Summary
Gerichte ablatie van specifieke gebied van de hersenen (en) via een infuus van een excitotoxin gebruik van stereotaxische coördinaten beschreven. Deze techniek kan ook worden aangepast voor infusie van andere stoffen in de rat.
Abstract
Veel gedrags-functies in zoogdieren, waaronder knaagdieren en mensen, worden hoofdzakelijk gemedieerd door discrete gebieden van de hersenen. Een veelgebruikte methode voor het onderscheiden van de functie van verschillende hersengebieden voor het gedrag of andere experimentele resultaten is het implementeren van een gelokaliseerde ablatie van de functie. Bij de mens zijn patiëntenpopulaties met gelokaliseerde laesies in de hersenen vaak bestudeerd van tekorten, in de hoop van het openbaren van de onderliggende functie van het beschadigde gebied. Bij knaagdieren, kan men experimenteel veroorzaken laesies van specifieke hersengebieden.
Laesie kan op verschillende manieren. Elektrolytische laesies kunnen leiden tot lokale schade, maar zal een groot aantal celtypen en doorkruisen van vezels van andere hersengebieden die toevallig in de buurt van de laesie zullen beschadigen. Induceerbaar genetische technieken met behulp van cel-type-specifieke promotors kunnen ook in staat stellen site-specifieke targeting. Deze technieken zijn complex en niet praktisch afhankelijk van het doel hersengebied. Excitotoxische laesie met behulp van stereotaxische chirurgie, daarentegen, is een van de meest betrouwbare en praktische methoden van lesionele excitatoire neuronen zonder beschadiging van de lokale gliacellen of doorkruisen van vezels.
Hier presenteren we een protocol voor stereotaxische infusie van de excitotoxinen, N-methyl-D-aspartaat (NMDA), in de basolaterale amygdala complex. Met behulp van anatomische aanwijzingen, passen we stereotaxische coördinaten van de locatie van onze doelgroep gebied van de hersenen vast te stellen en laat een injectienaald in de plaats net boven het doel. Vervolgens hebben we trekken onze excitotoxin in de hersenen, wat resulteert in excitotoxische dood van de nabijgelegen neuronen. Terwijl onze proefpersoon keuze een rat, kan dezelfde methoden worden toegepast op andere zoogdieren, met de noodzakelijke aanpassingen apparatuur en coördinaten.
Deze methode kan worden toegepast op verschillende hersenen, waaronder de basolaterale amygdala 1-6 andere amygdala kernen 6, 7, 8 hippocampus, entorhinal cortex 9 en prefrontale cortex 10. Het kan ook worden gebruikt om biologische verbindingen zoals virale vectoren 1, 11 trekken. De basis stereotaxisch techniek kan worden aangepast voor implantatie van meer permanente osmotische pompen, waardoor meer langdurige blootstelling aan een verbinding van belang.
Protocol
Anesthesie en analgesie: Dertig minuten voor anesthesie, injecteren de rat met 0,05 mg / kg subcutaan buprenorfine voor pijnstilling. Start anesthesie met 30-40 mg / kg intraperitoneaal natriumpentobarbital. Op dit punt ook injecteren atropine de ademhaling (0,4 mg / kg, subcutaan) en meloxicam voorkomen verdere analgetica (2 mg / kg subcutaan). Als na 5 minuten, de rat is nog steeds mobiel of reageren op teen knijpen, geven volgende doses van natrium-pentobarbital bij 5 mg / kg (intraperitoneaal) totdat de rat niet reageert op pijn. Voordat de eerste insnijding injecteren lidocaïne (5 mg / kg, intradermale) op de incisie lokale verdoving. Zes tot acht uur na de eerste injectie, injecteren de rat met 0,05 mg / kg subcutaan buprenorfine voor pijnstilling. Buprenorfine worden geïnjecteerd om 6-8 uur daarna indien nodig, hoewel dit gewoonlijk niet nodig.
Het is belangrijk op te merken dat andere vormen van anesthesie ceen interfereren met excitotoxische laesies. Bijvoorbeeld, hoewel ketamine is een veelgebruikte vorm van anesthesie bij knaagdieren, kan het interfereren met laesies geïnduceerd met NMDA want het is een NMDA receptor antagonist. Het is belangrijk om een werkwijze voor het induceren anesthesie die niet beperkt laesies. Als gas verdoving gewenst is, kunnen de meeste stereotaxische apparaten, waaronder de hier beschreven geschikt gasmasker adapters.
Opmerking: Het materiaal wordt verder beschreven in de tabel specifieke reagentia en materialen hieronder.
1. Voorbereiding van de pomp en Stereotax
- Vul een 10 pl Hamilton spuit met steriel water en monteer deze in de caddy van een 6 spuit programmeerbare pomp. Zet het einde van de zuiger in de houder geklemd op de pomp.
- Uitvullen gas-gesteriliseerde PE20 buis met steriel water met behulp van een naald en een 1 ml spuit. Schuif het open uiteinde van de slang op de Hamilton spuit, die zorgful te voorkomen dat eventuele luchtbellen in de buis.
- Klem de 30ga, flat-cut, 1 inch infuusnaald uiteinde van de slang op de arm van een stereotaxische apparaat met behulp van een vat-stijl elektrode manipulator. Breng de infuusnaald tussen de klem en de gegroefde vat. Zet de klem over een stuk van de slang met metalen naald in zich om te voorkomen dat het afvlakken van de slang en het beperken van de stroming.
- Stel de pomp tarief voor> 5 pl / min en zet de pomp. Een strook water moeten verschijnen aan het uiteinde van de infusie naald. Controleer de lengte van de slang en de gewrichten om te controleren of er geen lekken zijn.
- Veeg het water kraal met een steriel doekje en zet de pomp terug te trekken. Trek een 2 pl luchtbel. De bovenkant van de bel zichtbaar zijn in de slang.
- Dompel de infuus naald in een 20 mg / ml oplossing van NMDA in steriele 0,1 M PBS en trekken 4-5 pl. Een luchtbel zichtbaar moet zijn tussen het steriele water en de NMDA-oplossingin de punt. Het is belangrijk op te merken dat NMDA is een krachtige neurotoxine en moet voorzichtigheid worden gebruikt bij de bereiding en behandeling van deze oplossing. Handschoenen en oogbescherming wordt aangeraden te allen tijde.
2. Monteer de Rat in de stereotaxische Device
- Figuur 1 toont de onderdelen van de inrichting stereotaxisch. Na het scheren van de rat het hoofd van de lijn van de ogen tot de oren, laadt u de rat voortanden over de beet bar, met de rat het lichaam rusten op een verwarmingselement ingesteld op medium. De tong moet hangen onder de beet bar, met de onderkaak. Indien beschikbaar, zou een temperatuur feedback verwarmingskussen de voorkeur. Monitoring rectale temperatuur zou ook ideaal zijn.
- Houd de rat de nek met duim en wijsvinger, verplaatst u de juiste horizontale gehoorgang op het rechter oor bar. De bar moet het gevoel dat het rust op een vaste plaats, niet zoals het zakt tot ver in het hoofd. Houd de rechterkant van het hoofd stil, schuift u het linker oorbar in de linker van de rat horizontale gehoorgang. Het moet het gevoel dat het rust op een vaste plaats. De oorschelpen moeten kijken symmetrisch, en moet plat te blijven liggen op het oor bars. Opwaartse affakkelen van oorschelpen geeft onjuiste plaatsing van het oor bars. De hoofd mag niet wiebelen onder druk in de hals.
- Schroef de neus bar. Wees lief. De botten in de neus zijn kwetsbaar en de neus bar hoeft niet te krap. Controleer of de rat nog steeds onder narcose is alvorens verder te gaan.
3. Voorbereiden van de Rat voor Heelkunde
- Met behulp van een steriel wattenstokje, plaats voorzichtig een kleine hoeveelheid van veterinaire oogheelkundige smeer zalf in elk van de ogen van de rat om hen te beschermen tegen uitdroging en vuil.
- Concentrisch van de geplande incisie de rand van de geschoren gebied van de rat hoofdhuid af met 2% chloorhexidine oplossing gevolgd 70% ethanol driemaal. Chloorhexidine scrub kan ook worden gebruikt indien meer effectieve stof wordt gewenst.Werk af door af te vegen met 10% povidon-jood oplossing. De bereide hoofdhuid is nu steriel en mag alleen worden aangeraakt met steriele materialen.
- Don steriele handschoenen voor verdere stappen, omdat je naast te gaan met de voorbereide chirurgische site.
- Plaats een steriel laken, zodat de fenestratie de operatiewond blootstelt.
4. Het creëren van de Chirurgische venster
- Met behulp van een # 10 scalpel, maak dan een incisie (ongeveer 2 cm lang) langs de longitudinale middellijn van de hoofdhuid. De incisie moet beginnen posterior aan de lijn van de ogen. Met de duim en wijsvinger van de niet-dominante hand de hoofdhuid spanning loodrecht op de richting van de insnijding.
- Trek de fascia bovenop de schedel ondergrond om de randen van de operatiewond met steriele katoenen-tips. Het zal enige kracht om de schedel te verwijderen zodat het kan worden bekeken.
- Gebruik vier gebogen, steriele hemostats een chirurgische venster te maken. Klem fascia (NIET huid) op EAch zijde van de voorste en achterste aspecten van de insnijding en de klemmen liggen naast het dier, leidt ertoe dat de insnijding open en volledig blootstellen van de schedel.
5. Het nivelleren van de Schedel en creëren van de Pilot Hole
- Plaats bregma, de voorste punt waar de drie platen van de schedel voldoen, zoals in figuur 2. Verplaats de infuusnaald, zodat de naald net raakt de schedel bij bregma. Let op de rug-buik-coördinaat. Figuur 3 laat zien hoe om te lezen de coördinaten op een Stoelting stereotaxische apparaat. Let op, op dit punt, handschoenen niet langer steriel en moet niet direct contact met de steriele operatie site. Opmerking: Na het aanraken van de niet-steriele stereotaxische apparaat, de chirurg is niet langer steriel en mag niet in aanraking de operatiewond, noch onderdelen van apparatuur die de operatiewond zal raken.
- Zoek lambda, de achterste punt waar de drie belangrijkste platen van de schedel te voldoen, zoals depicted in figuur 2. Iets optillen van de infuusnaald en verplaats het rechtstreeks terug naar lambda. Zet de naald omlaag totdat het net raakt de schedel bij lambda. Lees de rug-buik coördinaat. Als de schedel niveau zal het binnen 0,1 mm van de bregma lezen. Als het verder weg is dan dit, zet de naald omhoog (uit de weg), maak de neus bar, hetzij verhogen of verlagen de beet bar platform, afhankelijk van welke kant van het hoofd is te hoog, en dan re-maatregel.
- Beweeg de infuusnaald op bregma en noteer de anterior-posterior en de mediale-laterale coördinaten. Bereken waarbij de naald moet worden verplaatst op de coördinaten van de hersenen interessegebied volgens hersenen atlas 12. Voor de BLA, aftrekken 2,8 mm van de anterior-posterior coördinaat en een optellen of aftrekken 5,1 mm naar / van de mediale-laterale coördinaat, afhankelijk van of u links of rechts richten. Verplaats de infuusnaald met de berekende positie.
- Draai de neeleenheid uit de weg, en zorg bij te houden waar deze zich bevond en boor een opening van ongeveer 2 mm in diameter in die locatie met behulp van een Dremel Moto-tool met een steriele tandheelkundige bevestigd boor. Boor zorgvuldig bij het boren door de schedel, zal het de neiging om pull-down, met beschadiging van het dura-en hersenweefsel eronder. Pak het gat om het te vergroten.
- Absorberen bloed met een steriel wattenstaafje.
6. Infusie van neurotoxine
- Draai de naald terug op zijn plaats. Zet de naald omlaag totdat deze het oppervlak van de hersenen. Noteer de rug-buik coördinaat. Dit is het niveau van de dura. Trek de juiste waarde aan de hersenen regio van belang te bereiken. Voor de basolaterale amygdala, trekt 6,7 mm.
- Laat de infuusnaald om het berekende niveau langzaam. Til het back-up, ruim boven de schedel. Gebruik een Hamilton spuit reiniging draad aan het uiteinde van de infuusnaald ontstoppen, dat evenwel niet tot tOuch het einde van de draad die in contact komt met de infuusnaald met niet-steriele handschoenen.
- Laat de pomp bij> 5 pl / min en zorg ervoor dat je een parel van de vloeistof naar buiten komen van de infuusnaald. Zo niet, ontstoppen met de draad en probeer het opnieuw.
- Laat de infuusnaald om de gewenste dorsale / ventrale niveau langzaam.
- Stel de rente op de infusiepomp tot 0,1 pl / min en start de infusie. Infuus gedurende 2 minuten.
- Zodra de infusie is gestart, teken de twee uiteinden van de luchtbel in de slang met een zwarte stift. Als beide uiteinden niet bewegen, is uw naald verstopt. Stop de infusie, de naald omhoog, ontstoppen met de draad, te controleren op stroom met een hoog debiet, opnieuw verlagen van de naald en probeer het opnieuw.
- Zodra de infusie is voltooid, stopt de pomp en wacht 5 min voor de NMDA om weg te diffunderen van de naald komt.
- Zet de naald 0,5 mm, en trekken opnieuw gedurende 1 minuut. Wacht 2,5 min voor de NMDA om weg te diffunderen van de naald-tip. Deze extra infuus hijLPS zorgen dat alle van de BLA wordt gedekt door de infusie. Of dit nodig is voor andere gebieden van de hersenen moet experimenteel bepaald.
- Zet de naald uit de hersenen langzaam en draai de stereotaxische arm uit de weg.
7. Het sluiten van de incisie
- Don nieuwe steriele handschoenen om de incisie te sluiten.
- Veeg het teveel aan bloed op de schedel met een steriele katoen-tips en verwijder de klemmen van de fascia.
- Met behulp van Londen tang, samen duw de twee kanten van de incisie. De binnenranden van de huid te voldoen en de buitenrand van de huid niet toegestaan te krullen in de incisie. Terwijl u de incisie gesloten, van toepassing wond clips om het uitsteeksel stevig te sluiten. Verdere de huid samen en nieten druk langs de lengte van de incisie. Dit duurt gewoonlijk 3-5 wond clips.
- Na het plaatsen van de wond clips, gebruik dan de tang weer knijpen de nietjes, zorg ervoor dat ze veilig zijn. De veiliger thij bevat, zullen de minder waarschijnlijk een rat trekt ze uit voor de incisie is genezen.
- Swab de geniete incisie met 10% povidonjood oplossing en terug de rat aan zijn kooi en de monitor tot de mobiliteit wordt hersteld (meestal 1-2 uur na de anesthesie, de totale operatie de tijd van de inductie van de sluiting wordt 30-45 min.). Op dit punt kan de rat worden teruggegeven aan de kolonie kamer. Na een week te verwijderen nietjes met een ontnieter hulpmiddel onder isofluraananesthesie.
- Gebruik een hete kraal sterilisator tot aan de punt oppervlakken van alle instrumenten te steriliseren voor gebruik op de volgende rat. Instrumenten dienen te worden ondergedompeld in de kralen niet langer dan 15 seconden, of ze kunnen worden te warm kan worden. Instrumenten moeten volledig worden gekoeld eerder gebruikt bij een ander dier.
8. Herstel
- Het is mogelijk dat ratten zullen epileptische activiteit vertonen in de dagen na het letsel. Afhankelijk van het hersengebied beschadigd, andere gedrag, zoals voedselconsumptie of groensen kan worden beïnvloed. Het is belangrijk dat de dieren worden gecontroleerd op een dagelijkse basis zodat ze gezond blijven gedurende herstel. Ondersteunende zorg, zoals vloeibaar voedsel, calorierijke voeding, of extra pijnstilling nodig zijn. Sterfte door anesthesie optreedt in een laag percentage ratten, gewoonlijk minder dan 5%. De sterfte door andere oorzaken (infectie, bloedingen) is uiterst zeldzaam. Alle tekenen van angst na herstel van de anesthesie kan worden voor uitsluiting van toekomstige studies, maar zijn uiterst zeldzaam. Figuur 4 geeft het gewichtsverlies tijdens de eerste paar dagen na de ingreep zoals het zou moeten worden verwacht. Het lichaamsgewicht moet rebound binnen 1 week.
9. Representatieve resultaten
Een week of langer na het NMDA-infusie, kan de laesie worden gevisualiseerd met behulp van een cresyl-violet tegenkleuring en helderveld microscopie. Hersenen worden geperfuseerd met ijskoude 4% paraformaldehyde, geëquilibreerd in 30% sucrose in 0,1 M PBS en ingevrorenen. Vervolgens dient te worden gesneden op 30-60 pm, in een reeks van 1:06-1:12 en gemonteerd op gelatine beklede glaasjes voor het ondergaan van een standaard cresyl violet tegenkleuring. Het letsel moet overeenkomen met een "kale plek" of een gebied van verminderde cresyl violet vlekken als gevolg van celdood na laesie. Figuren 5A en B tonen een vertegenwoordiger laesie van de BLA en CEA. Dit beeld werd verkregen met behulp van een flatbed-scanner met een hoge resolutie scan (1200 dpi). Om te visualiseren de laesie, het helpt om een reeks van secties tegenkleuring door een groot deel van het weefsel rondom het doelgebied dus een misplaatste laesie kan worden geplaatst.
Figuur 1. Stereotaxische setup. Deze figuur toont de rat stereotaxische met gelabelde relevante delen.
Figuur 2. Bregma en lambda op de rat skull. Deze illustratie toont de locaties van bregma en lambda. Alle coördinaten worden ten opzichte van bregma gemeten. Lambda wordt ervoor gezorgd dat de schedel niveau.
Figuur 3. Het lezen van stereotaxische coördinaten. Deze tekening geeft een standaard stereotaxische lezen. Om de cijfers verkrijgen links van de komma, met de merkers aan de rechterkant. De gelabelde cijfer komt overeen met de tientallen plaats (dat wil zeggen 1 = 10, 2 = 20). De streepjes tussen de gelabelde cijfers komen overeen met de afzonderlijke eenheden (1-9). De nullijn geeft aan op welk getal de stereotax is ingesteld. Hier de nullijn tussen 10 en 11 markers, aangeeft dat de meting tussen 10 en 11. Om de nummers te bepalen aan de rechterkant van het cijfer achter de komma, gebruik maken van de markers aan de linkerkant. De streepjes aan de linkerkant zijn genummerd van 0 tot 10, waarbij elk gemerkte hash die een eenheid verschildie ernaast. Welke van de streepjes op de linker lijn staat het beste met de streepjes aan de rechterkant geeft de eerste decimaal van het coördinaat lezen. Hier is het hekje aan de linkerkant die overeenkomt met nummer 9 lijnen tot beste met de rechter-kant streepjes zodat het cijfer achter de komma is 9. De definitieve uitslag is 10,9 mm.
Figuur 4. Verandering in gewicht na de operatie. Deze grafiek toont de gemiddelde (± SEM) gewicht van de ratten bij wie een stereotaxische chirurgie (n = 17) of hadden geen chirurgie (n = 6). Dag 0 is de dag van de operatie. Na een operatie, het gewicht van de ratten af voor 2-3 dagen na de operatie en steeg vervolgens rond dag 5-6.
Figuur 5. Excitotoxische laesie voorbeeld. A) Dit beeld toont een cresyl violet op een 30 micrometer coronale slice tegenkleuring met de "kalespot "van de NMDA-laesie van de basolaterale amygdala. De witte pijlen een overzicht van de laesie. Het kan worden vergeleken met de contralaterale zijde van de hersenen slice die geen letsel. B) Een soortgelijke laesie van de centrale kern amygdala heeft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De stereotaxische methode hier gepresenteerde maakt excitotoxische laesie van specifieke hersengebieden via infusie van NMDA. De basis stereotaxisch methoden kunnen worden aangepast aan diverse farmacologische en biologische agentia trekken in een plaatsspecifieke wijze. Het kan ook worden aangepast aan verschillende hersengebieden, gedefinieerd door hun stereotaxisch coördinaten in de hersenen Atlas 12 gericht. Aanpassing aan andere soorten, zoals muizen zijn met soortgelijke apparatuur gebouwd kleinere dieren. De huidige procedures zijn geoptimaliseerd voor 3 mo oude volwassen ratten, maar ze kunnen worden gebruikt voor een verscheidenheid aan leeftijden van jongeren door oudere volwassenen. Als het werken met jonge dieren die niet kunnen worden weergegeven in een standaard hersenen atlas, kan verkennende operaties inbrengen van een kleurrijk kleurstof helpen empirisch vast te stellen de juiste plaatsing van de naald.
Voor onderzoekers die behoefte hebben aan langdurige implantatie van een canule met behulp van stereotaxische chirurgie, Geiger et al.. 13 phekel aan een alternatief protocol met de juiste incisie sluiting en nazorg instructies. Als richten op kleinere gebieden van de hersenen gewenst is, moet echter worden opgemerkt dat het huidige protocol meer precieze methoden voor het hoofd plaatsing en nivellering in de stereotaxische apparaat biedt. Het huidige protocol biedt ook incisie klemmen methoden die het mogelijk maken voor een breder chirurgische venster, vaak nodig wanneer de doelgroep laterale structuren zoals de BLA.
Na de operatie, gewichtsverlies in vergelijking met dieren te controleren is normaal en te verwachten. Figuur 4 toont de verandering in gewicht van de volwassen mannelijke ratten die een operatie ondergaan ten opzichte van ongemanipuleerde controles uit dezelfde cohort. Ratten kan worden verwacht dat gewichtsverlies te tonen voor de eerste 2-3 dagen na de operatie en dan weer beginnen te verdikken na 5-6 dagen. Meer langdurig gewichtsverlies kunnen wijzen op infectie of andere problemen.
Af en toe zal een rat verwijder de wond clips. Indien de insnijding hals genezen, is dit geen probleem. Indien de snede niet genezen en open is, moet de wond clip vervangen of een andere klem of hechtingen, die beide kunnen worden uitgevoerd isofluraananesthesie. Met inbegrip van antibiotica (80-96 mg trimethoprim sulfa / kg / dag, 240 mg / 5 ml water) in het drinkwater voor de komende 5 dagen kunnen ook aan te raden om infectie te voorkomen als de wond open was voor het milieu.
Misschien wel het meest uitdagende aspect van dit protocol is de plaatsing van het oor bars. Experimentele operaties met kleurstof infusie gevolgd door onmiddellijke offer wordt aanbevolen om de nauwkeurigheid van zowel het oor bar plaatsing en de geselecteerde stereotaxische coördinaten te controleren. Als de hersenen regio gericht is in de middellijn, raden wij u aan een schuine benadering van beide kanten van de hersenen als grote bloedvaten in de middellijn een directe middellijn aanpak te voorkomen.
Zelfs wanneer zo goed mogelijk uitgevoerd stereotaxisch surGery houdt nog steeds zware blootstelling aan analgetica en anesthetica, beschadiging van het weefsel en de immuunrespons. Al deze factoren van invloed kunnen zijn experimentele resultaten, met name dicht bij het moment van de operatie. Bijwerkingen van chirurgie kan worden geminimaliseerd door toe te staan voor voldoende hersteltijd (ten minste een week) voor het begin van experimentele procedures. Alternatieve benaderingen zoals gerichte genetische knockouts mogelijk kan zijn bij muizen, maar kan veel complexer dan stereotaxische chirurgie.
Kortom, de beschreven methode maakt het mogelijk voor gelokaliseerde laesie van de hersenen gebieden zonder schade aan het passeren van vezels. Het kan geschikt voor vele doeleinden en is zeer betrouwbaar en controleerbaar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund ya Cirm predoctorale gemeenschap (EDK), NARSAD Young Investigator Award (DK) en het NIMH BRAINS Award (R01MH087495) (DK).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| N-Methyl-D-aspartic Acid 98% | Fisher Scientific | AC32919-0500 | |
| Dual Lab Standard Stereotaxic w/45 deg. Ear Bars | Stoelting | 51653 | Alternative vendor: Kopf *note of caution: assure compatibility of stereotaxic accessories if purchasing from multiple vendors |
| 10μl SYR SPECIAL (*/*/*) | Hamilton | 701SN | |
| Dremel Moto-Tool | Stoelting | 58600 | Alternative vendor: Kopf |
| Carbide burs, handpiece HP, size 2 | Schein Dental | 2284578 | |
| St–lting 6 Syringe Programmable Pump | Stoelting | 53140 | Alternative vendor: Kopf |
| Stainless Steel 316 Hypodermic Regular Wall Tubing 30 Gauge .0123" OD x .00625" ID x .003" Wall (infusion needle) | Small Parts | HTXX-30R-06-05 | |
| Intramedic PE 20 tubing (infusion tubing) | VWR | 63019-025 | |
| Reflex Clips, 9mm, non-sterile | Kent Scientific Corp. | INS500346 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Reflex Clip Applier for 9mm clips | Kent Scientific Corp. | 12031-09 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Curved Hartman hemostat | Fine Science Tools | 13003-10 | |
| London forceps | Fine Sceince Tools | 11080-02 | |
| 2% chlorhexidine solution | Allivet | 30159 | Alternative vendor: PetSolutions |
| 10% povidone iodine solution | CVS | SKU #739575 | |
| Hot bead sterilizer | Harvard Apparatus | 610183 | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment. |
|||
References
- Kirby, E. D. Basolateral amygdala regulation of adult hippocampal neurogenesis and fear-related activation of newborn neurons. Mol. Psychiatry. , Forthcoming (2011).
- Goosens, K. A., Maren, S. Contextual and auditory fear conditioning are mediated by the lateral, basal, and central amygdaloid nuclei in rats. Learn Mem. 8, 148-155 (2001).
- Korz, V., Frey, J. U. Bidirectional modulation of hippocampal long-term potentiation under stress and no-stress conditions in basolateral amygdala-lesioned and intact rats. J. Neurosci. 25, 7393-7400 (2005).
- Bhatnagar, S., Vining, C., Denski, K. Regulation of chronic stress-induced changes in hypothalamic-pituitary-adrenal activity by basolateral amygdala. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1032, 315-319 (2004).
- Ikegaya, Y., Saito, H., Abe, K. Attenuated hippocampal long-term potentiation in basolateral amygdala-lesioned rats. Brain Res. 656, 157-164 (1994).
- Ikegaya, Y., Saito, H., Abe, K. The basomedial and basolateral amygdaloid nuclei contribute to the induction of long-term potentiation in the dentate gyrus in vivo. Eur. J. Neurosci. 8, 1833-1839 (1996).
- Carter, R. N., Pinnock, S. B., Herbert, J. Does the amygdala modulate adaptation to repeated stress. Neurosciene. 126, 9-19 (2004).
- Roozendaal, B., McGaugh, J. L. Basolateral amygdala lesions block the memory-enhancing effects of glucocorticoid administration in the dorsal hippocampus of rats. Eur. J. Neurosci. 9, 76-83 (1997).
- Roesler, R., Roozendaal, B., McGaugh, J. L. Basolateral amgdala lesions block the memory-enhancing effect of 8-Br-cAMP infused into the entorhinal cortex of rats after training. Eur. J. Neurosci. 15, 905-910 (2002).
- Roozendaal, B. Glucocorticoid effects on memory consolidation depend on functional interactions between the medial prefrontal cortex and basolateral amygdala. J. Neurosci. 29, 14299-14308 (2009).
- Kaufer, D. Restructuring the neuronal stress response with anti-glucocorticoid gene delivery. Nat. Neurosci. 7, 947-953 (2004).
- Paxinos, G., Watson, C. The rat brain: in stereotaxic coordinates-the new coronal set. , Elsevier Academic Press. Burlington, MA. (2004).
- Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents. J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).
