大鼠原位肝移植是不可缺少的生物医学研究的实验模型。在这里,我们提出我们的程序使用了50%的部分移植肝动脉重建的大鼠原位肝移植手术。
在整体或局部移植的大鼠原位肝移植(OLT)是一个不可缺少的实验模型,移植的研究,如对移植物的保存和缺血再灌注损伤1,2,免疫反应3,4 5,6血流动力学的研究,为小尺寸综合征7。大鼠肝移植动物模型的实验性手术中最困难的,需要先进的显微外科技术,需要很长的时间来学习。因此,该模型的使用受到了限制。由于可靠性和可重复性的结果是在这种复杂的动物模型用于实验的重要组成部分,它是必不可少的外科医生参与培训的标准化和复杂的程序,这种模式在大鼠OLT。
虽然不同的技术和修改的OLT的影响已报道8月以来的第一个模型是describLee 等人于1973年9的消除肝动脉重建10和袖套吻合技术引进由镰田等人。11人在这个模型中的一个重大进步,因为他们在很大程度上简化了重建的程序。在该模型中由镰田等人。,肝rearterialization也被淘汰。由于老鼠可以存活肝移植无肝动脉血流后,有相当大的争议肝动脉的价值。然而,生理的动脉模型的优势已经日益认识到,特别是在维护胆管系统8,12和肝脏完整性8,13,14。
在这篇文章中,我们提出了详细的手术过程OLT与肝动脉重建的大鼠模型中使用了50%的部分离体肝脏移植后resecTION。每个容器和胆管的重建程序,执行由以下方法:7-0聚丙烯连续缝合为超和肝下腔静脉,门静脉的袖带技术和肝动脉的支架技术和胆管。
Lee 等人报道的第一个模型大鼠OLT于1973年9,所有船只,包括肝动脉重建手工缝制的方法和使用的门体分流术,体外循环。这种模式在技术上是复杂和难以执行。接下来的模型是一个无肝动脉重建和体外分流,开发由同一作者1975年的10。随后在1979年,镰等人介绍了袖套吻合技术的模型无肝rearterialization 11。与这些修改,OLT在大鼠缩短无肝在收件人的操作的时间,简化了,并已被广泛地用作一个公认的实验模型。
然而,相当大的争议,自那时以来,在大鼠肝移植的肝动脉8的意义,因为动脉是一个艰巨的任务,但二倒是不影响移植后的生存。肝动脉,使用各种重建技术的许多研究已报道8,如主动脉段主动脉吻合3,9,17,袖套吻合技术18,19,20,一个可伸缩技术5,支架技术13, 16,以及一个套筒吻合技术12,21-23。虽然该技术对大鼠肝移植仍是不规范的今天,越来越多的动脉模型在其生理优势8,12,13,14的青睐。在上述的技术中,这是简单的和快速的执行的支架技术报道Lehmann 等人在2005年16。该研究显示了优异的成绩:,没有重建肝动脉闭塞率观察8小时,24小时,再灌注后6个月。因此,我们采用了这种技术对肝动脉。
我们PERFOR马手工缝制的吻合重建的SHVC和IHVC。这种方法提供了一个最佳的生理条件下,这会导致血栓形成的发生率降低8吻合部位,并且是最好的显微对外科医生的模拟和训练。此外,吻合口可以是可能的,即使短的容器树桩。关于的吻合IHVC,此方法并不需要很长的IHVC接枝侧与袖带吻合技术相比。因此,当供肾静脉解剖长时间来使接枝IHVC,此方法是适用于一个小的移植物的移植需要一种的长IHVC,如30%的接枝,由右横向和尾状叶和一个短的肝内腔静脉没有SHVC 2。
关于肝切除术的实验研究,至今几种方法的技术已经报道了两个主要技术是的经典质量结扎技术和船舶技术24。我们执行50%肝切除15古典绑带的技术,但在手术显微镜下使程序更细,和剩余的裂片和结构,以避免损坏。
我们描述了具有代表性的结果,在我们的模型中的受体大鼠,大鼠存活在7天的观察期,没有明显的并发症。实验不同的目的选择不同的设置,如长时间冷藏,热缺血时间延长,其中包括捐赠心脏死亡后,使用较小的肝移植或移植的肝损伤或疾病的实验模型,该模型可以修改。
在我们的经验,整个程序可能会影响移植后的生存,最可靠的参数结果大鼠OLT的三个关键因素:失血量,手术时间,Ë特别的门静脉和IHVC的阻断时间,和重建每艘船舶的充分性,这可能会导致管腔狭窄,血栓形成或出血。这种模式在培训期间,大部分故障可能会涉及到这些因素。在这个视频文章中,我们提出了一步一步的指示,为我们的模型大鼠的肝动脉重建的部分OLT的外科手术。 ,虽然大鼠模型的OLT是复杂的,需要先进的显微外科技术,本文提供了大量的实用信息,将其作为这种模式的培训和学习的一个很好的指导。学习此模型有效地缩短的学习期间,减少的数量的动物和实践所需的成本,和购买再现可靠的实验结果是特别重要的。这是符合3R的概念(替代,减少和细化)的动物实验推测,这是由Russell和Burch在1959年25。
The authors have nothing to disclose.
该的作者感谢Pascal Paschenda和Mareike舒尔茨提供的技术援助。
Name | Company | Catalogue number | Comments |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Light source | Schott | KL1500LCD | |
Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
Gauze swabs (5×5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
Scissors | AESCULAP | BC211W | |
Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |