Summary
Implantat-associerad infektion är en signifikant klinisk komplikation. Denna studie beskriver en metod med blodplättsrik plasma (PRP) för att förhindra implantat-associerade infektioner presenterar protokollet för att förbereda PRP med konstant blodplättskoncentration, och rapporterar de nyligen identifierade antimikrobiella egenskaper PRP och relaterade protokoll för att undersöka sådana antimikrobiella egenskaper
Abstract
Implantat-associerad infektion blir mer och mer utmanande att sjukvården i världen på grund av ökande antibiotikaresistens, överföring av antibiotikaresistenta bakterier mellan djur och människor, och de höga kostnaderna för behandling av infektioner.
I denna studie beskriver vi en ny strategi som kan vara effektiva för att förhindra implantat-associerad infektion baserad på de potentiella antimikrobiella egenskaperna hos blodplättsrik plasma (PRP). På grund av dess väl studerade egenskaper för att främja läkning har PRP (en biologisk produkt) alltmer används för kliniska tillämpningar, inbegripet ortopedisk kirurgi, periodontala och muntliga operationer, maxillofacial kirurgi, plast operationer, idrottsmedicin, etc.
PRP kan vara ett avancerat alternativ till konventionella antibiotikabehandlingar att förebygga implantat-associerade infektioner. Användningen av PRP kan vara fördelaktig jämfört med konventionella antibiotiska behandlingar since PRP är mindre troligt att framkalla antibiotikaresistens och PRP s antimikrobiella och helande-främja egenskaper kan ha en synergistisk effekt på infektionsbekämpning. Det är väl känt att patogener och mänskliga celler racing för implantatytor, och PRP: s egenskaper för att främja läkning kunde förbättra människors cellvidhäftning varigenom oddsen för infektion. Dessutom är PRP sig biokompatibel och säker och fri från risken för smittsamma sjukdomar.
För vår studie har vi valt flera kliniska bakteriestammar som är vanliga i ortopediska infektioner och undersökte om PRP har in vitro antimikrobiella egenskaper mot dessa bakterier. Vi har förberett PRP med en dubbelt centrifugering strategi som gör det möjligt för samma blodplättskoncentration kan erhållas för samtliga prover. Vi har uppnått konsekvent antimikrobiella fynd och fann att PRP har starka in vitro antimikrobiella egenskaper mot bakterier som methicillin-känslig och meticillinresistenta Staphylococcus aureus, grupp A-streptokocker, och Neisseria gonorrhoeae. Därför kan användningen av PRP har potential att förhindra infektion och minska behovet av kostsamma postoperativ behandling av implantat-infektioner.
Introduction
Implantat-associerad infektion är en signifikant klinisk komplikation. Staphylococcus aureus (S. aureus) är en av de vanligaste mikroorganismer som isolerats från implantat-associerade infektioner. Det är kapabel att producera en biofilm som täcker ytorna av implantat och kan leda till antibiotika-resistenta infektioner 1,2. Behandling av implantat-associerade infektioner kräver ofta långvarig sjukhusvård för upprepade debridements och långvarig parenteral antibiotikabehandling. I antibiotikaresistenta fall kan avlägsnande av implantatet vara nödvändig. Den ökande bakteriers resistens mot antibiotika har också hänvisat till Centers for Disease Control and Prevention (CDC) som "en av världens mest akuta hälsoproblem." Med tiden utan att utveckla nya och effektiva antimikrobiella behandlingar, är det möjligt att multiresistenta patogener är behandlingsbart med konventionella antibiotika. Förebyggande av implantat-associeradeinfektion är därför viktigt och nya profylaktiska medel eller metoder behövs för att förhindra sådana infektioner.
Blodplättsrik plasma (PRP) är en koncentration av autologt blod som innehåller över 30 tillväxtfaktorer som kan hjälpa till med ben och bentransplantat helande 3-5. Tillämpningen av PRP för att förbättra benuppbyggnad och mjukvävnad mognad har alltmer rapporterats i kliniker på grund av dess höga koncentration av olika tillväxtfaktorer som frisätts av trombocyter.
Flera egenskaper hos PRP indikerar att PRP även kan ha antimikrobiella egenskaper 6-9. PRP innehåller ett stort antal blodplättar, en hög koncentration av leukocyter (som kan ha värd-försvar åtgärder mot bakterier och svampar), och flera antimikrobiella peptider 7,8,10. I en nyligen genomförd studie av en stor kohort av hjärt kirurgiska patienter visade det sig att intraoperativ användning av PRP-gel under tillslutning av sår betyär markant minskade förekomsten av ytlig och djup bröstbenet infektion 11. Av dessa skäl och observationer, hypotes vi att PRP, förutom de väl studerade läkande-främjande egenskaper har antimikrobiella egenskaper. De potentiella fördelarna med att använda PRP för att förhindra infektion kan innefatta: (i) PRP är mindre troligt att framkalla resistens jämfört med konventionella antibiotikabehandlingar. (Ii) PRP har också egenskaper som främjar läkning, som kan ha en synergistisk effekt på infektionsbekämpning, PRP helande-främja egenskaper kan ge en tätning för att förhindra bakteriell infästning därigenom minska oddsen för infektion som patogener och mänskliga celler racing för implantatytor 12 , 13. (Iii) PRP är i sig biokompatibel och säker och fri från risken för smittsamma sjukdomar.
Vårt långsiktiga mål är att använda PRP som en ny strategi för att förhindra implantat-associerade infections. Syftet med denna studie var att förbereda PRP med en dubbelt centrifugering tillvägagångssätt att undersöka PRP s in vitro antimikrobiella egenskaper, och beskriva protokollen för utvärdering av sådana antimikrobiella egenskaper.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning och aktivering av PRP
1,1 blodprovstagning
- Söva kaninen genom inandning av isofluran (2% i O 2 för induktion och 1% för underhåll).
- Rita 2 ml 0,129 M tri-natriumcitrat (en anticoagulent lösning) i en 20 ml spruta. Tri-natriumcitrat-lösning framställs genom att lösa 1,897 g trinatriumcitrat i 50 ml destillerat H 2 O och filtrering med en 0,22 um sterilt filter.
- Sterilisera kaninörat användning av 70% etanol.
- Dra blod (t.ex. 5 ml) från kanin öronvenen via en fjärilsnål (25 G) är ansluten till sprutan.
- Blanda blodet med trinatriumcitrat-lösning genom försiktig omrörning. Volymen mellan blod och tri-natriumcitrat-lösning är 9:1.
1,2 PRP preparatet (figur 1)
- Överför antikoagulerat blod till en 50 ml centrifugrör av plast. Tag en alikvot av 10 plblod för att bestämma räkna baslinjen blodplättar med hemocytometry.
- Centrifugera blodet vid 300 xg under 10 minuter vid rumstemperatur (RT) i en centrifug med en swing-out-rotor. Ställ acceleration och broms hastighet till låg (figur 1).
- Efter centrifugering av blodet separeras i tre skikt. Det undre skiktet är huvudsakligen röda blodkroppar, är det mellersta skiktet (vanligtvis kallat "buffy coat") bestående av koncentrerade trombocyter och leukocyter, och det övre skiktet är huvudsakligen plasma, vilket är vätskekomponenten av blod och trombocyter ( Figur 1). Försiktigt transportera centrifugröret till en cellkultur huva, inte störa skikten. Överför alla plasma, buffy coat och 2-3 mm tjock röda blodkroppar lager i en 15 ml plaströr med en 1 ml plast pipett.
- Centrifugera överförda provet en andra gång vid 3.000 x g under 15 min vid RT. Det övre skiktet (supematant) anses trombocytfattig plasma (PPP) ettd överförs till ett nytt rör.
- Erhålla PRP genom att justera blodplättskoncentration i det återstående blodprovet med PPP för att erhålla 2,0 x 10 6 trombocyter / pl (bestämd genom hemocytometry).
1,3 PRP aktivering
- Bered PRP aktivering lösning genom upplösning 5.000 lU bovint trombin med 5 ml 10% kalciumklorid till arbetskoncentration av 1.000 lU / ml.
- Tillsätt aktiveringen lösningen till PRP och PPP, och blanda lösningen genom upprepad pipettering för att bilda PRP-och PPP-geler. Volymförhållandet mellan aktiveringen lösningen till PRP eller PPP är 1:4.
2. In vitro Antimikrobiell Test av PRP Använda Kill Curve analys (figur 2)
- Med en steril inokulering slinga lägga till flera kolonier av S. aureus från dess natten plattkultur i 5 ml Mueller Hinton-buljong (MHB) i ett plaströr. Skaka snabbt och sedan inkubera provet i 2 timmar vid 37 ° C. Nästa, Den optiska densiteten av de bakteriella mediet bestämdes med användning av en spektrofotometer och justerades till en optisk densitet lika med ~ 1 x 10 8 CFU / ml baserat på den förutbestämda standardkurva.
- Gör en 100x utspädning med PBS för att erhålla 1 x 10 6 CFU / ml och placera inoculums på is.
- Ställ in och märka sterila, engångs 5 ml rund-bottnade polystyrenrör, och framställa följande prov grupper som anges i tabell 1 för en slutlig volym av 2 ml i varje rör.
- Lägg PRP, PPP, eller PBS först till polystyrenrör, följt av trombinlösningen för aktivering (gelbildning). Lägg sedan MHB och S. aureus inoculums (1 x 10 6 CFU / ml) för att erhålla den slutliga koncentrationen av 1 x 10 5 CFU / ml.
- Inkubera rören vid 37 ° C med orbital omrörning vid 150 varv per minut.
- Vid förutbestämda tidpunkter (t.ex. 0, 1, och 2 timmar), blanda lösningarna i varje rör genom upprepad pipettering (dettasteg är viktigt eftersom bakterier kan fastna inne i PRP-gel). Tag 10 ul av prov, späd seriellt med steril 0,9% saltlösning, och pipettera en 100 pl alikvot av varje spädning till en tryptisk soja-agar (TSA, med 5% fårblod) platta för CFU räkning.
- Kultur agarplattorna natten vid 37 ° C, sedan räkna och registrera plattan kolonierna. Plot data på en logarithimic skala med tiden (h) på x-axeln och CFU / ml på y-axeln.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
PRP är reproducerbart med användning två gånger centrifugering strategi (Figur 1). PRP visar sig utgöra stark (upp till 100-faldig minskning i CFU) in vitro antimikrobiella egenskaper mot meticillinresistent S. aureus (MRSA) (Figur 3), som vanligen finns på sjukhus över hela världen 14. Likaså, har PRP starka antimikrobiella egenskaper mot meticillin känslig S. aureus (MSSA), grupp A-streptokocker, och Neisseria gonorrhoeae.
Den dubbla centrifugering tillvägagångssätt gör förvärvet av PRP med samma blodplättskoncentration (dvs 2,0 x 10 6 trombocyter / ul) men koncentrerad (~ 10 gånger över baslinjen i blod, Figur 4) och tillåter oss att få konsekventa antimikrobiella fynd, inga signifikanta skillnader i CFU fynd bland PRP från olika enskilda djur (dvs.kaniner) har observerats.
| Grupper | PRP / PPP / PBS | MHB | MRSA inokulatet |
| Kontroll | Inga | 1.800 ul | 200 pl |
| Kontroll | Inga | 2.000 ul | Inga |
| Kontroll | PBS + trombin (200 pl) | 1.600 ul | 200 pl |
| PPP | PPP + trombin (200 pl) | 1.600 ul | 200 pl |
| PRP | PRP + trombin (200 pl) | 1.600 ul | 200 pl |
Tabell 1. Experimentella prover för antimikrobiell utvärdering av PRP.
Figur 1. PRP preparat med användning av en två gånger centrifugeringsförfarande. (A) Första centrifugering. Efter den första centrifugeringen, är tre skikt bildade, och de två översta skikten (dvs. plasma och buffy coat skikten) och 2-3 mm i bottenskiktet (dvs. röda blodkroppar skikt) överförs till en andra steril centrifugrör. (B) Den andra centrifugering. Efter den andra centrifugeringen, är det övre skiktet överfördes till ett nytt sterilt rör och betecknades som PPP. Resterande justeras med PPP till en blodplättskoncentration av 2,0 x 10 6 trombocyter / pl och betecknas som PRP.
Figur 2. Experimentell uppställning för bedömning av antimikrobiella properties av PRP med döda kurvan analysen. Först PRP eller PPP till provrören, och omedelbart aktiveras med trombin-lösning. Därefter MHB följt av bakteriella inoculums. Alikvoter av prover tagna vid olika tidpunkter och ströks för CFU räknas.
Figur 3. PRP, PPP, eller PBS placerades i en steril 5 ml polystyrenrör tillsammans med trombin, MHB buljong, och MRSA ymp och inkuberades sedan vid 37 ° C med orbital omrörning vid 150 varv per minut. Vid förutbestämda tidpunkter (dvs. 1 och 2 hr), är alikvoter av prover och ströks för CFU räknas. (A) CFU data och (B) representativa bilder platta vid 10 -2 spädning. Signifikant minskning (~ 100-faldigt vid 2 timmar) av MRSA tillväxten erhålls using PRP jämfört med PPP och PBS-kontroller. Detta gäller för bakterier som MSSA, grupp A-streptokocker, och Neisseria gonorrhoeae också.
Figur 4. Blodutstryk av helblod (vänster) och PRP (höger). PRP framställda från två gånger centrifugeringen metoden har ~ 10 gånger antalet blodplättar jämfört med helblod.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Trombocytrik plasma har blivit allt vanligare för kliniska tillämpningar på grund av dess läkande-främjande egenskaper 15-17. I den aktuella studien har PRP presenteras som en ny strategi för infektionsbekämpning. PRP befanns ha starka antimikrobiella egenskaper mot MRSA, MSSA, grupp A-streptokocker, och Neisseria gonorrhoeae. De stora fördelarna med PRP, jämfört med konventionella antibiotikabehandlingar för infektionsbekämpning inkluderar: (1) Aktuella antibiotika behandlingar står inför utmaningar, bland annat allt rapporterade antibiotikaresistens 14,18-20. PRP kan vara ett avancerat alternativ eftersom (i) PRP s blodplättar mikrobicida proteiner kan ha kemotaktiska egenskaper för immunceller såsom neutrofiler, monocyter och T-celler som spelar en viktig roll i försvaret mot patogener invasion 21, och (ii) jämfört med konventionella antibiotika, trombocyt mikrobicida proteiner är mindre benägna att inducing bakteriell resistens på grund av svårigheten att ändra bakteriella membranstrukturer 22. (2) PRP inte bara minskar infektioner utan också främjar sårläkning, båda är kostsamma i termer av trauma, tid och pengar.
PRP har nyligen rönt ökat intresse. Det finns dock många komplexa variationer bland PRP förberedelse protokoll inklusive start antalet blodplättar, användning av antikoagulantia, införandet av leukocyter, och användningen av aktivatorer 23-27. Variationen i PRP preparatet bidrar delvis kontroversiella resultat både i djur och kliniska studier 28. Som ett resultat, är en stor fråga för PRP studier att styra variationen. I den aktuella studien har en dubbelt centrifugering strategi genomförs och blodplättskoncentration av PRP fastställdes till 2 x 10 6 trombocyter / pl (cirka 10 gånger högre än baslinjen i blodet) för att standardisera PRP preparatet protokollet och att begränsa variationeni PRP preparatet. Den dubbla centrifugering presenterade tillvägagångssättet är enkelt, kan lätt tillämpas för isolering av PRP från blod från andra djur och människor, och har lett till konsekvent in vitro antimikrobiella egenskaper kanin PRP i föreliggande studie. Dock kan skillnader fortfarande eftersom tillväxtfaktorer och andra kemikalier inom eller ut från trombocyter kan variera mellan enskilda celler och djur, vissa cellpopulationer (t.ex. leukocyt) inte kontrolleras. Observera att leukocyt-rika PRP framställdes och användes i denna studie, eftersom leukocyter är involverade i direkt bakteriedödande och antigen-specifikt immunsvar. Protokollen kan ytterligare modifieras för att erhålla leukocyt-fattiga PRP genom att utföra en andra centrifugering av endast det översta lagret (dvs. plasma och blodplättar parti) efter den första centrifugeringen (figur 1).
I denna studie, var 50 ml helblod som används för att erhålla ca 5 ml PRP. Om blodvolym är ett problem, kan poolade blod från flera djur som skall användas för att framställa PRP. Om blodproppar bildas under blodprovstagning och / eller centrifugering, troligen vissa blodplättar aktiveras vilket resulterar i låg blodplättar utbyte. Därför tillräckliga antikoagulantia och mjuka men omsorgsfull blandning är viktiga steg för en framgångsrik PRP isolering.
PRP aktiverades med trombin i föreliggande studie. Andra metoder, bland kalciumklorid, exogen eller autolog trombin med eller utan kalciumklorid, mekanisk påfrestning (ytterligare höghastighetscentrifugering), och batroxobin kan också tillämpas för PRP aktivering 29-32. Observera att blodplättar aktiveras av trombin sannolikt kan släppa sina granulat innehåll mycket snabbare än trombocyter aktiveras av andra kemikalier. Orsaken är att, förutom dess förmåga att omvandla faktor XI till Xla, VIII till VIIIa, V till Va och fibrinogen till fibrin, kan trombin främja trombocytaktivering och aggregation via enctivation av proteas-aktiverade receptorer på blodplättar cellmembran 33-35.
The Kill kurvan analysen presenterades för att bedöma in vitro antimikrobiell aktivitet av PRP. Till skillnad från agar disken diffusionsanalys tillåter döda kurvan analysen kvantitativ bedömning av graden av bakteriedödande aktivitet över tiden. Ett kritiskt steg för att korrekt sprida bakterier när räknar CFU är att blanda hela kulturen noggrant genom kraftig pipettering innan provet dras och virvlas för seriespädningar, som PRP gel kan förväxla en förmåga att korrekt sprida bakterier.
Sammantaget, blodplättsrik plasma har starka antimikrobiella egenskaper mot bakterier såsom S. aureus, grupp A-streptokocker, och Neisseria gonorrhoeae. Förutom de väl studerade läkande-främjande egenskaper kan PRP fungera som en ny strategi för att förhindra implantat-associerade infektioner. Mekanismen för PRP: s antimikrobiella egenskaper är stills okända och ytterligare undersökningar inom detta område behövs.
Begränsningarna av denna studie bland annat att PRP inte helt eliminera bakterierna under våra experimentella betingelser (1 x 10 5 CFU / ml). Detta kan bero på den höga virulensen hos våra kliniska bakteriestammar som användes, 1 x 10 2 CFU (0,1 ml) av S. aureus inducerad svåra infektioner in vivo 36-38. Alternativt kan mängden av PRP ökas för att uppnå bättre bakteriell eliminering eller PRP kan användas tillsammans med systemisk eller lokal administration av konventionella antibiotika för infektionsbekämpning, de dubbla effekter (dvs. antimikrobiella och helande-främjande egenskaper) hos PRP kan vara fördelaktigt att främja läkning och samtidigt förhindra infektion. En annan begränsning är att PRP inte bör användas till patienter som redan varit systemiskt infekterade (t.ex. sepsis patienter). Detta är eftersom bakterier i blodet kan passeraed på från PRP till appliceringsstället såvida inte lämpliga steriliseringstekniker tillämpas. Vi rekommenderar noggrann undersökning av möjliga bakteriella föroreningar i PRP före dess användning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Författarna tackar Therwa Hamza, John E. Tidwell, Nina Clovis, och Suzanne Smith för experimentell stöd och Suzanne Smith för korrekturläsning. Författarna tackar också John Thomas, PhD för att ge de bakteriella kliniska isolat och John B. Barnett, PhD för hans stöd och användningen av den biologiska säkerheten labbet vid institutionen för mikrobiologi, immunologi och cellbiologi vid West Virginia University. Författarna erkänner ekonomiskt stöd från Osteosyntesmaterial och Trauma Care Foundation och National Science Foundation (# 1.003.907). Mikroskop experiment och bildanalys utfördes också i West Virginia University Imaging Facility, som stöds delvis av Mary Babb Randolph Cancer Center och NIH bidrag P20 RR016440.
Djur används för blod drar godkändes av West Virginia University Institutional Animal Care och användning kommittén. Alla experiment utfördes i enlighet med alla relevanta guidelines, förordningar och tillsynsmyndigheter.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bovine thrombin | King Pharmaceuticals, Inc | 60793-215-05 | Thrombin (bovine origin) |
| Calcium chloride | King Pharmaceuticals, Inc | 60793-215-05 | 10% calcium chloride |
| Ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Mueller Hinton broth | Becton, Dickinson and Company | 275710 | |
| Phosphate-buffered saline | Sigma-Aldrich | D8662 | |
| Tri-sodium citrate | Sigma-Aldrich | W302600 | |
| Tryptic soy agar | Fisher Scientific | R01202 | |
| Centrifuge | Kendro Laboratory Products | 750043077 | |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RS |
References
- Gristina, A. G. Biomaterial-centered infection: microbial adhesion versus tissue integration. Science. 237, 1588-1595 (1987).
- Gristina, A. G., Costerton, J. W. Bacterial adherence to biomaterials and tissue. The significance of its role in clinical sepsis. J. Bone Joint Surg. Am. 67, 264-273 (1985).
- Everts, P. A., et al. Reviewing the structural features of autologous platelet-leukocyte gel and suggestions for use in surgery. Eur. Surg. Res. 39, 199-207 (2007).
- Marx, R. E. Platelet-rich plasma (PRP): what is PRP and what is not PRP. Implant. Dent. 10, 225-228 (2001).
- Toscano, N., Holtzclaw, D. Surgical considerations in the use of platelet-rich plasma. Compend. Contin. Educ. Dent. 29, 182-185 (2008).
- Cieslik-Bielecka, A., Gazdzik, T. S., Bielecki, T. M., Cieslik, T. Why the platelet-rich gel has antimicrobial activity? Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 103, 303-306 (2007).
- Yeaman, M. R. The role of platelets in antimicrobial host defense. Clin. Infect. Dis. 25, 951-970 (1997).
- Tang, Y. Q., Yeaman, M. R., Selsted, M. E. Antimicrobial peptides from human platelets. Infect Immun. 70, 6524-6533 (2002).
- El-Sharkawy, H., et al. Platelet-rich plasma: growth factors and pro- and anti-inflammatory properties. J. Periodontol. 78, 661-669 (2007).
- Krijgsveld, J., et al. Thrombocidins, microbicidal proteins from human blood platelets, are C-terminal deletion products of CXC chemokines. J. Biol. Chem. 275, 20374-20381 (2000).
- Trowbridge, C. C., et al. Use of platelet gel and its effects on infection in cardiac surgery. J. Extra Corpor. Technol. 37, 381-386 (2005).
- Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. Infections from biomaterials and implants: a race for the surface. Med. Prog. Technol. 14, 205-224 (1988).
- Subbiahdoss, G., Kuijer, R., Grijpma, D. W., vander Mei, H. C., Busscher, H. J. Microbial biofilm growth vs. tissue integration: "the race for the surface" experimentally studied. Acta Biomater. 5, 1399-1404 (2009).
- Klevens, R. M., et al. Invasive methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections in the United States. JAMA. 298, 1763-1771 (2007).
- Foster, T. E., Puskas, B. L., Mandelbaum, B. R., Gerhardt, M. B., Rodeo, S. A. Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications. Am. J. Sports Med. 37, 2259-2272 (2009).
- Carlson, N. E., Roach, R. B. Platelet-rich plasma: clinical applications in dentistry. J. Am. Dent. Assoc. 133, 1383-1386 (2002).
- Man, D., Plosker, H., Winland-Brown, J. E. The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel) and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue) in cosmetic surgery. Plast. Reconstr. Surg. 107, 229-237 (2001).
- Fridkin, S. K., et al. Epidemiological and microbiological characterization of infections caused by Staphylococcus aureus with reduced susceptibility to vancomycin, United States, 1997-2001. Clin. Infect. Dis. 36, 429-439 (1997).
- Jackson, C. R., Fedorka-Cray, P. J., Davis, J. A., Barrett, J. B., Frye, J. G. Prevalence, species distribution and antimicrobial resistance of enterococci isolated from dogs and cats in the United States. J. Appl. Microbiol. 107, 1269-1278 (2009).
- Murray, C. K., et al. Recovery of multidrug-resistant bacteria from combat personnel evacuated from Iraq and Afghanistan at a single military treatment facility. Mil. Med. 174, 598-604 (2009).
- Durr, M., Peschel, A. Chemokines meet defensins: the merging concepts of chemoattractants and antimicrobial peptides in host defense. Infect Immun. 70, 6515-6517 (2002).
- Hancock, R. E. Peptide antibiotics. Lancet. 349, 418-422 (1997).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechnol. 27, 158-167 (2009).
- Kalen, A., Wahlstrom, O., Linder, C. H., Magnusson, P. The content of bone morphogenetic proteins in platelets varies greatly between different platelet donors. Biochem. Biophys. Res. Commun. 375, 261-264 (2008).
- Weibrich, G., Kleis, W. K., Hafner, G., Hitzler, W. E. Growth factor levels in platelet-rich plasma and correlations with donor age, sex, and platelet count. J. Craniomaxillofac. Surg. 30, 97-102 (2002).
- Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal. Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox Sang. 97, 110-118 (2009).
- Lei, H., Gui, L., Xiao, R. The effect of anticoagulants on the quality and biological efficacy of platelet-rich plasma. Clin. Biochem. 42, 1452-1460 (2009).
- Redler, L. H., Thompson, S. A., Hsu, S. H., Ahmad, C. S., Levine, W. N. Platelet-rich plasma therapy: a systematic literature review and evidence for clinical use. Phys. Sportsmed. 39, 42-51 (2011).
- Whitman, D. H., Berry, R. L., Green, D. M. Platelet gel: an autologous alternative to fibrin glue with applications in oral and maxillofacial surgery. J. Oral Maxillofac. Surg. 55, 1294-1299 (1997).
- Anitua, E. Plasma rich in growth factors: preliminary results of use in the preparation of future sites for implants. Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 14, 529-535 (1999).
- Whitman, D. H., Berry, R. L. A technique for improving the handling of particulate cancellous bone and marrow grafts using platelet gel. J. Oral. Maxillofac. Surg. 56, 1217-1218 (1998).
- Currie, L. J., Sharpe, J. R., Martin, R. The use of fibrin glue in skin grafts and tissue-engineered skin replacements: a review. Plast. Reconstr. Surg. 108, 1713-1726 (2001).
- Nikulin, A. A. Effect of calcium, thrombin and nucleotides (ADP, cAMP, cGMP) on blood platelet glycolysis and energy metabolism. Farmakol. Toksikol. 43, 585-590 (1980).
- Hantgan, R. R., Taylor, R. G., Lewis, J. C. Platelets interact with fibrin only after activation. Blood. 65, 1299-1311 (1985).
- Hantgan, R., Fowler, W., Erickson, H., Hermans, J. Fibrin assembly: a comparison of electron microscopic and light scattering results. Thromb. Haemost. 44, 119-124 (1980).
- Li, B., Jiang, B., Boyce, B. M., Lindsey, B. A. Multilayer polypeptide nanoscale coatings incorporating IL-12 for the prevention of biomedical device-associated infections. Biomaterials. 30, 2552-2558 (2009).
- Li, B., Jiang, B., Dietz, M. J., Smith, E. S., Clovis, N. B., Rao, K. M. K. Evaluation of local MCP-1 and IL-12 nanocoatings for infection prevention in open fractures. J. Orthop. Res. 28, 48-54 (2010).
- Boyce, B. M., Lindsey, B. A., Clovis, N. B., Smith, E. S., Hobbs, G. R., Hubbard, D. F., Emery, S. E., Barnett, J. B., Li, B. Additive effects of exogenous IL-12 supplementation and antibiotic treatment in infection prophylaxis. J. Orthop. Res. 30 (2), 196-202 (2012).
