चूहों में orthotopic जिगर प्रत्यारोपण जैव चिकित्सा अनुसंधान के लिए एक अनिवार्य प्रयोगात्मक मॉडल है. यहाँ हम यकृत धमनी पुनर्निर्माण का उपयोग कर एक 50% आंशिक अनुचित लाभ कमाने की चेष्टा करना के साथ orthotopic चूहा यकृत प्रत्यारोपण के लिए हमारे शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं को प्रस्तुत करते हैं.
एक पूरी या आंशिक रूप से अनुचित लाभ कमाने की चेष्टा करना का उपयोग चूहों में orthotopic यकृत प्रत्यारोपण (Olt) प्रत्यारोपण के अनुसंधान के लिए एक अनिवार्य प्रयोगात्मक भ्रष्टाचार संरक्षण और ischemia-reperfusion चोट 1,2, प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं 3,4, 5,6 hemodynamics पर अध्ययन के रूप में, मॉडल है, और छोटे के लिए आकार 7 सिंड्रोम. चूहे OLT सबसे मुश्किल प्रयोगात्मक सर्जरी में पशु मॉडल के बीच है और उन्नत microsurgical कौशल है कि एक लंबे समय के लिए सीख लेने के की मांग. नतीजतन, इस मॉडल का उपयोग सीमित किया गया है. चूंकि और परिणामों की विश्वसनीयता reproducibility प्रयोगों में जो ऐसी जटिल पशु मॉडल का उपयोग किया जाता है के प्रमुख घटक हैं, यह सर्जन जो चूहे OLT में शामिल कर रहे हैं इस मॉडल के लिए अच्छी तरह से मानकीकृत और परिष्कृत प्रक्रियाओं में प्रशिक्षित किया जा के लिए आवश्यक है.
जबकि विभिन्न तकनीकों और चूहों में OLT की संशोधन 8 सूचित किया गया है के बाद से पहली मॉडल describ थाली एट अल द्वारा एड 1973 में 9, यकृत धमनी 10 पुनर्निर्माण और Kamada एट अल द्वारा कफ सम्मिलन तकनीक की शुरूआत के उन्मूलन 11 इस मॉडल में एक बड़ी प्रगति थे, क्योंकि वे एक महान डिग्री के पुनर्निर्माण प्रक्रियाओं सरलीकृत . Kamada एट अल. द्वारा मॉडल में, यकृत rearterialization भी समाप्त कर दिया गया था. चूंकि चूहों जिगर प्रत्यारोपण के बाद यकृत धमनी प्रवाह के बिना जीवित रह सकता है, वहाँ यकृत धमनीचक्र संयोजन की मूल्य पर काफी विवाद था. हालांकि, मॉडल की शारीरिक श्रेष्ठता की arterialized तेजी से किया गया है पित्त नली 8,12 प्रणाली और जिगर 8,13,14 अखंडता के संरक्षण के मामले में विशेष रूप से स्वीकार किया है.
इस अनुच्छेद में, हम वर्तमान OLT यकृत धमनी पुनर्निर्माण के साथ चूहे मॉडल के लिए विस्तृत शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं पूर्व vivo जिगर resec के बाद एक 50% आंशिक अनुचित लाभ कमाने की चेष्टा करना का उपयोगtion. निम्न विधियों में से प्रत्येक पोत और पित्त नली के लिए पुनर्निर्माण की प्रक्रिया का प्रदर्शन कर रहे हैं, पोर्टल शिरा के लिए एक कफ तकनीक, सुप्रा और infrahepatic वेना कावा के लिए एक 7-0 polypropylene सतत सिवनी और यकृत धमनी के लिए एक स्टेंट तकनीक और पित्त नली.
चूहे OLT की पहली मॉडल ली एट अल द्वारा सूचित किया गया था, 1973 में 9, जिसमें यकृत धमनी सहित सभी जहाजों एक हाथ sewn विधि से खंगाला गया और extracorporeal portosystemic अलग धकेलना इस्तेमाल किया गया था. इस मॉडल को तकनीकी रूप से जटिल और प्रदर्शन करने के लिए मुश्किल था. अगले मॉडल यकृत धमनी पुनर्निर्माण और extracorporeal अलग धकेलना के बिना, एक ही 1975 में 10 लेखकों द्वारा विकसित किया गया था. इसके बाद 1979 में, Kamada एट अल. यकृत 11 rearterialization बिना मॉडल के लिए कफ सम्मिलन तकनीक शुरू की. इन संशोधनों के साथ चूहों में OLT प्राप्तकर्ता आपरेशनों में एक छोटा anhepatic समय के साथ सरलीकृत किया गया है और व्यापक रूप से स्वीकार किए जाते हैं एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है.
हालांकि, वहाँ काफी विवाद तब से किया गया है क्योंकि उपर्युक्त क्रिया चूहे में यकृत धमनीचक्र संयोजन OLT 8 के महत्व पर एक काम की मांग थी, लेकिन diप्रत्यारोपण के बाद अस्तित्व को प्रभावित नहीं हूं. यकृत धमनीचक्र संयोजन पर कई अध्ययनों से विभिन्न पुनर्निर्माण तकनीक का उपयोग एक महाधमनी खंड महाधमनी 3,9,17 सम्मिलन, एक कफ सम्मिलन 18,19,20 तकनीक, एक telescoping 5 तकनीक, एक स्टेंट 13 तकनीक के रूप में 8, सूचित किया गया है, 16, और एक आस्तीन सम्मिलन 12,21-23 तकनीक. जबकि चूहे OLT के लिए तकनीक आज भी है मानकीकृत नहीं, arterialized मॉडल तेजी से किया गया है और अपनी शारीरिक 8,12,13,14 श्रेष्ठता के मामले में इष्ट. उपर्युक्त तकनीक के अलावा, एक स्टेंट तकनीक है कि सरल और तेजी से करने के लिए प्रदर्शन था लेहमेन एट अल द्वारा सूचित किया गया था 2005 में 16. अध्ययन उत्कृष्ट परिणाम से पता चला: कोई रोड़ा दर खंगाला यकृत धमनी में reperfusion के बाद 8 घंटा, 24 घंटा, और 6 महीने में मनाया गया. इसलिए हम यकृत धमनीचक्र संयोजन के लिए इस तकनीक को अपनाया.
हम कामकाजमा SHVC और IHVC के पुनर्निर्माण के लिए हाथ sewn सम्मिलन. इस पद्धति का एक इष्टतम शारीरिक हालत है, जो 8 घनास्त्रता की घटनाओं में कमी करने के लिए सुराग के साथ शाखामिलन संबंधी साइट प्रदान करता है, और सबसे अच्छा microsurgery सिमुलेशन और सर्जनों के लिए प्रशिक्षण है. इसके अलावा, सम्मिलन कम पोत स्टंप साथ भी संभव हो सकता है. IHVC के सम्मिलन के संबंध में, इस विधि भ्रष्टाचार तरफ एक लंबे IHVC कफ सम्मिलन तकनीक के साथ तुलना की आवश्यकता नहीं है. इसलिए, जब दाता गुर्दे की नस भ्रष्टाचार IHVC लंबे समय dissected है, यह विधि एक छोटे भ्रष्टाचार के प्रत्यारोपण कि एक 30% भ्रष्टाचार कि एक छोटी intrahepatic के साथ सही पार्श्व और पूंछवाला lobes के होते हैं के रूप में एक लंबा IHVC आवश्यक लागू है वेना कावा SHVC बिना 2.
चूहों के लिए कई तरीकों की तारीख में जिगर लकीर की तकनीक के बारे में सूचित किया गया है, दो प्रमुख तकनीकों शास्त्रीय जन संयुक्ताक्षर तकनीकऔर पोत उन्मुख तकनीक 24. हम 50% जिगर लकीर 15 के लिए शास्त्रीय संयुक्ताक्षर तकनीक के प्रदर्शन, लेकिन एक शल्य खुर्दबीन के नीचे प्रक्रिया बेहतर बनाने के लिए, और शेष lobes और संरचनाओं के लिए क्षति से बचने के लिए.
हम हमारे मॉडल में प्राप्तकर्ता चूहों से प्रतिनिधि परिणाम का वर्णन, चूहों सात दिन स्पष्ट जटिलताओं के बिना प्रेक्षण अवधि के दौरान बच गया. मॉडल प्रयोगों के विभिन्न प्रयोजनों के लिए लंबे समय तक कोल्ड स्टोरेज, लंबे समय तक गर्म ischemia है कि हृदय की मौत के बाद दान भी शामिल है, और छोटे जिगर जिगर चोट या बीमारियों की प्रयोगात्मक मॉडल से या grafts grafts के उपयोग के रूप में विभिन्न सेटिंग्स, चुनने के द्वारा संशोधित किया जा सकता है.
आपरेशन समय ई खून की कमी की राशि: हमारे अनुभव में, वहाँ प्रक्रियाओं है कि प्रत्यारोपण, चूहा OLT के परिणामों के लिए सबसे विश्वसनीय पैरामीटर के बाद अस्तित्व को प्रभावित कर सकते हैं भर में तीन प्रमुख कारक हैंविशेष clamping पोर्टल शिरा और IHVC के समय, और प्रत्येक पोत के पुनर्निर्माण की पर्याप्तता, जो एक प्रकार का रोग, घनास्त्रता, में परिणाम सकता है, या खून बह रहा है. इस मॉडल का एक प्रशिक्षण अवधि में, विफलताओं की सबसे शायद उन कारकों को संबंधित किया जा सकता है. इस वीडियो लेख में, हम हमारे यकृत धमनी पुनर्निर्माण के साथ आंशिक OLT के चूहे मॉडल के लिए शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के लिए कदम दर कदम निर्देश उपस्थित थे. जबकि OLT की एक चूहे मॉडल जटिल है और उन्नत microsurgical कौशल की आवश्यकता है, इस लेख व्यावहारिक जानकारी के बहुत प्रदान करता है, जो प्रशिक्षण और इस मॉडल की सीखने के लिए एक अच्छा गाइड के रूप में सेवा करनी चाहिए. इस मॉडल को कुशलतापूर्वक सीखना सीखने की अवधि को छोटा, जानवरों और अभ्यास के लिए आवश्यक लागत की संख्या को कम करने, और प्रयोगों बाद में reproducing विश्वसनीय परिणाम के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है. यह पशु प्रयोगों के 3Rs (प्रतिस्थापन, कमी, और शोधन) अवधारणा है, जो रसेल और Burch में माने था के साथ लाइन में है1959 25.
The authors have nothing to disclose.
लेखकों पास्कल Paschenda और Mareike Schulz उनके तकनीकी सहायता के लिए धन्यवाद.
Name | Company | Catalogue number | Comments |
Surgical microscope | Leica | M651 | |
Light source | Schott | KL1500LCD | |
Cotton swabs | NOBA Verbandmittel | 974202 | |
Gauze swabs (5×5 cm) | Fuhrmann | 10002 | |
povidone-iodine solution | Mundipharma | 6108022.00.01 | |
Oil-based clay | Debika corporation | 090148 | |
TachoSil | Takeda Pharmaceuticals International GmbH | EU/1/04/277/001-004 | Applied to resected liver surface |
Scalpel blade No. 11 | Pfm medical | 200130011 | Preparation of cuff and stents |
14-gauge catheter | B. Braun | 4268210S | Cuff for PV |
18-gauge catheter | B. Braun | 4268130S | Perfusion via PV |
24-gauge catheter | B. Braun | 4269071S | Stent for BD and HA |
4-0 silk suture | Resorba | H3F | Liver resection |
6-0 silk suture | Resorba | H1F | |
7-0 Prolene (polypropylene) suture | Ethicon | 8701H | SHVC and IHVC |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | V304H | Abdominal closure |
5-ml syringe | Terumo | SS+T05ES1 | Back pillow |
Heating pad | Thermo | 190 x 260 mm | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools Inc. | 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 |
|
Cold water bath | Huber | 740.000X | Graft preservation |
Bipolar forceps | Söring | MBC-200 | |
Mosquito forceps | BONIMED | 451-476-03 | Two pairs used |
Adson micro forceps | Dimeda | 10.176.12 | |
Curved micro forceps | AESCULAP | FD281R | |
Straight micro forceps | Bonimed | 451-476-03 | |
Curved micro scissors | Medicon | 05.15.83 | |
Straight micro scissors | AESCULAP | FD12 | Fine incision |
Scissors | AESCULAP | BC211W | |
Micro needle holder | AESCULAP | FD241R | Reconstruction |
Mayor-Hegar Needle holder | Mizuho Ikakogyo | 06-798-00 | Abdominal closure |
DeBakey Bulldog clamp (straight) | ULRICH | CV3054 | |
DeBakey Bulldog clamp (curved) | CODMAN | 37-1062 | |
Satinsky clamp | Mizuhoika | 09-230-24 | |
Peripheral vascular clamp | Teleflex Medical | 353494 | Recipient SHVC |
Micro vessel clamp (disposable) | AROSurgical Instruments Corporation | TKM-1-60 g | PV, graft IHVC, and recipient HA |
Micro vessel clamp (metal) | Fine Science Tools Inc. | 18052-01 | Recipient IHVC |
Lactated Ringer solution | Fresenius Kabi | 6150917.00.00 | |
Normal saline solution | DeltaSelect | 1299.99.99 | |
HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | 31268.00.00 | Preservation solution |
Heparin-Natrium | Ratiopharm | 5394.02.00 | 500 IU before graft perfusion |
8.4% sodium bicarbonate | Fresenius Kabi | 4399.97.99 | 0.5 ml after reperfusion |
5% Glucose solution | B. Braun | 6714567.06.00 | 1.0 ml after reperfusion |
Cefuroxim sodium | Fresenius Kabi | 38985.01.00 | Antibiotic, 16 mg/kg |
Buprenorphine | Essex Pharma | 997.00.00 | Painkiller, 0.1 mg/kg |
Intensive Care Unit Cage | Brinsea Products Ltd. | Vetario S10 | Postoperative care |