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Medicine

उच्च नमक आहार और लुईस चूहा में क्रोनिक किडनी रोग प्रेरित करने के लिए नाइट्रिक ऑक्साइड synthase निषेध के साथ संयोजन में 5/6th nephrectomy

Published: July 3, 2013 doi: 10.3791/50398
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Nephrology & Hypertension, University Medical Center Utrecht

Summary

शल्य चिकित्सा गुर्दे जन की 5/6th निकाल कर लुईस चूहे में क्रोनिक किडनी रोग (सीकेडी) की स्थापना के लिए एक दो चरण विधि का वर्णन किया है. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के संयोजन, ओपन स्कूल निषेध और एक उच्च नमक आहार कारण तंत्र और उपन्यास उपचारात्मक उपायों के विकास के अध्ययन के लिए अनुमति देता है, मानव सीकेडी जैसी एक मॉडल की ओर जाता है.

Introduction

इसके प्रगतिशील प्रकृति, आगामी अंतिम चरण गुर्दे की बीमारी, और संबद्ध हृदय रुग्णता और मृत्यु दर के कारण, सीकेडी एक से बढ़ सार्वजनिक स्वास्थ्य समस्या है 1. सीकेडी प्रगति को धीमा इसलिए एक प्रमुख स्वास्थ्य प्राथमिकता है. सीकेडी homeostasis के जटिल derangements की विशेषता है के बाद से, एकीकृत पशु मॉडल सीकेडी के विकास और प्रगति का अध्ययन करने के लिए आवश्यक हैं. गुर्दे एक दूसरे के साथ बातचीत है कि विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं का एक व्यापक रेंज शामिल हैं. इस जटिलता इन विट्रो में मजाक उड़ाया जा सकता.

सीकेडी में उपन्यास उपचारात्मक उपायों का अध्ययन करने के लिए, हम मानव सीकेडी 2,3 के कई पहलुओं जैसी 5/6th nephrectomy पृथक मॉडल, प्रगतिशील गुर्दे की बीमारी के एक प्रसिद्ध प्रयोगात्मक मॉडल का उपयोग करें. गुर्दे मास में सकल कमी प्रगतिशील केशिकागुच्छीय और tubulo-बीचवाला चोट, शेष नेफ्रॉन के नुकसान और प्रणालीगत और केशिकागुच्छीय उच्च रक्तचाप के विकास का कारण बनता है. यह कार्यक्रम के साथ जुड़ा हुआ हैessive intrarenal केशिका हानि 4, सूजन और ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस. के लिए जोखिम कारक हमेशा endothelial समारोह 5 पर प्रभाव सीकेडी. हम सीकेडी के विकास के लिए अपेक्षाकृत प्रतिरोधी है कि एक चूहा तनाव (लुईस) का इस्तेमाल किया है और इसलिए हम नाइट्रिक ऑक्साइड (सं) रिक्तीकरण 6, 7, 8 और एक उच्च नमक आहार 9 के साथ गुर्दे जन की 5/6th को हटाने संयुक्त. आगमन और acclimatization के बाद, जानवरों के दो दिनों के बाद एल NNA की निरंतरता के साथ सही तरफा uninephrectomy (UNX) के बाद 4 सप्ताह की अवधि के लिए पीने का पानी (20 मिलीग्राम / एल) के लिए पूरक एक सं सिन्थेज़ अवरोध करनेवाला (एल NNA), प्राप्त . एक सप्ताह बाद, गुर्दे जन के 2/3rds के योग nephrectomy (SNX) यानी हटाने के बाईं ओर पर किया जाता है. SNX बाद, जानवरों 4 सप्ताह की अवधि के लिए पीने के पानी में 20 मिलीग्राम / एल LNNA द्वारा फिर से पीछा 2 दिनों के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दी जाती है. जमीन चाउ (समय रेखा चित्रा 1 देखें) में पूरक एक उच्च नमक आहार (6%), प्रयोग के दौरान जारी रखा है. टीवह सही पक्ष पर UNX प्रदर्शन करने के कारण और बाईं ओर SNX गुर्दे वाहिकाओं यह आसान गुर्दे शरीर के बाहर सामने आ रहा है जब बहुत अधिक जहाजों को खींचने के बिना गुर्दे तक पहुँचने के लिए बनाता है जो बाईं ओर रह रहे हैं . साहित्य में, मॉडल एक सप्ताह बाद 10,11,12 सही गुर्दे की UNX द्वारा पीछा किया, बाएं गुर्दे के खंभे पहले हटा रहे हैं, जिनमें से वर्णित हैं. हमारे हाथ में इस मॉडल गुर्दे की विफलता का एक और अधिक तेजी से विकास से पता चला है, लेकिन यह भी गुर्दे समारोह के नुकसान में एक बहुत बड़ी भिन्नता. गुर्दे की विफलता की प्रगति प्लाज्मा यूरिया, सिस्टोलिक रक्तचाप और प्रोटीनमेह मापने के द्वारा समय के साथ पीछा किया जाता है. SNX के बाद छह सप्ताह तक, गुर्दे की विफलता, विकसित की है glomerular निस्पंदन दर में उल्लेखनीय कमी (69%) और प्रभावी गुर्दे प्लाज्मा प्रवाह (62%) 13 उच्च रक्तचाप (सिस्टोलिक रक्तचाप> 150 एमएमएचजी), प्रोटीनमेह (द्वारा विशेषता> 50 mg/24 घंटा) और हल्के यूरीमिया (> 10 मिमी). ऊतकीय सुविधाओं tubul शामिलO-बीचवाला क्षति सूजन, ट्यूबलर शोष और फाइब्रोसिस और शेष आबादी (<10%) के भीतर स्वस्थ ग्लोमेरुली की भारी कमी के लिए अग्रणी फोकल ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस से परिलक्षित होता है. अनुवर्ती 12 सप्ताह के बाद जब तक SNX उपचारात्मक उपायों के मूल्यांकन के लिए अवसर की एक खिड़की प्रदान करने, सीकेडी की आगे की प्रगति को दर्शाता है.

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Protocol

सभी प्रयोगों उट्रेच प्रयोगात्मक पशु समिति के पशु प्रयोगात्मक नैतिक गाइड लाइन के अनुसार क्रियान्वित कर रहे हैं. प्रोटोकॉल लेखक की संस्था के जानवरों की देखभाल और उपयोग समिति के मार्गदर्शन और अनुमोदन के तहत किया जाता है.

सीकेडी 8 सप्ताह की उम्र में पुरुष जन्मजात लुईस चूहों (चार्ल्स नदी, Sulzfeld, जर्मनी) में प्रेरित किया है. चूहे एक प्रकाश, तापमान और आर्द्रता नियंत्रित वातावरण में मानक परिस्थितियों में रखे जाते हैं.

1. सर्जरी तैयारी

  1. शल्य चिकित्सा उपकरणों जीवाणुरहित:
    • 1 छात्र ऊतक 1-2 दांत 12 सेमी संदंश
    • 1 छात्र मानक पैटर्न संदंश
    • 2 Semken संदंश
    • 1 मेयो कैंची
    • 1 छात्र आईरिस कैंची
    • कैंची से 1 ऑलसेन-Hegar सुई धारक
    • कंबल
  2. सूची की सूची की जाँच करें:
    • वार्मिंग पैड और दीपक के साथ तालिका आपरेटिंग
    • हे
    • टिश्यूज
    • रेज़र
    • लीब्रा
    • बाँझ ऑपरेटिंग सेट
    • बाँझ धुंध 5x5 और 10x10
    • 70% शराब
    • 0.9% NaCl समाधान
    • 1 मिलीलीटर सिरिंज
    • सुई (25G)
    • जेल फोम पैड: spongostan
    • Vicryl 4.0 और 5.0
    • Buprenorphine 0.03 मिलीग्राम / किग्रा (1:10 शारीरिक नमक में पतला)
    • सर्जरी के बाद चूहों के लिए स्वच्छ पिंजरे

2. राइट साइड Uninephrectomy

  1. 70% शराब के साथ तालिका कीटाणुरहित.
  2. जगह प्रेरण बॉक्स में चूहे और 4% isoflurane और ओ 2 का 1 लीटर प्रवाह के साथ संज्ञाहरण प्रेरित. नोट: प्रयुक्त चूहा तनाव पर निर्भर करता है, पूर्व और perioperative एनलजेसिया निर्धारित कर रहे हैं, स्थानीय पशु चिकित्सक के साथ चर्चा करने के लिए इस की जरूरत है.
  3. कोन में मेज और जगह नाक को चूहे स्थानांतरण. चूहे और नाक शंकु चूहे के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए एक हीटिंग पैड पर रखा जाता है. चूहा मैंएस ओ 2 isoflurane और 1 लीटर 2% की एक मिश्रण के साथ हवादार.
  4. चूहे की ओर दाढ़ी और शराब के साथ कीटाणुरहित. धो और कीटाणुरहित हाथ और बाँझ सर्जिकल दस्ताने पहनते हैं. एक सिर की टोपी और एक मुखौटा पहन लो. एक 1 बनाओ - 1.5 सेमी चीरा समानांतर संरचनात्मक संदंश और कुंद कैंची का उपयोग पसलियों के लिए. पीठ की मांसपेशियों की कुंद विच्छेदन से गुर्दे बेनकाब.
  5. गुर्दे के निचले पोल दिख रहा है, ध्यान से perirenal वसा ऊतक पकड़ के लिए छोटे कुंद संदंश का उपयोग करें. धीरे संदंश के साथ perirenal वसा पर खींच कर गुर्दा अमल में लाना. इस प्रक्रिया के दौरान अधिवृक्क ग्रंथि को परेशान नहीं करने के लिए ध्यान रखना. अधिवृक्क ग्रंथि को आसानी से वसा ऊतकों में औसत दर्जे का स्थल पर एक संदंश रखकर हटा दिया और धीरे अधिवृक्क ग्रंथि और चित्रा 2 में दिखाया गया के रूप में गुर्दे के बीच ऊपर की तरफ ले जाया जा सकता है.
  6. धुंध और वसा और संयोजी ऊतक आसपास के स्पष्ट पर धीरे गुर्दे रखें. गुर्दे की धमनी और शिरा को पहचानें और एक संयुक्ताक्षर (5.0 जगहvicryl) जहाजों के चारों ओर एक एक गांठ के साथ, लेकिन परिणय सूत्र में बंधना नहीं है.
  7. गुर्दे और गाँठ के बीच जगह बनाने के लिए, लगभग 0.5 सेमी से महाधमनी की ओर जहाजों के साथ सावधानी से ढीली गाँठ ले जाएँ. यह काटने के बाद बंद फिसल से संयुक्ताक्षर को रोकने के लिए किया जाता है.
  8. दो डबल गांठ के साथ गाँठ बाँध. छिड़काव रुका है, तो गुर्दे का रंग तुरंत भूरे रंग के लिए बदल जाएगा. संयुक्ताक्षर के सिरों में कटौती न करें.
  9. गुर्दे के करीब गुर्दे जहाजों कट और गुर्दे को हटा दें. धीरे गुर्दे जहाजों का खून बह रहा है के लिए जाँच करने के लिए संयुक्ताक्षर की लंबी सिरों पर पुल. संयुक्ताक्षर पोत पर जगह में रहना चाहिए. संयुक्ताक्षर के लंबे समय समाप्त होता है कट. नोट, शेष गुर्दे जहाजों तुरंत उदर गुहा में वापस लेना होगा.
  10. ब्लाट excised गुर्दे सूखी और यह वजन.
  11. Vicryl 5.0 के साथ टांके चलाने के साथ कंकाल की मांसपेशी चीरा बंद करें. पिछले अंग में 0.10 मिलीग्राम (0.03 मिलीग्राम / किग्रा) buprenorphine IM के इंजेक्षन. बंद करेंintracutaneous टांके साथ Vicryl 4.0 के साथ त्वचा. यह घाव खोलने से चूहों को रोकता है. नोट: लुईस चूहों में श्वसन अवसाद के कारण, हम केवल अभी isoflurane के बंद होने से पहले पोस्ट ऑपरेटिव analgesia दे.
  12. भोजन और पानी के लिए आसान पहुँच के साथ एक साफ एकान्त पिंजरे में चूहे घर. वार्मिंग पैड हे / एन पर पिंजरे आधा रखें और ध्यान से चूहा अगले दिन की जाँच करें. घाव को बंद कर दिया और चूहे सर्जरी के बाद 6 और 12 घंटे के बीच आम तौर पर है, जो सक्रिय है जाता है, चूहे ग्रुप हाउसिंग में वापस रखा जा सकता है.

3. बाईं ओर आधा nephrectomy

  1. सात दिन बाद ही तैयारी के रूप में 2.1 से 2.5 से वर्णित सही पक्ष के रूप में बाईं ओर बने हैं. सर्जरी से पहले, सही गुर्दे के वजन का लगभग 2/3rds के लिए इसी हटा दिया जाना चाहिए कि गुर्दे ऊतक की राशि की गणना की जाती है. सर्जरी से पहले जेल फोम के छोटे टुकड़े (Spongostan, जॉनसन एंड जॉनसन, न्यू जर्सी) तैयार करें. बाएं गुर्दे की ऊपरी पोल के आसपास तेज कैंची जगह और एक ही झटके (कैंची स्थान के लिए, चित्रा 3 देखें) में ऊपरी पोल बांटना. जेल फोम का एक टुकड़ा के साथ तुरंत कवर और बाँझ धुंध के साथ हल्के दबाव डालती है.
  2. 3.3 में के रूप में गुर्दे के निचले छोर से दोहराएँ.
  3. त्वचा पर थक्के रोकने के लिए गुर्दे उठा. रक्तस्राव बंद हो जाता है जब तक बाँझ धुंध के साथ जेल फोम पैड दोनों पर हल्के दबाव बनाए रखें. खून बह रहा बनी रहती है, जब एक और फोम पैड जोड़ें.
  4. पेट के अंदर पक्षपाती जेल फोम पैड के साथ शेष गुर्दे रखें. मांसपेशियों और त्वचा को बंद करें और 2.9-2.12 का पालन करें.

4. शाम सर्जरी

  1. शाम संचालित नियंत्रण गुर्दे का पर्दाफाश करने के क्रम में एक ही प्रक्रिया से गुजरना. इसके बजाय गुर्दे extirpating या एक सप्ताह बाद में डंडे काटने की, गुर्दे दोनों अधिवृक्क ग्रंथियों को परेशान करने के लिए नहीं, देखभाल करने के एक सप्ताह के अंतराल पर Decapsulated रहे हैं. घाव बंद और पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल आईडी हैं2.11 और 2.12 के लिए entical.

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Representative Results

योग nephrectomy के बाद, कुल गुर्दे द्रव्यमान का लगभग 1/6th छोड़ दिया है. चित्रा 4 पिछले दो प्रयोगों में मतलब है और मानक विचलन के साथ सही गुर्दे का हटाया भाग के वजन से पता चलता है. एक UNX के बाद सप्ताह में, बाएं गुर्दे की अतिवृद्धि होता है कि दिमाग में रखना चाहिए, यह दर्शाता है कि 5/6th हटाने से भी कम समय में सही गुर्दे हमेशा परिणाम के वजन के आधार पर गणना हटा दिया जाना चाहिए कि वजन. यह सर्जरी के दौरान बाएं गुर्दे का वजन निर्धारित करने के लिए संभव नहीं है हालांकि, बाद से, यह मूल गुर्दे द्रव्यमान का लगभग 5/6th दूर करने के लिए सबसे सही तरीका है.

समय के साथ, सीकेडी के साथ चूहों को उच्च रक्तचाप, यूरीमिया, एनीमिया, प्रोटीनमेह और जीएफआर और ERPF में एक महत्वपूर्ण कमी का विकास. 6 सप्ताह के बाद, स्थापित सीकेडी, बचाव के उपायों का परीक्षण करने के लिए समय बिंदु एक उपयुक्त विकसित की है. समय के साथ, उच्च रक्तचाप और प्रोटीनमेह की मजबूत प्रगति मनाया जाता है, जबकि हेमाटोक्रिटऔर गुर्दे समारोह (जीएफआर और ERPF) हल्के गिरावट (चित्रा 5) दिखा. हम अपने प्रयोगों में पर ध्यान केंद्रित नहीं है कि अन्य लक्षणों में कैल्शियम फॉस्फेट और लिपिड चयापचय में derangements, और कई अन्य शामिल हैं. चूहों के तनाव पर निर्भर करता है, सीकेडी के विकास स्पष्ट रूप से 14, 15, 2 भिन्न हो सकते हैं. हम उच्च नमक आहार और उच्च रक्तचाप और endothelial रोग को उत्पन्न करने के लिए एक अवरोधक नहीं जोड़ा.

गुर्दे की विफलता की प्रगति मूत्र का संग्रह (प्रोटीन और क्रिएटिनिन की मात्रा की माप के लिए), रक्त (प्लाज्मा यूरिया और क्रिएटिनिन) और सिस्टोलिक रक्तचाप से नज़र रखी है. हम टेलीमेटरी के बजाय पूंछ कफ plethysmography का उपयोग करते समय उच्च रक्तचाप की है कि विकास और अधिक ठीक किया जा सकता है एहसास. Creatinine निकासी की गणना की जाती है, लेकिन से गुर्दे समारोह का निर्धारण करने के लिए सोने के मानक विधि के महत्व को रेखांकित कारण चूहों 16 में व्यापक ट्यूबलर क्रिएटिनिन स्राव को GFR में गिरावट को नजरअंदाज करने के लिए जाता किया जा सकता है inulin और पीएएच निकासी 17, 18, ​​19. Koeners एट अल. पूरी प्रक्रिया 20 में वर्णित है. Inulin और पीएएच निकासी मूत्र नमूने में उनकी एकाग्रता (यू), मूत्र प्रवाह दर (वी), और अपने प्लाज्मा एकाग्रता (पी) से गणना कर रहे हैं. इस प्लाज्मा क्रिएटिनिन, प्लाज्मा यूरिया, या creatinine निकासी 13 में परिवर्तन से कम स्पष्ट किया गया था, जबकि हम पहले, क्लासिक निकासी प्रौद्योगिकी का उपयोग कर इस मॉडल में जीएफआर और ERPF की एक उल्लेखनीय कमी देखी गई.

चित्रा 1
चित्रा 1. गुर्दे समारोह और समापन समय बिंदु निर्धारित करने के लिए एल NNA की टाइम लाइन, उच्च नमक आहार, UNX और SNX. अनुदैर्ध्य माप संकेत कर रहे हैं. अब अनुवर्ती जब SNX के बाद की जरूरत है, 6% NaCl आहार समय के साथ जारी रखा जा सकता है.

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चित्रा 2. अधिवृक्क ग्रंथि विच्छेदन. लाल रेखा से संकेत मिलता है के रूप में गुर्दे और अधिवृक्क ग्रंथि और शीर्ष करने के लिए पोत पोल ऊपर की तरफ से इस कदम के बीच में वसा, जगह संदंश यह परेशान बिना अधिवृक्क ग्रंथि को निकालने के लिए. मानव शरीर, 1918 के ग्रे की शारीरिक रचना के 20 वें अमेरिकी संस्करण से अनुकूलित चित्रा.

चित्रा 3
चित्रा 3. आधा nephrectomy. लाल लाइनों के किनारों को काटने का संकेत मिलता है. मानव शरीर, 1918 के ग्रे की शारीरिक रचना के 20 वें अमेरिकी संस्करण से अनुकूलित चित्रा.

चित्रा 4
चित्रा 4. दो अलग प्रयोगों में योग nephrectomy के बाद हटा दिया गुर्दे ऊतक का प्रतिशत. ऍक्स्प 1, n = 16, विस्तार, 2 एन = 23.


सीकेडी चूहों में गुर्दे की विफलता का आंकड़ा 5. विकास 6 सप्ताह SNX के बाद समाप्त (sdashed लाइनों एन = 5) बनाम स्वस्थ नियंत्रण (एन = 5 pdashed लाइनों) और सीकेडी चूहों बनाम स्वस्थ (£ एन = 8) 12 सप्ताह SNX के बाद समाप्त नियंत्रण (• एन = 8). सीकेडी चूहों सप्ताह 1 से 4 सप्ताह और उच्च नमक आहार तक एल NNA प्राप्त समाप्ति (रेखांकन में नहीं दिखाया गया है) तक. SNX जीएफआर (ई) और ERPF (एफ) 13 से उच्च रक्तचाप (tailcuff plethysmography द्वारा मापा) (ए), यूरीमिया (बी), एनीमिया (सी) और प्रोटीनमेह (डी) और उल्लेखनीय कमी लाती है. * Bonferroni रेखांकन ए, बी और डी के बाद परीक्षण के साथ दो तरह से एनोवा द्वारा परीक्षण हर समय बिंदु के लिए पी <0.05 बनाम स्वस्थ नियंत्रण संकेत. रेखाचित्र सी, ई और एफ एक दो पूंछ के साथ परीक्षण कर रहे हैं6 और 12 सप्ताह का समय बिंदु के लिए टी परीक्षण. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

एक उच्च नमक आहार और अस्थायी ओपन स्कूल निषेध के साथ संयुक्त लुईस चूहे में गुर्दे जन के 5/6th के सर्जिकल हटाने मानव सीकेडी जैसा दिखता है कि सीकेडी के एक मॉडल की ओर जाता है और सीकेडी में उपचारात्मक उपायों के कारण तंत्र और प्रभावकारिता के अध्ययन की अनुमति देता है.

5/6th nephrectomy मॉडल सीकेडी के लिए एक अच्छी तरह से जाना जाता है और बड़े पैमाने पर वर्णित मॉडल है. हालांकि, बस गुर्दे जन की 5/6th हटाने सब चूहे उपभेदों में तत्काल गुर्दे की विफलता के लिए नेतृत्व नहीं करता है. हम + GFP लुईस चूहों 21 की उपलब्धता के रूप में सीकेडी में सेल आधारित चिकित्सा के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए लुईस चूहों उपयोग प्राप्तकर्ता में प्रशासित दाता कोशिकाओं के सेल ट्रैकिंग (nonGFP) चूहे की अनुमति देता है. लुईस चूहा धीमी अन्य उपभेदों 22, 15 की तुलना में गुर्दे की चोट और सीकेडी के विकास के विकास के लिए अपेक्षाकृत प्रतिरोधी है. इस मानव सीकेडी के कई पहलुओं जैसा दिखता है इसलिए हम कोई कमी और एक उच्च नमक आहार के साथ गुर्दे जन की 5/6th को हटाने संयुक्तउच्च नमक सेवन और endothelial रोग की तरह. पाठकों उच्च नमक आहार और / या कोई कमी साथ 5/6th nephrectomy के संयोजन के लिए आवश्यकता के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल चूहों के तनाव पर निर्भर करता है कि दिमाग में रखना चाहिए.

इस जानवर के लिए कम भारी माना जाता है कम सर्जरी से संबंधित मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है और हमारे पशु प्रयोगात्मक समिति द्वारा पसंद किया जाता है के रूप में हम बजाय एक एक कदम प्रक्रिया का एक दो कदम प्रक्रिया में 5/6th nephrectomy प्रदर्शन किया. हम टांके का ढीला, laparotomy के घाव में संक्रमण के एक उच्च जोखिम के साथ जुड़ा हुआ है के रूप में गुर्दे तक पहुंचने के लिए चमड़े के नीचे हर्नियेशन और पार्श्व चीरा की तुलना में आंतों के लिए आसंजन पार्श्व चीरा बजाय laparatomy पसंद किया. प्रयोगात्मक डिजाइन laparotomy के साथ एक हस्तक्षेप शामिल है इसके अलावा, अगर - रूप SNX के लिए शेष गुर्दे प्रदर्शन laparotomies के गुर्दे की धमनी में अस्थि मज्जा की कोशिकाओं के प्रशासन के लिए हमारे प्रयोगात्मक अध्ययन में मामला पूर्व नहीं हैदोहराया laparotomies रूप ferable से बचा जाना चाहिए.

गुर्दे जन के 5/6th के सर्जिकल हटाने के बाद, कई गंभीर समस्याएँ उत्पन्न हो सकती है. UNX दौरान आसपास वसा आसानी से अलग होगा क्योंकि गुर्दे स्थिर कठिनाइयों का हो सकता है. दो तरीकों गुर्दे संपर्क में पाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. 1) धीरे वाहिका की ओर गुर्दे के निचले पोल से नीचे ले जाकर गुर्दे जहाजों पर काबू पाने के लिए छोटे संदंश का प्रयोग करें और आप गुर्दे को स्थिर कर सकते हैं जब तक ध्यान खींचने. 2) ध्यान से पेट के गुर्दे से बाहर खींचने के लिए कुंद संदंश का प्रयोग करें. गुर्दे के संपर्क में है, धुंध इस प्रक्रिया के दौरान हो सकता है कि रक्तस्राव को रोकने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. रक्तस्राव को रोकने के लिए, वसा दृढ़ता से गुर्दे से जुड़ी है जहां गुर्दे के निचले छोर पर वसा खींच शुरू.

गाँठ से पर्ची सकता है के रूप में यह गुर्दे पोत और गुर्दे के हटाने के बाद रक्तस्राव रोकने के लिए गुर्दे के आसपास गाँठ के बीच जगह बनाने के लिए महत्वपूर्ण हैजल्दी से रक्त के साथ पेट भरने आने वाले रक्त प्रवाह के कारण गुर्दे जहाजों,. एक धुंध रक्त को निकालने के लिए और दबाव रक्तस्राव को रोकने के लिए लागू किया जाना चाहिए इस्तेमाल किया जा सकता है. गुर्दे की पकड़ और एक नया संयुक्ताक्षर जगह संदंश का प्रयोग करें. खून बह रहा बंद कर दिया है जब तक कि गुर्दे जहाजों वापस पता लगाया जा सकता है, जब दबाव बनाए रखें. उदर गुहा में रक्तस्राव के कारण निर्जलीकरण को रोकने और मांसपेशियों और त्वचा की परत बंद करने से पहले लगभग 5 मिनट इंतजार करने के लिए शारीरिक नमक के 1 मिलीलीटर जोड़ें. बाद के दिनों के लिए सावधानी से अतिरिक्त चूहा मॉनिटर. संयुक्ताक्षर गुर्दा लेकिन गुर्दे वाहिकाओं खून बह रहा है के हटाने के बाद जगह में अब भी है, जब संयुक्ताक्षर की लंबी सिरों जहाजों बंद टाई करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

खून बह रहा बनी रहती है डंडे के विच्छेदन के बाद, जेल फोम पैड पर पकड़े दबाव के बावजूद, यह संभावना एक बड़े गुर्दे धमनी या गुर्दे श्रोणि को चोट की वजह से है. यह खून बह रहा है, घाव पर नई जेल फोम पैड रखकर ले जाने के लिए नहीं ध्यान रखने से रोका जा सकता हैबड़े जहाजों वृक्कनाभि के करीब हैं क्योंकि अवशेष हटाने, और एक लंबी अवधि के लिए इंतज़ार दौरान फोम पैड.

रक्त 2 दिनों के बाद सर्जरी तक मूत्र में पता लगाया जा सकता है. गुर्दे श्रोणि क्षतिग्रस्त या एक बड़ी गुर्दे पोत खून बनी रहती है, जब रक्तमेह के एक लगातार ट्रेस हो जाएगा. यह रक्तस्राव को रोकने के लिए संभव नहीं है क्योंकि सर्जरी के बाद लगातार रक्तमेह साथ चूहे euthanized होने की जरूरत है. रक्त गुर्दे श्रोणि के अंदर पका हुआ है और अंत में रुकावट के लिए अग्रणी, मूत्रवाहिनी और मूत्राशय रोकना होगा क्योंकि रक्तमेह सर्जरी के बाद समय बिंदु एक बाद में मनाया जाता है, जो सर्जरी के बाद 2 सप्ताह के लिए हो सकता है, चूहे भी euthanized किया जाना चाहिए.

गुर्दे की विफलता का अधिक तेजी से विकास की आवश्यकता है, प्रोटोकॉल उलट हो सकता है, यानी पहले एक सप्ताह बाद uninephrectomy द्वारा पीछा खंभे हटा दें. इस उलट मॉडल अन्य चूहा उपभेदों में इस्तेमाल किया गया है, उदाहरण के लियू एट अल के लिए देखते हैं. 24 के द्वारा जांच की गई है. रोधगलन मॉडल उच्चतर रेनिन रिहाई, एक रक्तचाप में अधिक तीव्र और स्पष्ट वृद्धि और अधिक प्रारंभिक केशिकागुच्छीय चोट 3 के साथ है. दोनों मॉडलों में, पुरानी स्थिर गुर्दे की बीमारी के एक राज्य में 4 से के पाठ्यक्रम पर विकसित8 सप्ताह. गुर्दे प्रांतस्था की जमावट भी गुर्दे जन 25 को कम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

हम उसे उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए क्रिस्टा मांद Ouden धन्यवाद. इस तकनीक को आर्थिक रूप से डच गुर्दे की नींव अनुदान C06.2174 द्वारा समर्थित किया गया था. MCV के वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए नीदरलैंड संगठन (NWO) Vidi अनुदान 016.096.359 द्वारा समर्थित है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
      Reagent
L-NNA Sigma-aldrich N5501  
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm Johnson&Johnson Ms0005  
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 Ethicon V303H  
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 Ethicon V392H  
Buprenorphine (0.3 mg/ml) Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals unknown  
      Equipment
Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm Fine Science Tools (FST) 91121-12  
Student Standard Pattern Forceps FST 91100-12  
Mayo Scissors FST 14010-15  
2X Semken Forceps FST 11008-13  
Student Iris Scissors FST 91460-11  
Olsen-Hegar Needle Holder FST 12002-14  

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References

  1. AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).
  2. Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57 (3), 195-205 (2006).
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उच्च नमक आहार और लुईस चूहा में क्रोनिक किडनी रोग प्रेरित करने के लिए नाइट्रिक ऑक्साइड synthase निषेध के साथ संयोजन में 5/6th nephrectomy
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van Koppen, A., Verhaar, M. C.,… More

van Koppen, A., Verhaar, M. C., Bongartz, L. G., Joles, J. A. 5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat. J. Vis. Exp. (77), e50398, doi:10.3791/50398 (2013).

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