린 끝을 슬라이드튜브에 공기 방울을 만드는 피하기 위해 ful.
  3. 배럴 스타일의 전극을 사용하여 조작하는 사람 stereotaxic 장치의 팔에에 튜브의 30ga, 플랫 컷, 1 인치 주입 바늘 끝을 고정. 클램프 및 홈 붙이 총신 사이에 주입 바늘을 삽입합니다. 튜빙을 평평화 및 유체 흐름을 제한하지 않도록 그 안에서 금속 바늘이 들어있는 튜브의 조각 이상 클램프를 고정합니다.
  4. > 5 μl / 분으로 펌프 속도를 조절하고 펌프를 켜십시오. 물의 구슬은 주입 바늘의 끝에 나타납니다. 전혀 누수가 없는지 확인하기 위해 튜브와 관절의 길이를 확인합니다.
  5. 멸균 면봉으로 비드 물을 닦아하고 인출할 수있는 펌프를 설정합니다. 2 μl 공기 방울을 철회. 거품의 상단은 튜브에 표시해야합니다.
  6. 멸균 0.1M PBS에서 NMDA의 20 밀리그램 / ML 솔루션 주입 바늘 팁을 담가와 4-5 μl를 철회. 공기 방울은 멸균 물 NMDA 용액 사이에 볼 수 있어야팁 인치 그것은 NMDA가 적정량 neurotoxin이며,주의는이 솔루션의 준비와 처리에 사용되어야한다는 것을 유의하는 것이 중요합니다. 장갑 및 눈 보호는 항상 좋습니다.

2. Stereotaxic 장치에 생쥐를 탑재

  1. 그림 1은 stereotaxic 장치의 기본적인 부분을 묘사. 귀를로 눈의 라인에서 쥐의 머리를 면도 후, 쥐의 시체가 중간에 설정 손난로에서 휴식과 함께 물린 바 위에 쥐의 앞니를로드합니다. 혀가 아래턱과 함께 물린 표시줄 아래 교수형한다. 가능한 경우, 온도 피드백 가열 패드 바람직 것입니다. 직장 온도를 모니터링하면 이상적인 것입니다.
  2. 엄지와 집게손가락으로 쥐의 목을 잡고 오른쪽 귀에 표시줄에 오른쪽 수평 외이도를 이동합니다. 그것이 단단한 장소에서 쉬고있는 것처럼 표시줄이 느껴, 그것은 지금까지 머리 속에 침몰 없어 보이 네요. 머리의 오른쪽을 개최하는 것은 꾸준한, 왼쪽 귀에 밀어쥐의 왼쪽 수평 외이도로 바. 그것이 단단한 장소에서 쉬고있는 것처럼 느끼게한다. pinnae는 대칭보고해야하며 귀에 바 드러 거짓말이 나타납니다. 상향 pinnae의 나팔꽃 모양의 것은 귀에 막대의 부적 절한 배치를 나타냅니다. 머리는 목을의 압력에 대한 응답으로 동요해서는 안됩니다.
  3. 코 막대를 아래로 치고. 진정하세요. 코를 뼈가 섬세하고 코와 막대가 꽉 될 필요가 없습니다. 쥐가하기 전에 아직 anesthetized 있는지 확인합니다.

3. 수술 쥐 준비하기

  1. 멸균 면봉을 사용하여 부드럽게 건조 및 파편으로부터 그들을 보호하기 위해 쥐의 눈 각각에 수의학 안과 윤활 연고의 작은 금액을 넣으십시오.
  2. 집중적으로 면도 영역의 가장자리에 계획된 절개 사이트에서, 2 % chlorhexidine 솔루션 쥐의 두피를 닦아 70 % 에탄올 세 번 따라갔다. 보다 효과적인 살균제가 원하는 경우 Chlorhexidine 스크럽도 사용할 수 있습니다.10 % povidone의 요오드 용액으로 닦는으로 마침. 준비된 두피 이제 무균이며 전용 살균 재료와 접촉해야합니다.
  3. 자세한 단계 돈 멸균 장갑 당신이 다음 준비된 외과 사이트를 처리하기 때문입니다.
  4. fenestration은 외과 사이트를 노출하므로 무균 드레이프를 놓습니다.

4. 외과 창 만들기

  1. # 10 메스 블레이드 사용하여 두피의 종방향 중간선을 따라 절개를 (길이 약 2 ㎝)합니다. 절개는 눈의 라인에 대한 사후 시작합니다. 엄지와 비 지배적인 손의 집게손가락으로 절개의 방향으로 장력 직각으로 두피를 누르고 있습니다.
  2. 멸균 솜 팁을 사용하여 외과 사이트의 가장자리에 두개골 표면을 overlying 근막을 당겨. 그것을 볼 수 있도록 두개골을 취소한 일부 력을 취할 것입니다.
  3. 외과 창을 만드는 4 가지 곡선, 멸균 hemostats를 사용하십시오. EA의 클램프 근막 (NOT 피부)다음 채널 절개의 앞부분과 후부 측면 사이드하고이를 오픈 절개를 당기는 완전히 두개골을 노출, 동물과 함께 클램프를 바칩니다.

5. 두개골을 평평하게하고 파일럿 구멍 만들기

  1. bregma, 그림 2에 묘사된대로 두개골의 세 가지 주요 접시가 충족 앞부분 지점을 찾습니다. 바늘 끝 단지 bregma에서 두개골을 감동 있도록 주입 바늘을 이동합니다. 지느러미 - 복부 좌표. 그림 3은 Stoelting stereotaxic 장치의 좌표를 읽는 방법을 설명합니다. 참고이 시점에서, 장갑은 더 이상 무균 없습니다 직접 무균 수술 사이트를 만지지 않습니다. 참고 : nonsterile stereotaxic 장치를 만지 후 외과의가 더 이상 무균이지 않고 수술 현장이나 외과 사이트를 만질 것입 장비의 부품을 만지지 않습니다.
  2. depicte으로 람다, 두개골의 세 가지 주요 번호판을 충족 후부 포인트를 찾습니다그림 2에서 D. 약간 주입 바늘을 들고 똑바로 다시 람다로 이동합니다. 그냥 람다의 두개골을 감동 때까지 바늘을 낮춥니다. 지느러미 - 복부 좌표를 읽어보십시오. 두개골이 수준이면 bregma 읽는 중 0.1 mm 이내가 될 것입니다. 더 이상 오프 이것보다 경우 (비키) 바늘을 위쪽으로 이동, 다시 측정 후 코 표시줄을 느슨하게 역시 물린 바 플랫폼을 높이거나 낮출 어느 머리 끝이 너무 높은가에 따라합니다.
  3. bregma 통해 주입 바늘을 이동하고 앞부분 - 후부 및 중간 - 수평 좌표를 기록합니다. 니들이 뇌 아틀라스 12에 따라 관심있는 뇌 영역의 좌표를 기반으로 이동해야합니다 어디서 계산합니다. 즐 내용 앞부분 - 후부 좌표에서 2.8 mm를 뺀것하거나, 추가하거나 왼쪽 또는 오른쪽을 타겟팅할 여부에 따라 중간 - 측면 좌표에서 /로 5.1 mm를 뺍니다. 계산된 위치로 주입 바늘을 이동합니다.
  4. 옛 성은 좌우로그것이 위치한 장소에서 추적 후 첨부 멸균 치과 드릴 비트로 Dremel 모토 도구를 사용하여 해당 위치에 직경의 구멍을 약 2mm를 자세히 보려면​​ 돌보는 비키 dle. 드릴이 두개골을 뚫고 나옵 때 같이 신중하게 훈련을 하죠, 그것은 아마도 경질과 아래 뇌 조직을 손상, 풀다운하는 경향이 있습니다. 그것을 확대하기 위해 구멍을 넓히다.
  5. 멸균 면봉으로 어떤 피를 흡수.

6. Neurotoxin의 주입

  1. 바늘 다시 위치로 돌려. 그것이 두뇌의 표면을 만지는 때까지 바늘을 낮춥니다. 지느러미 - 복부 좌표를 기록합니다. 이것은 경질의 수준입니다. 관심있는 뇌 영역에 도달하기 위해 적절한 값을 뺍니다. basolateral 편도의 경우, 6.7 mm를 뺍니다.
  2. 천천히 계산된 수준으로 주입 바늘을 낮춥니다. 그런 다음 잘 두개골 위에 그것을 다시 올립니다. 조심하지 t으로되고, 주입 바늘의 팁을 unclog하기 위해 해밀턴 주사기 청소 와이어를 사용비 멸균 장갑과 주입 바늘과 접촉 철사의 끝을 아우.
  3. > 5 μl / 분에서 펌프를 실행하고 주입 바늘 나올 액체의 비드를 참조해야합니다. 그렇지 않으면 철사로 unclog하고 다시 시도하십시오.
  4. 천천히 원하는 복부 / 지느러미 수준으로 주입 바늘을 낮춥니다.
  5. 0.1 μl / 분들에게 주입 펌프의 속도를 설정하고 주입을 시작합니다. 2 분 동안 달이다.
  6. 주입이 시작되면 검은색 마커가있는 튜브에 공기 방울의 두 끝을 표시합니다. 양쪽으로 이동하지 않으면 바늘가 막혔어요. 주입을 중지, 와이어와 unclog, 바늘을 마련, 다시 낮출 바늘, 높은 유속과 흐름을 확인하고 다시 시도하십시오.
  7. 주입이 완료되면 펌프를 중지하고 바늘 끝에서 떨어져 주워 NMDA 5 분 정도 기다리십시오.
  8. 바늘 0.5 mm도 살리고, 1 분 동안 다시 달이다. 바늘 끝에서 떨어져 주워 NMDA 2.5 분 정도 기다립니다. 이 추가 주입 사람lps은 즐의 모든 주입에 의해 덮여 보장합니다. 이것은 다른 뇌 영역에 필요한이든 실험적으로 결정한다.
  9. 천천히 뇌 주사 바늘을 들고 길을 stereotaxic 팔을 밖으로 오세요.

7. 절개를 닫기

  1. 던 새로운 멸균 장갑 절개를 닫습니다.
  2. 멸균 솜 팁으로 두개골에 대한 여분의 피를 닦아 및 근막에서 클램프를 제거합니다.
  3. 런던 집게를 사용하여 함께 절개의 두 측면을 밀어. 피부의 안쪽 가장자리는 충족해야하며 피부의 바깥쪽 가장자리가 절개로 곱슬 곱슬하는 것은 허용하지 말아야합니다. 절개를 누르면 폐쇄하는 동안 단단히 돌출부를 닫습 상처 클립을 적용합니다. 절개의 길이를 따라 함께 피부와 스테이플을 눌러 계속. 이것은 보통 3-5 상처 클립 걸립니다.
  4. 모든 상처 클립을 배치 후, 그들이 안전한지 만들기, 다시 스테이플을 공략하기 위해 집게를 사용합니다. 더 안전 t그는 클립 절개가 치유되기 전에 적은 확률 쥐 그들을 당겨 것입니다.
  5. 면봉 10 % povidone의 요오드 솔루션 및 이동성이 (보통 1~2시간 마취 후, 유도 30-45 분되는 폐쇄까지 총 수술 시간) 복원되기 전까지는 가정 케이지와 모니터로 쥐를 반환로 잘라 절개. 이때 쥐가 식민지 실로 반환될 수 있습니다. 일주일 뒤에, isoflurane 마취하에 스테이플 리무버 도구 스테이플을 제거하십시오.
  6. 다음 쥐에서 사용하기 전에 모든 계기의 팁 표면이 멸균을 위해 고온 비드 살균기를 사용하십시오. 계측기는 더 이상 15 초 동안 비즈에 열중해야하거나, 그들이 처리하기에는 너무 멋져 될 수 있습니다. 다른 동물에 사용하기 전에 계측기가 완전히 냉각되어야한다.

8. 회복

  1. 그것은 쥐가는 병변에 따라 일 이내에 발작 활동을 나타내는 것이 가능합니다. 두뇌 지역에서 이와 같은 식품 소비 또는 촉진제와 같은 손상된 다른 행동을 따라oming가 영향을받을 수 있습니다. 그것은 동물들이 회복 기간 동안 건강하게 유지되도록하기 위해 매일 모니터링하는 것이 중요합니다. 같은 액체 음식, 높은 칼로리 음식, 또는 추가적인 진통제와 같은지지 치료가 필요할 수 있습니다. 마취로 인한 사망률은 5 %보다 일반적으로 더 적은 쥐의 낮은 비율로 발생합니다. 다른 원인에 의한 사망률은 (감염, 출혈) 극히 드뭅니다. 마취 회복 후 조난당한 흔적은 향후 연구에서 제외할 원인이 있지만, 극히 드문 있습니다. 그것이 예상대로 그림 4는 수술 다음 처음 며칠 동안 체중 감소를 묘사 수 있습니다. 체중은 1 주일 이내에 반동한다.

9. 대표 결과

일주일 이상 NMDA 주입 후 병변은 cresyl-보라색 counterstain 및 brightfield 현미경을 사용하여 시각이 될 수 있습니다. 두뇌는 0.1M PBS와 froz 30 %의 자당에 equilibrated 얼음 차가운 4 % paraformaldehyde로 perfused한다ko 페이지를 참조하십시오. 그들은 그때 1시 6분부터 1시 12분까지 일련의에 30-60 μm의에서 슬라이스와 표준 cresyl 바이올렛 counterstain을 진행하기 전에 젤라틴 코팅 유리 슬라이드에 장착해야합니다. 병변은 "대머리"또는 병변에 따라 세포 사망으로 인한 얼룩을 감소 cresyl 보라색의 영역에 해당한다. 인물 5A와 B가 어쩌구와 CEA의 대표 병변을 보여줍니다. 이 영상은 고해상도 스캔 (1200 DPI)와 평판 스캐너를 사용하여 얻은 것입니다. 병변을 시각화하기 위해서는 잃어버린 병변을 찾을 수 있도록 대상 지역을 둘러싸고있는 조직의 많은 부분을 통해 일련의 counterstain하는 데 도움이됩니다.

그림 1
1 그림. Stereotaxic 설정.이 그림은 분류와 관련된 부분의 쥐 stereotaxic를 보여줍니다.

그림 2
그림 2. 쥐 SKU에 Bregma와 람다하겠습니다.이 그림은 bregma와 람다의 위치를 묘사. 모든 좌표는 bregma에 상대적으로 측정합니다. 람다는 두개골 수준인지 확인하는 데 사용됩니다.

그림 3
그림 3. stereotaxic 좌표를 읽음으로써.이 그림은 표준 stereotaxic 반응을 보이는 모습. 소수점 자리의 왼쪽에 자리를 얻으려면 오른쪽에있는 마커를 사용합니다. 표시된 숫자는 수만 장소 (= 10, 2 = 20 즉, 1)에 해당합니다. 표시된 숫자 사이의 해시 자국은 하나의 단위 (1-9)에 해당합니다. 제로 라인 stereotax가 설정되는 정수로 나타냅니다. 여기 제로 라인 읽기 10과 11 사이에 나타내는, 10 및 11 마커 사이입니다. 소수점 자리의 오른쪽에있는 숫자를 확인하려면 왼쪽에있는 마커를 사용합니다. 왼쪽의 해쉬 표식이에서 한 단위 차이를 나타내는 각각의 레이블이 지정되지 않은 해시와 함께 0으로 10 숫자로 표시되어거기에 그 옆에. 오른쪽 해시 부호 최고 최대의 왼쪽 라인에서 해시 마크의 제일 좌표 판독의 첫 소수점 자리를 나타냅니다. 여기서 숫자 오른쪽 해시 부호 최고 최대 9 줄의 왼쪽 대응에 대한 해시 마크는 소수점 자리는 9하도록합니다. 마지막 독서는 10.9 mm입니다.

그림 4
4 그림. 수술 후 체중 변화.이 그래프는 stereotaxic 수술을 받았습니다 쥐 (N = 17)의 평균 (± SEM)에 무게를 보여주는 또는 (N = 6) 수술을하지 않았습니다. 데이 0 외과 날입니다. 수술 후, 쥐의 무게는 수술 후 2-3 일동안은 감소 후 5-6 일 주위에 증가했다.

그림 5
그림 5. Excitotoxic 병변 예제.)이 이미지는 cresyl 보라색가 "대머리와 30 μm의 코로나 슬라이스에 counterstain 보여줍니다basolateral 편도의 NMDA 병변의 자리는 ". 흰색 화살표가 병변을 설명합니다. 그것이 더 병변 중심 핵 편도니다. B)과 유사한 병변이없는 뇌 슬라이스의 contralateral 옆으로 비교할 수 있습니다.

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Discussion

여기서 제시 stereotaxic 방법은 NMDA의 주입을 통해 특정 뇌 영역의 excitotoxic 병변을 허용합니다. 기본 stereotaxic 방법은 사이트에 특정한 방식으로 pharmacological 및 생물 학적 에이전트 다양한 달이다하기 위해 적용할 수 있습니다. 또한 뇌 아틀라스 12 그들 stereotaxic 좌표에 의해 정의된 뇌 영역의 다양을 대상으로 적용할 수 있습니다. 같은 생쥐 등 다른 수종에 대한 적응은 작은 동물을 위해 만들어진 유사한 장비를 만들 수 있습니다. 현재의 절차 3 MO 옛 성인 쥐에 최적화된,하지만 그들은 오래된 성인을 통해 아동의 연령의 다양한 사용될 수 있습니다. 표준 뇌 아틀라스에 표시되지 않을 수 있습니다 어린 동물들과 일하면, 형형색색의 염료가 기적을 탐험 수술은 경험적으로 적절한 바늘 위치를 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다.

stereotaxic 수술, 가이 외를 사용하여 정맥의 장기 이식을 필요로 수사하십시오. 13 P적절한 절개 폐쇄 및 보도 지침과 대안 프로토콜을 원망. 작은 뇌 영역을 대상으로하는 것은 원하는 경우, 그러나, 그것은 현재 프로토콜 stereotaxic 장치의 헤드 배치 및 평준화에 대한 더 정확한 방법을 제공하는 것을인지해야합니다. 현재의 프로토콜은 또한 즐과 같은 측면 구조물을 대상으로했을 때 종종 필요한 넓은 수술 창 수 있도록 방법을 클램핑 절개를 제공합니다.

체중 감량이 동물을 통제하기 위해, 수술과 비교를 준수하면 정상이고 예상된다. 그림 4은 같은 일대에서 unmanipulated 컨트롤에 비해 수술을 받았습니다 성인 남성 쥐의 체중의 변화를 보여줍니다. 쥐은 5-6일 후 다시 체중이 늘거나 시작 후 수술 후 첫 2-3 일동안은 체중 감소를 보여 주며 기대 할 수 있습니다. 더 장시간 체중 감소는 감염이나 다른 문제를 나타낼 수 있습니다.

가끔 쥐는 상처 클립을 제거합니다. 만약 절개의 H나음으로,이 문제를 표시하지 않습니다. 절개가 치유와 오픈하지 않은 경우 상처 클립이 다른 클립이나 isoflurane 마취하에 수행할 수 있습니다 둘 다 봉합과 하나 교체해야합니다. 상처가 환경에 열려 있었다면 향후 5 일 동안 식수에서 항생제 (80-96 밀리그램 트리 메소 외상 치료 / ㎏ / 일, 240 밀리그램 / 5 ML 물)를 포함하면 감염을 예방하는 것이 좋습니다 수도 있습니다.

아마도이 프로토콜의 가장 어려운 부분은 귀에 막대의 위치입니다. 즉각적인 희생 뒤에 염료 주입과 실험적 수술은 귀 바 배치 및 선택된 stereotaxic 좌표 모두의 정확성을 확인하는 것이 좋습니다. 타겟이 될 수있는 뇌 영역이 중간선에 있으면, 우리는 중간선의 큰 혈관이 직접 중간선에 접근을 방지 수있는 두뇌의 양쪽에서 직각 접근법을 사용하는 것이 좋습니다.

가능한뿐만 아니라 수행하더라도, stereotaxic 쉬르gery 아직도 무거운 진통제하고 anesthetics에 대한 노출, 조직 손상과 면역 반응을 알아볼 수 있습니다. 이러한 모든 요소가 수술 시간에 특히 가까운 실험 결과를, 영향을 줄 수 있습니다. 수술의 부작용은 실험 절차를 시작하기 전에 충분한 회복 시간 (최소한 하나 주)에 대한 허용하여 최소화 할 수 있습니다. 이러한 타겟 유전자 knockouts와 같은 다른 접근법은 생쥐에서 수도 있지만 훨씬 더 복잡 stereotaxic 수술보다는 될 수 있습니다.

요약에서 설명하는 방법은 지나가는 섬유를 손상시키지 않고 뇌 영역의 지역화된 병변을 허용합니다. 그것은 다양한 목적을 위해 적응과 높은 신뢰성 그리고 증명할 수있다.

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Disclosures

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

Acknowledgments

이 작품은 나중에이 predoctoral 교제 (EDK), NARSAD 젊은 탐정 수상 (디케이)와 NIMH의 두뇌 보너스 (R01MH087495) (디케이)가 CIRM 지원되었다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
N-Methyl-D-aspartic Acid 98% Fisher Scientific AC32919-0500
Dual Lab Standard Stereotaxic w/45 deg. Ear Bars Stoelting 51653 Alternative vendor: Kopf *note of caution: assure compatibility of stereotaxic accessories if purchasing from multiple vendors
10μl SYR SPECIAL (*/*/*) Hamilton 701SN
Dremel Moto-Tool Stoelting 58600 Alternative vendor: Kopf
Carbide burs, handpiece HP, size 2 Schein Dental 2284578
St–lting 6 Syringe Programmable Pump Stoelting 53140 Alternative vendor: Kopf
Stainless Steel 316 Hypodermic Regular Wall Tubing 30 Gauge .0123" OD x .00625" ID x .003" Wall (infusion needle) Small Parts HTXX-30R-06-05
Intramedic PE 20 tubing (infusion tubing) VWR 63019-025
Reflex Clips, 9mm, non-sterile Kent Scientific Corp. INS500346 Alternative vendor: Fine Science Tools
Reflex Clip Applier for 9mm clips Kent Scientific Corp. 12031-09 Alternative vendor: Fine Science Tools
Curved Hartman hemostat Fine Science Tools 13003-10
London forceps Fine Sceince Tools 11080-02
2% chlorhexidine solution Allivet 30159 Alternative vendor: PetSolutions
10% povidone iodine solution CVS SKU #739575
Hot bead sterilizer Harvard Apparatus 610183

Table 1. Table of specific reagents and equipment.

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References

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신경 과학 이슈 65 의학 생리학 stereotaxic excitotoxic 병변 NMDA stereotactic 수술
성인 쥐의 특정 두뇌 영역의 Excitotoxic 병변에 대한 Stereotaxic 외과
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Kirby, E. D., Jensen, K., Goosens,More

Kirby, E. D., Jensen, K., Goosens, K. A., Kaufer, D. Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat. J. Vis. Exp. (65), e4079, doi:10.3791/4079 (2012).

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