La chirurgia stereotassica della lesione eccitotossico di specifiche aree cerebrali nel ratto adulto
Summary
Ablazione mirata della regione specifica del cervello (s) mediante infusione di uno eccitotossina utilizzando le coordinate stereotassico descritto. Questa tecnica può anche essere adattato per l'infusione di altre sostanze chimiche nel cervello di ratto.
Abstract
Molte funzioni comportamentali nei mammiferi, compresi roditori ed esseri umani, sono mediate principalmente da regioni cerebrali distinte. Un metodo comune per discernere la funzione di regioni cerebrali diverse per comportamenti o altri risultati sperimentali è quello di attuare una ablazione localizzata di funzione. Negli esseri umani, popolazioni di pazienti con lesioni cerebrali localizzate sono spesso studiati per deficit, nella speranza di rivelare la funzione di base della zona danneggiata. Nei roditori, si può indurre sperimentalmente lesioni di regioni specifiche del cervello.
Lesione può essere realizzato in diversi modi. Lesioni elettrolitiche possono causare danni localizzati, ma per evitare di danneggiare una varietà di tipi di cellule così come attraversano le fibre provenienti da altre regioni del cervello che capita di essere vicino al sito della lesione. Inducibile tecniche genetiche utilizzando promotori specifici delle cellule di tipo può anche consentire site-specific targeting. Queste tecniche sono complessi e non sempre pratici a seconda della zona bersaglio del cervello. Excitotlesione ossico utilizzando chirurgia stereotassica, invece, è uno dei metodi più affidabili e pratici di neuroni eccitatori la lesione senza danneggiare locali cellule gliali o movimento fibre.
Qui, presentiamo un protocollo per infusione stereotassico del eccitotossina, N-metil-D-aspartato (NMDA), nel complesso basolaterale amigdala. Utilizzando le indicazioni anatomiche, si applica coordinate stereotassiche per determinare la posizione della nostra regione di destinazione cervello e abbassare un ago per iniezioni sul posto appena sopra il bersaglio. Abbiamo poi infondere alla nostra eccitotossina nel cervello, con conseguente morte delle neuroni vicini. Mentre il nostro soggetto sperimentale di scelta è un topo, gli stessi metodi possono essere applicati ad altri mammiferi, con gli opportuni adattamenti in attrezzature e coordinate.
Questo metodo può essere utilizzato in una varietà di regioni del cervello, compreso il basolaterale amigdala 1-6, altri nuclei amigdala 6, 7, 8 ippocampo, entorhinal corteccia prefrontale della corteccia 9 e 10. Può anche essere usate per somministrare composti biologici come vettori virali 1, 11. La tecnica di base stereotassico potrebbe anche essere adattato per l'impianto di più pompe osmotiche permanenti, consentendo più prolungata esposizione ad un composto di interesse.
Protocol
Discussion
Il metodo qui presentato permette stereotassico per lesione eccitotossico su specifiche aree cerebrali tramite infusione di NMDA. I metodi di base stereotassiche può essere adattato per infondere una varietà di agenti farmacologici e biologici in un sito-specifica. Si possono anche essere adattate per indirizzare una varietà di aree cerebrali, definito dalle rispettive coordinate stereotassiche in un cervello atlante 12. Adattamento ad altre specie come i topi possono essere realizzati con dispositivi simi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato ya CIRM comunione predoctoral (CDPE), Investigator Award NARSAD Young (DK) e il premio NIMH BRAINS (R01MH087495) (DK).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| N-Methyl-D-aspartic Acid 98% | Fisher Scientific | AC32919-0500 | |
| Dual Lab Standard Stereotaxic w/45 deg. Ear Bars | Stoelting | 51653 | Alternative vendor: Kopf *note of caution: assure compatibility of stereotaxic accessories if purchasing from multiple vendors |
| 10μl SYR SPECIAL (*/*/*) | Hamilton | 701SN | |
| Dremel Moto-Tool | Stoelting | 58600 | Alternative vendor: Kopf |
| Carbide burs, handpiece HP, size 2 | Schein Dental | 2284578 | |
| Stoelting 6 Syringe Programmable Pump | Stoelting | 53140 | Alternative vendor: Kopf |
| Stainless Steel 316 Hypodermic Regular Wall Tubing 30 Gauge .0123″ OD x .00625″ ID x .003″ Wall (infusion needle) | Small Parts | HTXX-30R-06-05 | |
| Intramedic PE 20 tubing (infusion tubing) | VWR | 63019-025 | |
| Reflex Clips, 9mm, non-sterile | Kent Scientific Corp. | INS500346 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Reflex Clip Applier for 9mm clips | Kent Scientific Corp. | 12031-09 | Alternative vendor: Fine Science Tools |
| Curved Hartman hemostat | Fine Science Tools | 13003-10 | |
| London forceps | Fine Sceince Tools | 11080-02 | |
| 2% chlorhexidine solution | Allivet | 30159 | Alternative vendor: PetSolutions |
| 10% povidone iodine solution | CVS | SKU #739575 | |
| Hot bead sterilizer | Harvard Apparatus | 610183 |
Table 1. Table of specific reagents and equipment.
References
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