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Immunology and Infection

HIV-1に感染した個体からの制御性T細胞を増殖するための新しいツール

Published: May 30, 2013 doi: 10.3791/50244
Automatic Translation
1, 1, 1,2
1Ragon Institute of MGH, MIT, and Harvard, 2Division of Infectious Diseases, Massachusetts General Hospital

Abstract

CD4 +制御性T細胞（Tregの）は、強力な免疫調節因子であり、ヒト免疫ホメオスタシスにおいて重要な機能を果たす。 Tregの枯渇は、癌および感染性病原体ワクチンの設定の抗原特異的T細胞応答の測定可能増大するに至った。それらのいずれか有害なHIV-1に関連する免疫活性化を抑制する働きをするので、HIV-1疾患の進行を遅らせるか、あるいはHIV-1特異的免疫を抑制し、それによってウイルスを促進することができしかし、HIV-1免疫病因におけるそれらの役割は、議論の余地広がった。理解とHIV-1の文脈における変調Tregの機能は、免疫療法またはHIVワクチンのための潜在的な新しい戦略につながる可能性があります。しかし、重要な未解決の問題は慎重に検討する必要があり、HIV-1感染の文脈におけるその役割に残る。

、末梢血中のヒトCD4 + T細胞の約5％に相当するTregの人口が困難であることが証明されている勉強、エスpecially HIV-1関連のCD4 T細胞のHIV-1感染者やでそのTregの枯渇が発生します。ごく生物学的試料を得ることができる、高度なHIV-1疾患または組織サンプルは、極めて困難である。有する個体における調節T細胞の特徴付け我々は、HIV-1陽性の個体からTregの単離および拡張を使用して、これらの制限を克服するための技術的解決法を提案する。

ここで我々が正常にin vitroで HIV-1に感染した個体からTregの孤立を拡大するための、簡単かつ堅牢な方法について説明します。フローソートCD3 + CD4 + CD25 + CD127 低い Tregのanti-CD3/anti-CD28がコーティングされたビーズで刺激し、IL-2の存在下で培養した。拡張されたTregのは、FOXP3、高レベルの、CTLA4を表明し、HELIOS従来のT細胞と比較して、非常に抑制されることが示された。 Tregの多数に簡単にアクセスでは、研究者が私に対処できるようになりますHIV-1免疫病因における役割に関するmportant質問。我々は、これらの質問に答えると、効果的なHIV-1ワクチンの開発のための有益な洞察を提供するかもしれないと考えています。

Introduction

HIV / AIDSの世界的な、新たに2011年に感染推定250万人と住んで34以上万人で、世界的なHIVの流行を抑制するための効果的なHIVワクチンの必要性が最優先のまま。しかし、強烈な研究努力の三十年にもかかわらず、これまでのHIV-1ワクチンの有効性試験は1-3のみささやかな保護をもたらしていると防御免疫の相関関係はよくわかっていないままです。保護のために必要とされる免疫応答の性質を解明することは効果的なHIV-1ワクチンとHIV-1感染症を標的と他の免疫療法戦略の戦略的設計のために不可欠です。

天然のCD4 +制御性T細胞（Tregの）このようにして、免疫媒介性組織損傷を制限する、過度の免疫活性化を制御することにより、免疫細胞の恒常性の維持に重要である。しかし、彼らはまた、病原体に対する免疫応答を抑制し、その隙間を防止することができる。がんとヘパティティ属Bワクチンの研究は、Tregの活性を低下させることは、ワクチン応答および4-7ウイルスに対する抗原特異的免疫を高めることができることを実証した。しかしながら、HIV-1感染の文脈において、制御性T細胞の正確な影響は完全には理解ままである。 Tregのは、活性化T細胞8およびおそらく影響免疫活性9にウイルス複製を減少させることが示された。彼らはまた、疾患の進行10,11のための否定的な結果を与える可能性がHIV-1特異的免疫応答を抑制することが示された。従って、HIV-1ワクチンの効力を高めるためにTregの活性を調節できるようになる前に、この病気の文脈でそれらの機能さらなる洞察を得るために重要である。

ヒトCD4 +制御性T細胞は、約5％のCD4 +末梢血中のT細胞、さらにその絶対数HIV-関連したCD4 + T細胞の枯渇12で減少し、相対的に少ない細胞集団である</>（商標）。このような共培養をTreg細胞とT細胞増殖アッセイなどのTregの機能を評価するために、現在のアッセイは、12の比較的大きなセル番号を使用する。したがって、高度なHIV-1疾患を持つ個人で調節性T細胞の特徴的機能と特異性は、HIVの病因のために、その重要性にもかかわらず、挑戦されています。

HIV-1患者からex vivoで単離およびTregの拡大は、これらの制限のいくつかを克服するための解決策を表すことができる。ここでは、機能的なTregのin vitroで HIV-1感染患者由来拡大するための簡単かつ堅牢なプロトコルを記述し、我々は、さらにどのように表現型彼らに説明し、フローサイトメトリーアッセイを用いて、その抑制機能をテストします。私たちは、このプロトコルがTregのへのアクセスを容易にし、HIV-1疾患の進行で自分の役割を理解するのに役立つと信じています。

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
RosetteSep Human CD4+ T Cell Enrichment Cocktail Stemcells technologies 15062
PBS Sigma D8537
FBS Sigma F4135
Histopaque Sigma H8889
Anti-CD3-PECy7 BD Pharmingen 557851
Anti-CD4-FITC eBioscience 11-0049-42
Anti-CD25-APC eBioscience 17-0259-42
Anti-CD127-PE BD Pharmingen 557938
Round-Bottom tube with 35 μm a nylon mesh BD Falcon 352235
X-VIVO 15 Lonza 04-418Q
Penicillin/Streptomycin Mediatech 30-001-Cl
Human Serum Gemini Bio-Products 100-512
Human T-activator CD3/CD28 Life Technologies 111.31D
IL-2 NIH Aids Research Reference Reagent Program 136
LIVE/DEAD Fixable Violet Dead Cell Stain Kit Life technologies L34955
Anti-CD4-qdot-655 Life Technologies Q10007
Anti-CD25-PECy5 eBiosciences 15-0259-42
Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set eBiosciences 00-5523-00
Anti-FOXP3-PE eBiosciences 12-4776-42
Anti-HELIOS-FITC Biolegend 137204
Anti-CTLA4-APC BD Pharmingen 555855
CellTrace Violet Cell Proliferation Kit Life Technologies C34557
Vybrant CFDA SE Cell Tracer Kit Life Technologies V12883
HEPES Mediatech 25-060-Cl
Treg Suppression inspector Miltenyi Biotec 130-092-909
Anti-CD4-APC BD Pharmingen 340443
Anti-CD8-AF700 BD Pharmingen 557945
RPMI 1640 Sigma R0883
Glutamine Mediatech 25-002-Cl
Materials
BD Vacutainer Blood Collection Tube w/ ACID CITRATE DEXTROSE (ACD) Becton, Dickinson and Company (BD) 364606
FACSAria IIu Cell Sorter BD Biosciences -
LSR II Flow Cytometer BD Biosciences -
FlowJo Tree Star v887

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