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प्राथमिक माउस पेट के ट्यूमर की इन विट्रो Organoid संस्कृति में

Published: May 17, 2013 doi: 10.3791/50210
Automatic Translation
1, 1,2
1Department of Molecular & Integrative Physiology, University of Michigan, 2Department of Internal Medicine, Division of Gastroenterology, University of Michigan

Summary

प्राथमिक murine पेट के ट्यूमर organoid स्थापित करने के लिए एक सरल विधि का वर्णन किया है. इस विधि पेट के ट्यूमर कोशिकाओं को जीवित और उपकला सामान्य बृहदान्त्र नहीं करते, जबकि सीमित वृद्धि कारकों से युक्त मीडिया में organoids में विकसित है कि सुविधा का इस्तेमाल करता है.

Abstract

कई मानव और murine पेट के कैंसर कोशिका लाइनों की स्थापना की गई है, इस तरह के कई सेल परतों, बेसल शिखर ध्रुवता, अंतर करने की क्षमता, और anoikis के रूप में पेट के ट्यूमर की शारीरिक अखंडता पेट के कैंसर व्युत्पन्न सेल लाइनों में नहीं रखा जाता है. वर्तमान अध्ययन सातो टी एट अल. 1, पेट के ट्यूमर की महत्वपूर्ण शारीरिक विशेषताओं को बरकरार रखे हुए है जिसमें से अनुकूलित संवर्धन प्राथमिक माउस पेट के ट्यूमर organoids के लिए एक विधि को दर्शाता है. इस विधि ट्यूमर कोशिकाओं को सामान्य की तुलना में पोषक तत्व की स्थिति को सीमित करने पर विकास को बनाए रखने कि सिद्धांत के आधार पर माउस पेट के ट्यूमर के ऊतक संग्रह, आसन्न सामान्य पेट के उपकला हदबंदी, एकल कक्षों में पेट के ट्यूमर कोशिकाओं पाचन, Matrigel में पेट के ट्यूमर कोशिकाओं एम्बेड, और चयनात्मक संस्कृति के होते हैं उपकला कोशिकाओं.

आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों से अलग अगर प्राथमिक ट्यूमर organoids ट्यूमर स्वायत्त funct का आकलन करने के लिए एक बहुत ही उपयोगी प्रणाली प्रदानविशेष जीन के आयन. इसके अलावा, ट्यूमर organoids जीन डिलीवरी तप वायरस द्वारा आनुवंशिक हेरफेर करने के लिए उत्तरदायी हैं, पेट के tumorigenesis में शामिल इसलिए संकेत दे रास्ते भी बड़े पैमाने पर overexpression या पछाड़ना द्वारा जांच किया जा सकता है. प्राथमिक ट्यूमर organoids संस्कृति पेट के tumorigenesis के लिए तंत्र और चिकित्सीय तौर तरीकों का अध्ययन करने के लिए एक शारीरिक प्रासंगिक और संभव साधन प्रदान करता है.

Introduction

आंतों उपकला कोशिकाओं को पैदा करना और हड्डीवाला शरीर 2,3 में सभी अन्य ऊतकों outpacing, एक असाधारण दर से कम पर बारी. आंतों स्टेम सेल (आईएससी) और पारगमन amplifying कोशिकाओं सहित कोशिकाओं को विभाजित या तो स्रावी (जाम, Paneth और enteroendocrine) कोशिकाओं या enterocytes 3 ​​में अंतर. आईएससी तहखाना के आधार पर स्थित है. Paneth कोशिकाओं तहखाने के नीचे से नीचे ले जाने और अन्य प्रजातियों विल्ली 3,4 करने के लिए ऊपर की ओर पलायन, जबकि लंबे समय रहते हैं. यहाँ कोशिकाओं माइक्रोबायोटा सहित पेट सामग्री के संपर्क में हैं और एक anoikis प्रेरित apoptotic तंत्र के माध्यम से अंकुर सुझावों से बहा रहे हैं. पेट के विल्ली और Paneth कोशिकाओं की कमी होती है, homeostasis को बनाए रखने के लिए तंत्र 4 समान है.

WNT सिगनल मार्ग आंतों प्रसार और आईएससी रखरखाव 4 में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा रहा है में शामिल किया गया है. वें का विलोपनई प्रतिलेखन कारक TCF4, WNT सिगनल की एक बहाव के प्रेरक, आंतों स्टेम कोशिकाओं और ऊतकों 5 के बाद के टूटने का नुकसान होता है. इसी तरह, Wnt अवरोध DKK1 की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति उपकला प्रसार को कम कर देता है और स्रावी सेल प्रजातियों 6 depletes. इसके विपरीत, Wnt एगोनिस्ट आर spondin -1 की overexpression आंतों तहखाना कोशिकाओं 7 के शक्तिशाली और तेजी से प्रसार को प्रेरित करता है.

आंत्र homeostasis के लिए WNT सिगनल के महत्व को देखते हुए, Wnt मार्ग म्यूटेशन अक्सर पेट के कैंसर 8 में मनाया जाता है. पेट के कैंसर संयुक्त राज्य अमेरिका 9 में कैंसर से मृत्यु का तीसरा प्रमुख कारण है. लाल मांस और शराब के साथ अतिरिक्त खुराक का सेवन शारीरिक गतिविधि कम, और विरासत में मिला है और दैहिक परिवर्तन पेट के कैंसर 10,11 के जोखिम कारक माना जाता है. एडिनोमेटस पोलीपोसिस कोलाई (APC) जीन, एक प्रमुख WNT सिगनल कारक, देहात के बहुमत में उत्परिवर्तित हैपारिवारिक, छिटपुट, और कोलाइटिस से जुड़े पेट के कैंसर 12,13 साथ tients. Axin2 और β-catenin सहित WNT सिगनल मार्ग में शामिल अन्य कारकों का म्यूटेशन भी पेट के कैंसर 14,15 में मनाया जाता है. हालांकि, पेट के कैंसर के लिए सटीक व्यवस्था और प्रभावी उपचार अभी भी कमी कर रहे हैं. पेट के कैंसर के लिए आणविक तंत्र की जांच की सुविधा, एक आक्रामक सेल टाइप करने के लिए एक सौम्य से कैंसर की प्रगति के विभिन्न चरणों का प्रतिनिधित्व मानव पेट के कैंसर कोशिका लाइनों 16-18 स्थापित किया गया है. अलग मेटास्टेटिक गुणों के साथ माउस बृहदान्त्र कार्सिनोमा सेल लाइनों भी 19,20 उपलब्ध हैं. वे बारीकी विवो राज्य में नकल और अधिक physiologically प्रासंगिक डेटा 21 उत्पन्न क्योंकि फिर भी, प्राथमिक कोशिकाओं या organoid संस्कृतियों तब्दील सेल लाइनों से अधिक पसंद कर रहे हैं. अधिकांश पेट के कैंसर व्युत्पन्न सेल लाइनों lackin, थाली से जुड़ी monolayer के रूप में या सेल निलंबन के रूप में विकसितशिखर-basolateral अभिविन्यास और कोशिकाओं के बीच तंग जंक्शनों के छ. विभेदित कोशिकाओं अंकुर सुझावों पहुँचने के लिए और 22 बहा रहे हैं के रूप में भी, vivo में सामान्य और ट्यूमर आंतों उपकला कोशिकाओं apoptosis कहा जाता anoikis का एक सहज रूप से गुजरना. इन सुविधाओं सेल लाइनों में पुनरावृत्ति करना मुश्किल है लेकिन पेट के कैंसर के 23 के विकास की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण हैं. इन सुविधाओं प्राथमिक organoids में रखा जाता है. इसके अलावा, ट्यूमर organoid संस्कृतियों vivo अध्ययन में की तुलना में जीन का ट्यूमर स्वायत्त कार्यों का आकलन करने के लिए एक कुशल प्रणाली प्रदान करते हैं. आंत के vivo में आनुवंशिक हेरफेर मुख्य रूप से आंत विशिष्ट ड्राइवरों का उपयोग ट्रांसजेनिक और / या पीटा चूहों बनाने के माध्यम से एक समय लेने वाली प्रक्रिया है. हालांकि, ट्यूमर organoids आसानी से वायरल मध्यस्थता आनुवंशिक जोड़तोड़ करने के लिए उत्तरदायी है और इस तरह सटीक आणविक तंत्र का आकलन करने के लिए एक महान उपकरण है. प्राथमिक पेट के ट्यूमर organoid संस्कृतियों हवलदारई एक व्यवहार्य और शक्तिशाली तकनीक का प्रदर्शन किया गया. प्राथमिक आंतों सेल संस्कृति एक एकल वयस्क Lgr5 + स्टेम सेल 24 से इन विट्रो में तहखाना-विल्ली संरचना के साथ कार्यात्मक आंत्र organoids स्थापित कर सकते हैं. ये organoids प्रत्यारोपित और उत्थान 25 के लिए क्षतिग्रस्त पेट के ऊतकों में engrafted किया जा सकता है. संस्कृति शर्तों के आगे रूपांतरण माउस कोलन और मानव छोटी आंत और 1 संभव बृहदान्त्र से समान उपकला organoids कर दिया था. बेसल मध्यम संस्कृति और EGF प्राथमिक माउस पेट के ट्यूमर organoids 1 उगाने के लिए पर्याप्त है जबकि प्राथमिक सामान्य पेट के उपकला संस्कृति, बेसल मध्यम संस्कृति के साथ ही के लिए EGF, नोगिन, आर spondin और Wnt3a सहित वृद्धि कारकों, आवश्यक हैं. यहाँ हम एक विस्तृत प्रोटोकॉल, अलग संस्कृति, और पेट के ट्यूमर organoids उत्पन्न करने का वर्णन है.

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Protocol

1. पेट के ट्यूमर अलगाव और सेल हदबंदी

  1. आंत्र ट्यूमर किसी भी छिटपुट या उपचार प्रेरित पेट के कैंसर के मॉडल से अलग किया जा सकता है. चूहों सीओ 2 के साथ euthanized किया जाना चाहिए. कोलन तो ठंड फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ प्लावित, एकत्र और अनुलंबीय खोल रहे हैं. एक stereomicroscope का उपयोग ट्यूमर युक्त क्षेत्रों की पहचान करें, कैंची की एक जोड़ी के साथ बाहर काटना, और ठंड पीबीएस के साथ धो लो.
  2. EDTA केलेशन बफर में ट्यूमर युक्त आंतों टुकड़े (2 मिमी EDTA, 5.6 mmol / एल ना 2 4 HPO, 8.0 mmol / एल 2 के.एच. पीओ 4, 96.2 mmol / एल NaCl, 1.6 mmol / एल KCl, 43.4 mmol / एल सूक्रोज, सेते बर्फ पर 60 मिनट के लिए 54.9 mmol / एल डी sorbitol, 0.5 mmol / आसुत जल में एल डीएल dithiothreitol).
  3. ट्यूमर कोशिकाओं mesenchyme से जुड़ी रहेगी जबकि केलेशन के बाद, सामान्य आंतों उपकला कोशिकाओं के अधिकांश, अलग किया जाएगा. सामान्य उपकला कोशिकाओं से युक्त केलेशन बफर बंद महाप्राणऔर शेष ट्यूमर धोने 5 मिलीलीटर ठंड केलेशन बफर के साथ एक बार और टुकड़े.
  4. केलेशन बफर बंद महाप्राण, 5 मिलीलीटर ठंड 1x पीबीएस के साथ ट्यूमर के टुकड़े धो लो.
  5. 1x पीबीएस बंद महाप्राण, पाचन बफर में ट्यूमर के टुकड़े (2.5% भ्रूण गोजातीय सीरम, पेनिसिलिन की 1 यूनिट / एमएल, स्ट्रेप्टोमाइसिन की 1 ग्राम / एमएल, और 2.5 एनजी / amphotericin बी की मिलीलीटर, 200 यू / एमएल प्रकार चतुर्थ collagenase, सेते 37 पर 2 घंटे के लिए 125 माइक्रोग्राम / Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम में मिलीलीटर प्रकार द्वितीय dispase) डिग्री सेल्सियस
  6. ट्यूमर टुकड़ा 1 मिनट के लिए सामान्य गुरुत्वाकर्षण के नीचे बसा है, और एक 15 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा करने की अनुमति दें. गोली 3 मिनट के लिए 200 XG पर centrifuging और 3 मिनट के लिए 200 XG पर centrifuging द्वारा 5 मिलीलीटर पीबीएस के साथ एक बार धोने से एक सेल ट्यूमर निलंबन तैरनेवाला.

2. आंतों ट्यूमर की संस्कृति

  1. एक hemocytometer का उपयोग अलग ही ट्यूमर कोशिकाओं की गिनती, 500 μl पीबीएस के साथ ट्यूमर सेल गोली Resuspend.
  2. प्रतिशत से गोली ट्यूमर कोशिकाओं3 मिनट के लिए 200 XG पर rifuging, और अच्छी तरह से प्रति Matrigel के μl 50 प्रति 15,000 कोशिकाओं में 24 अच्छी तरह प्लेटें में बर्फ और थाली पर 5 मिलीग्राम / मिलीलीटर Matrigel में उन्हें resuspend.
  3. Matrigel 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए भाजन, और 500 से अच्छी तरह से बेसल / μl संस्कृति के माध्यम से (एक प्रकार की दवा की 1 यूनिट / एमएल, स्ट्रेप्टोमाइसिन की 1 ग्राम / एमएल, और 2.5 एनजी / amphotericin बी की मिलीलीटर, 10 mmol / एल HEPES के जोड़ दें , 2mm Glutamax, 1x एन 2 पूरक, 1x B27 पूरक, उन्नत Dulbecco संशोधित ईगल Medium/F12 में 1 mmol / एल एन एसिटाइलसिस्टीन) 50 एनजी / एमएल murine EGF युक्त.

3. स्थापित Organoids का रखरखाव

  1. एक सप्ताह में एक बार EGF 2 दिन और बीतने organoids 01:05 हर युक्त बेसल संस्कृति के माध्यम से बदलें.
  2. Passaging के लिए, ताजा बेसल संस्कृति के माध्यम से संस्कृति के माध्यम से बदलें. यंत्रवत् काट सुझावों के साथ एक P1000 विंदुक का उपयोग organoids और Matrigel बाधित और एक 15 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में स्थानांतरण. इसके अलावा यांत्रिक हदबंदी एक आग पॉलिश पाश्चर पाइप का उपयोग कर हासिल की हैटीटीई.
  3. 2 मिनट के लिए 200 XG पर बेसल मध्यम संस्कृति और अपकेंद्रित्र के 5 मिलीलीटर के साथ अलग organoids धो लें.
  4. सतह पर तैरनेवाला त्यागें, Matrigel साथ गोली resuspend और ऊपर वर्णित के रूप में संस्कृति के माध्यम जोड़ें.

4. संग्रहण और स्थापित Organoids की रिकवरी

  1. लंबी अवधि के भंडारण के लिए, कम से कम 2 साल के लिए स्थिर रहे हैं जो तरल एन 2 में organoids फ्रीज. ठंड organoids के लिए, सुझावों काट दिया और एक 15 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में हस्तांतरण के साथ एक P1000 विंदुक का उपयोग बाधित.
  2. 2 मिनट के लिए 200 XG पर बेसल मध्यम संस्कृति और अपकेंद्रित्र के 5 मिलीलीटर के साथ अलग organoids धो लें.
  3. सतह पर तैरनेवाला त्यागें, Dulbecco संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) 20% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) और 10% डाइमिथाइल sulfoxide (DMSO) युक्त के साथ गोली resuspend.
  4. 1.5 मिलीलीटर cryotubes में स्थानांतरण की कोशिकाओं, फिर डिग्री सेल्सियस फ्रीजर एक ठंडा दर प्राप्त करने के लिए एक -80 में एक Nalgene श्री ठंढा ठंड कंटेनर और दुकान में ट्यूब डाल-1 डिग्री सेल्सियस / मिनट. रात ऊष्मायन के बाद, तरल एन 2 में ट्यूबों हस्तांतरण.
  5. वसूली के लिए, जमे हुए organoids तेजी से एक 37 डिग्री से ऊपर वर्णित शर्तों के साथ Matrigel और संस्कृति में resuspend सी पानी में स्नान, नीचे स्पिन, बेसल संस्कृति के माध्यम से धो लें. में thawed हैं

5. शाही सेना निष्कर्षण, प्रोटीन निष्कर्षण और immunohistochemistry

  1. शाही सेना निष्कर्षण: मार्ग के रूप में ऊपर वर्णित कोशिकाओं एकत्र कर रहे हैं. शाही सेना के निर्माता के निर्देशों के अनुसार PicoPure टीएम आरएनए अलगाव किट के साथ अलग है.
  2. प्रोटीन निष्कर्षण: ऊपर वर्णित है और (100 μl radioimmunoprecipitation परख बफर में RIPA lysed के रूप में सेल छर्रों एकत्र कर रहे हैं, 50 mmol / एल Tris-एचसीएल 7.5 पीएच, 150 mmol / एल NaCl, 2 mmol / एल EDTA, 1% एनपी 40, 0.1 1x protease अवरोध के साथ% एसडीएस).
  3. Immunohistochemistry: सेल संस्कृति के माध्यम से दूर महाप्राण, क्रायो मोल्ड में काट सुझावों के साथ P1000 विंदुक के साथ ट्यूमर organoids हस्तांतरण और आज़ादी के तुरंत फ्रीजसूखी बर्फ के साथ ठंड मध्यम (अक्टूबर) पर मुकदमा. जमे हुए वर्गों 7 माइक्रोन से कम कटौती और पहले 26 में वर्णित के रूप में दाग रहे थे.

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Representative Results

/ + माउस चित्र 1 में दिखाया गया है एक तीन महीने की उम्र में Apc मिनट से एक पेट के ट्यूमर organoid गठन के समय पाठ्यक्रम. 0 दिन में, एकल कक्षों चढ़ाना (चित्रा 1 ए) के बाद कई घंटे मनाया जा सकता है. दिन 1 बजे, आग रोक नाभिक के साथ पेट के ट्यूमर उपकला कोशिकाओं को मनाया जा सकता है बच गया. 3 दिन में, कोशिकाओं का आकार दोगुना हो गया. सुबह 6 बजे, organoid का आकार दस गुना से अधिक विस्तार किया है और बीच में apoptosis के लक्षण दिखाई. 14 दिन में, orgnoids अनियमित डिब्बों (चित्रा 1 बी) के रूप में विकसित होगा. यहाँ हम 39.33 था ± 22.05 organoids / अच्छी तरह से इस अध्ययन में 30 मिनट (चित्रा 1C) के लिए 75 यू / एमएल collagenase के पाचन हालत के तहत गठित कोई organoids की तुलना में 2 घंटे के लिए 200 यू / एमएल collagenase के पाचन हालत के तहत गठित की.

इस organoid संस्कृति मॉडल कार्यात्मक अध्ययन, β-श्रेणियों के immunofluorescent धुंधला के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है दिखाने के लिए nin, WNT सिगनल मार्ग के लिए एक अभिन्न अंग चित्रा 2 में दिखाया गया है. β-catenin के लिए सकारात्मक दाग कोशिकाओं डा. Clevers 'समूह 24 द्वारा प्रस्तावित एक केंद्रीय लुमेन साथ विकास पैटर्न की पुष्टि की जो organoid के बाहर परतों में स्थित हैं.

चित्रा 1
चित्रा 1. एक तीन महीने की उम्र में Apc मिनट / + माउस से लिया पेट के ट्यूमर से व्युत्पन्न एक प्रतिनिधि organoid गठन (ए) 0, 1, 3, 6 के लिए संवर्धित किया गया था और (बी) के 14 दिनों के दिखाया गया है. दो अलग collagenase पाचन परिस्थितियों में organoid गठन की (सी) सफल दर.

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चित्रा 2. / + माउस दिखाया गया है एक तीन महीने की उम्र में Apc मिनट से ली गई एक पेट के ट्यूमर से व्युत्पन्न organoids लिए β-catenin की Immunofluorescent धुंधला. 4 ',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) नाभिक दाग इस्तेमाल किया गया था.

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Discussion

इस प्रोटोकॉल में वर्णित प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं प्राथमिक murine पेट के ट्यूमर का अलगाव और संस्कृति के लिए अनुमति देगा. प्रोटोकॉल डॉ. Clevers समूह 1,24,27 द्वारा किया मौलिक काम से अनुकूलित है. हम ट्यूमर organoids का एक बेहतर उपज प्राप्त करने के लिए पाचन समय और collagenase एकाग्रता अनुकूलित. महत्वपूर्ण कदम ट्यूमर एकल कक्षों में सेल पाचन, Matrigel मेजबान, और चयनात्मक संस्कृति में शामिल हैं. ट्यूमर सेल पाचन के लिए, क्रम में पेट के ट्यूमर के कुशल हदबंदी प्राप्त करने और उनकी व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए, collagenase के पाचन और एकाग्रता अनुभव से ली गई है और अनुकूलित किया जाना चाहिए. उदाहरण के लिए 30 मिनट के 75 यू / एमएल और ऊष्मायन समय पर collagenase का उपयोग करते समय, हम ही ट्यूमर सेल निलंबन और कोई organoids प्राप्त नहीं किया था, हमारे हाथ में इस शर्त के तहत गठित किया गया. सेल सेल से संपर्क बनाए रखने 300 यू / एमएल और incubatio पर collagenase का उपयोग करते समय, यहाँ संवर्धन कैंसर की कोशिकाओं को 28 के लिए महत्वपूर्ण होने की सूचना है3 घंटा, stromal कोशिकाओं संदूषण का पता समय भी मनाया जाता है. इसी तरह, Matrigel मेजबान, एकाग्रता, और solidification समय भी अनुभव से निर्धारित किया जाना चाहिए. organoids ट्यूमर उपकला के सटीक आकलन के लिए अनुमति देते हैं. पेट के ट्यूमर से स्थापित organoids दीर्घकालिक संस्कृति में सक्षम हैं. हम आसानी से प्रसार और भेदभाव में सराहनीय मतभेद के बिना कई महीनों के लिए स्थापित organoids का इस्तेमाल किया है. स्थापित organoid आनुवंशिक रूप से मारकर गिरा दिया और overexpression के लिए चालाकी से किया जा सकता है. इसके अलावा, ट्यूमर organoids मानव ट्यूमर बायोप्सी नमूनों से उत्पन्न किया जा सकता है, इसलिए संवर्धन तकनीक एक रोगी विशिष्ट ढंग से बुनियादी तंत्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Wnt मार्ग आंतों भ्रूण के विकास के लिए महत्वपूर्ण है. वयस्क आंत में Wnts पारगमन-amplifying कोशिकाओं और Wnt मार्ग के अनियंत्रण पेट के tumorigenesis के 29 के लिए महत्वपूर्ण है की सामान्य प्रसार के लिए महत्वपूर्ण हैं. चयनित संस्कृति वाईवें EGF पेट के ट्यूमर organoid वृद्धि को बनाए रखने के लिए पर्याप्त है. हालांकि, Wnt3a के साथ पूरक जब organoids अधिक कुशलता से बढ़ता है. इसलिए, कोशिकाओं कई पेट के व्युत्पन्न सेल लाइनों के विपरीत, Wnt ligands के प्रभाव को बढ़ावा देने के विकास के लिए उत्तरदायी हैं.

organoids अधिक निकटता स्थापित पेट के कैंसर निकाली गई लाइनों से आंतों उपकला नकल, और हम और अधिक सटीक और physiologically प्रासंगिक डेटा प्रदान करेगा. ऊपर वर्णित है, इस तकनीक के लिए पेट के कैंसर दीक्षा और प्रगति तंत्र की जांच के लिए उपयोगी है. पेट के कैंसर के उपचार के चिकित्सीय प्रभावकारिता का आकलन जब भी ट्यूमर organoids अधिक सटीक डेटा प्रदान करेगा.

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Disclosures

हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस अध्ययन के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (CA148828), मिशिगन गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल पेप्टाइड सेंटर के विश्वविद्यालय, और मिशिगन विश्वविद्यालय व्यापक कैंसर केंद्र के जेफरी ए कोल्बी पेट के कैंसर रिसर्च और टॉम लियू मेमोरियल फंड से YMS को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Matrigel Basement Membrane Matrix BD Biosciences 356234 5 mg/ml
Collagenase Type IV Worthington LS004188 375U/mg
Dispase Gibco 17105-041 1.8U/mg
Advanced DMEM/F12 Invitrogen 12634010
Epidermal Growth Factor (EGF), Murine, Natural Invitrogen 53003-018
N2 Supplement Invitrogen 17502-048 100 x
B27 Supplement Invitrogen 17504-044 50 x
Glutamax-I Gibco 35050-079 100x
N-Acetylcysteine Sigma A9165-5G
Dulbecco's Modified Eagle Medium Invitrogen 11965-092
PicoPureTM RNA Isolation Kit Invitrogen KIT0204

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कैंसर जीवविज्ञान अंक 75 चिकित्सा आण्विक जीवविज्ञान सेलुलर जीवविज्ञान बायोमेडिकल इंजीनियरिंग एनाटॉमी फिजियोलॉजी जेनेटिक्स कैंसर विज्ञान सर्जरी Organoids ट्यूमर कोशिकाओं संवर्धित Colonic नियोप्लास्म प्राथमिक सेल संस्कृति पेट के ट्यूमर केलेशन collagenase Matrigel organoid EGF पेट के कैंसर कैंसर ट्यूमर सेल अलगाव immunohistochemistry माउस पशु मॉडल
प्राथमिक माउस पेट के ट्यूमर की <em>इन विट्रो</em> Organoid संस्कृति <em>में</em>
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Xue, X., Shah, Y. M. In… More

Xue, X., Shah, Y. M. In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors. J. Vis. Exp. (75), e50210, doi:10.3791/50210 (2013).

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