Summary
Bu deneylerin amacı, zayıflatılmış büyümesi ve gen ekspresyonu dinamikleri üzerinde niceliksel zamana bağlı verilerini oluşturmak için bir
Abstract
Bu deneylerin amacı, hafifletilmiş S. büyümesi ve gen ekspresyonu dinamikleri üzerinde niceliksel zamana bağlı verilerini oluşturmak için bir tümörleri içinde büyüyen typhimurium bakteri kolonileri.
Bir insan yumurtalık kanseri hücre hattı deri altına enjeksiyon, OVCAR-8 (NCI DCTD Tümör Deposu'ndan, Frederick, MD). Farelerde modeli ksenograft tümörler oluşturulan
Biz, S. zayıflatılmış suş transforme görselleştirme 2 plazmid yapıcı şekilde tanımlanmış lusiferaz (luxCDABE) ile: typhimurium bakteriler (SL1344 phoPQ-1 ELH430). Fare 1, esas olarak non-virulent kalarak Bu suşlar, özellikle tümörler kolonize olur.
Ölçülebilir tümörler tesis edildiğinde, bakteri dozaj değişen kuyruk damarı yoluyla venöz içinden enjekte edildi. Tümör-lokalize, bakteri gen ekspresyonundaki kullanarak 60 saatlik bir süre boyunca gerçek zamanlı olarak izlenmiştirin vivo görüntüleme sistemi (IVIS) içinde. Her zaman noktasında, tümörler homojenize eksize ve gen ekspresyon verileri ile korelasyon için bakteri kolonileri ölçmek için kaplandı.
Birlikte, bu veriler tümörler içinde büyüyen bakterilerin in vivo büyüme ve gen dinamikleri içinde bir nicel ölçü verir.
Introduction
Sentetik biyoloji son on yılda hızla ilerlemiştir ve şimdi enerji ve sağlık önemli sorunları etkisi konumlandırılmış. Ancak, klinik alana genişleme güvenlik endişeleri ve in vivo genetik devrelerinde için tasarım kriterleri geliştirme bir yokluğu ile yavaşladı edilmiştir. Yüksek darbe tıbbi uygulamaları hızlandırılması tıbbi altyapı, kontrollü laboratuar ortamı dışında işlev genetik devreleri, ve güvenli ve klinik-kabul mikrobiyal bilgisayarlar ile doğrudan arabirim yöntemleri kullanarak gerektirecektir.
Suş tümörlerde tercihen büyümeye yeteneklerine bağlı olarak kanser tedavisi için incelenmiştir. Bu C eklemiş novyi, E. coli, V. cholorae, B. longum, ve S. typhimurium 3-8. S. onlar 9-12 insan klinik çalışmalarda bir dizi güvenlik ve hoşgörü sergilenen gibi typhimurium özel bir ilgi yarattı. Bu bakteri Bir ilk konak bağışıklık sisteminin uyarılması yoluyla ve kanser hücre metabolizması için gerekli besinlerin tükenmesi ile bir anti-tümör etkileri oluşturmak için gösterilmiştir. Tedavi kargo üretimi daha sonra genetik değişiklikler ile eklendi. Bu çalışmalar tümör tedavileri için bakteri kullanımı önemli ilerlemeler temsil ederken, mevcut çabalar çoğunluğu genellikle çok yüksek dozlarda, hedef dışı etkiler ve ana 13-16 direnç gelişimi teslimat ile sonuçlanan yüksek düzeyde ekspresyon yararlanmıştır .
Şimdi, sentetik biyoloji gelişmiş algılama ve dağıtım 17-20 gerçekleştirebilirsiniz hesaplama tasarlanmış genetik devreleri kullanarak programlanabilir yük üretim ekleyebilirsiniz. Bu devreler, tümör spesifik uyaran ve gerektiğinde kendi kendini düzenleyen kargo üretim anlamda dağıtım sistemleri olarak hareket için dizayn edilebilir. Ancak, in vivo olarak, bu devrelerin fonksiyonu çalışmalarında şimdiye kadar zor olmuştur.
plazmid sentetik devreleri için ortak bir çerçeve olan ve_content "> bu yana, bir fare modeli kullanılarak in vivo plazmid tabanlı gen ifadesinin dinamiklerini karakterize etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemler zaman atlamalı lüminesans görüntüleme ve biodistribution kantitatif ölçümü kullanmaktadır. birlikte, Bu yaklaşımların klinik uygulamalar için in vivo plazmid tabanlı ağlar eğitim için bir çerçeve sağlar.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Hücre Hazırlanması
- Standart hücre kültürü teknikleri kullanılarak geçişi hücre çizgileri dahildir. Bu deneyde, OVCAR-8 hücreleri (NCI DCTD Tümör Deposu, Frederick, MD) kullanılır. 100% - 80 confluency bir hedef hücreleri büyütün.
- 5 dakika boyunca 5 ml tripsin ile inkübe hücreleri, ardından + FBS tripsin inaktive 5 ml RPMI ortamı ilave edin.
- Hemasitometre üzerinde hasat ve sayısı hücreleri. 5 x 10 7 hücre / ml ya da şişesi başına yaklaşık 200 ul bir hedef konsantrasyonunda kırmızı fenol içermeyen DMEM içinde süspanse edin.
- 15% daha az büyüme faktörü Matrigel (BD Biosciences) ekleyin ve implantasyon kadar buz üzerinde hücre süspansiyonu tutun.
2. Tümör İmplantasyonu
- Izofluran% 3 ile 4 haftalık dişi NCR / Nu fareler anestezi ve derin anestezi sağlamak için yaklaşık 5 dakika bekleyin. Anestezi altında iken kuruluğu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın.
- 1 ml şırınga içinde hücreleri (hem tümör başına 100 ul) yerleştirin ve 27 1 takmak/ 2 iğne.
- İki lider, karşılıklı arka yan enjeksiyon sitelerin her biri için, bir çadır yapmak ve tabanda hücreleri enjekte forseps ile cildi nazikçe kaldırın. Kan üreten, çok derin nüfuz dikkat edin. Hafifçe sıçrama olmadan şırınga kaldırmak için cımbız kullanın.
- 2 arasında bir tümör çapı kadar 20 gün - 4 - mm ulaşıldığında 10 günlük tümör büyümesini izlemek.
3. Bakteri Hazırlık
- Bir -80 C derin dondurucu hisse senedi veya soğutulmuş plaka 3 ml LB medya + ampisilin bakteri bir gecede kültürü başlatın. Bu deneyde, S. kullanılan typhimurium suşu ELH430 (SL1344 PhoPQ-aroA-).
- Sabah, filtre LB içine kültür 1:100 sulandırmak ve OD600 0,4 büyümeye - 0.6.
- Aşağı Spin ve fosfat 3 kez yıkayın tuzlu su (PBS) tamponlu ve 0.1 bir son OD600 (1 x 10 7 hücre / ml) de tekrar süspansiyon.
4. Bakteri enjeksiyonu
- Bir hayvan anestezisikuyruk da dominant el doğru bakacak şekilde yan d konumu. Anestezi altında iken kuruluğu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın.
- Ilık su veya ısı lambası kullanarak kuyruk ven dilate.
- 1 ml şırınga içinde bakteri (fare başına 100 ul) yükleyin ve 90 dereceden sadece daha az ucu bükün.
- Kuyruk ven ile şırınga ucu aynı hizaya getirin, sığ bir derinliğe (direnç hissetmelisiniz) de nüfuz ve bakteri enjekte. Başarılı bir enjeksiyon için kan akımını değiştirme dikkat edin.
5. Fare Görüntüleme
- Indüksiyon odasında hayvanların anestezisi sonra görüntüleme platformu üzerinde, her bir fare yerleştirin. Anestezi altında iken kuruluğu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın. Zaman noktaları arasında kantitatif sonuçları elde etmek için hassas konumlandırma koruyun.
- IVIS Spectrum görüntüleme sistemi (Kaliper Yaşam Bilimleri) kullanarak görüntü hayvanlar. Aralarında görüntüleme 1'den fazla hayvan, yer ışık bariyerleri çapraz illu önlemek için iseğerlendirmesi. Hayvanlar bakteri lokalizasyonu onaylamak için ventral tarafta ilk görüntülü olmalıdır.
- Görüntü hayvan dorsal deney (36 saat) süresince IVIS her 2 saat kullanarak. Belirli bir yatırım getirisi için bir süre ders oluşturun.
6. Bakteriyel biolojik dağılım miktarının
- Emici bebek bezi üzerinde arkasında CO 2 ve yer kullanarak hayvanlar euthanize.
- Iki arka yan subkutan tümörler ortaya çıkarmak için hayvan çevirin. Tümörler ayırmak ve kaldırmak için, etrafını saran dokulardan kesin. Cımbız ile tümör Holding, bir ters makas hareketi kullanarak cilt kaldırmak. Cilt çoğunluğu ayrılmış zaman, tam cımbız kullanarak tümör çıkarmak.
- Önceden tartılmış mikrosantrifüj tüpleri içinde organları. Bu tüplerin kitle önemli ölçüde değişebilir çünkü nicel sonuçlar için bunları önceden tartmak önemlidir.
7. Bakteriyel biolojik dağılım miktarının
- Her zaman noktası, tüketim ve tümörler tartın.
- 500 ul PBS +% 15 gliserol ekleyin ve bir Doku-Tearor (BioSpec) kullanarak homojenize. Örnekleri arasında etanol ile homojenleştirici 3 kez yıkayın.
- Seri seyreltme ve bakteri kolonisi sayımı için plaka oluşturun. Tek bir tabak kullanımı ön kesitli plakalar üzerinde plaka birden fazla seyreltme için.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu protokol kullanarak, tümör hedef bakteri in vivo büyüme ve gen dinamikleri veri elde edebiliyoruz. Genel akışı Şekil 1 'de özetlenmiştir.
İlk aşamada, biz lüminesans (mavi) bir muhabir olarak ile gen ekspresyon ölçmek için IVIS kullanarak hayvan bakteri enjekte (yeşil) ve görüntü.
Daha sonra, ikinci aşamada, biz tüketim, homojenize ve koloni sayımı için plaka tümörler tümör büyüyen bakteri sayısını belirlemek için.
Bakteri suşları tarafından oluşturulan Biyoparlaklık görsel kullanarak IVIS (Şekil 2) 'dir. 5 x 10, en az yaklaşık 5 kolonize olan doz (Şekil 2A) ile enjekte edilen doz ile sinyal artar. Tüm durumlarda, zayıflatılmış bakteri tek ya özellikle tümör kolonize veya farenin büyümeye başarısız edebiliyoruz. Sinyal normalleşme için parlaklık birimleri kullanarak ölçülür10 ^ 6 veya daha fazla tipik değerleri kolonizasyon göstergesidir maruz kalma süresi, için ze.
Belirli bir enfeksiyon için, 24-48 saat (Şekil 2B) üzerinde zamanla sinyal artar. Tepe başlangıcı enjeksiyonundan sonra yaklaşık 36 saat, ama zamanlama kullanılan gerilme ve plazmid bağlı olarak değişebilir. Kantitatif sonuçlar sağlamak için fare her zaman tam olarak aynı şekilde konumlandırmak için emin olun.
Sonraki deney kümesinde, bakteriyel biodistrution zamanla bakterilerin büyümesini (Şekil 3) ölçmek için ölçülür. Tümörlerde canlı bakteri seri dilüsyonları (Şekil 3A) de tümör ve kaplama eksize ve homojenize edilerek belirlenir. Diğer organlar da benzer şekilde ölçülebilir. Tümör-dalak oranı bakteriyel özgüllük 21, 22 arasında, tipik bir ölçüsüdür çünkü Burada, dalak kullandık.
Bu sayıları bize bakteriyel nüfusun ölçmek için izinzamanla tın (Şekil 3B). Sol tarafta, biz toplu kültür deneylerinde çok daha yavaş 1-3 saat bir iki katına zaman, ile, deney süresi boyunca bakteri sayısını tümör istikrarlı bir şekilde büyümek olduğunu görebilirsiniz. Bu düşük oranda büyük olasılıkla tümör ortamında kötü besin koşullarına bağlıdır. Sağda, biz tümör-dalak oranı sayısal ve deney boyunca artırdığını gözlemlemek var. Bu bulgu, bakterilerin tümör büyümeye devam ederken dalak sayıları esas itibarı ile sabit olması ile, seçicilik göstermektedir.
Şekil 1. Genel deneysel işlem şematik. (A) Bakteriler kuyruk ven enjekte ve özellikle tümörler kolonize edilmiştir. (B) her noktada, tümörler eksize edilir,homojenize ve koloni sayımı için kaplama. Izni 25 ile yayımlanmaktadır. Copyright 2012 American Chemical Society.
Şekil 2. Tüm-hayvan lüminesans görüntüleme IVIS kullanarak. (A) enjeksiyon dozu ve (b) zamanla artar Sinyal. Izni 25 ile uyarlanmıştır. Copyright 2012 American Chemical Society.
Şekil 3,. Büyüme dinamikleri ölçmek için kaplama ve koloni sayıları. (A) Seri seyreltme bireysel koloniler temsili bir dalak örneği (alt) için sayılmasına izin. (B) bu sayıları takip ederek, biz tümörler içinde bakterilerin in vivo nüfus önlemler oluşturabilirsiniz ( B olarak </ Strong> dalak oranı) (c) ile ve plazmid olmadan hücrelerin sayısı ve tümör (d gibi). Izni 25 ile uyarlanmıştır. Copyright 2012 American Chemical Society.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu prosedür kullanılarak, böylece tümörü kolonize bakteri büyümesi ve gen ekspresyonu dinamikleri için zaman içerisinde elde edebiliyoruz. Bu ölçümler rutin parti kültür ya da mikroflüidik cihazlar, in vitro olarak gerçekleştirilir olsa da, in vivo olarak gerçekleştirmek için çok daha zordur.
Bu yöntemler uygulanabilir çeşitli değişiklikler vardır. Bizim fare modelleri oluşturmak için OVCAR-8 hücre kullanılır iken, diğer hücre hatları, bir dizi eşit şekilde kullanılabilir. Örneğin, luciferized tümör hücre hatları ve bakteriyel lusiferaz kanalları ko 3B için izin kullanılabilir. Bir iki taraflı ön yan modeli, farklı sayıda ve enjeksiyon yeri yerle kullanılan Bunlara ek olarak, farklı olayları incelemek için model oluşturmak için kullanılır. Örneğin, tümör boyutu önemli bir değişkendir, hücrelerin seri dilüsyonları hazırlanabilir ve smal üreten, aynı anda farklı sitelerine enjekte-ler ve daha büyük boyutlu tümörlerin. Son olarak, S. kullandı typhimurium suşu ELH430, S. diğer suşları typhimurium veya C gibi diğer bakterileri enjeksiyon için bakteri miktarını ayarlanması gerekebilir rağmen novyi E. coli, V. cholorae, B. longum, bu yöntemler ile eşdeğer olarak kullanılabilir.
Bu protokol en kritik adımlar fare kanser modelinin oluşturulması ve bakteri hazırlanması ve enjeksiyon içerir. Kanser modelinin oluşturulması için, hücre sayısı ve konsantrasyonu, enjeksiyon hacmi ve enjeksiyon bölgesinde yerleşim hassas büyük ölçüde üretilen tümörlerin tutarlılık artıracaktır. Biz eşdeğer, boy şeklinde, ve yerleştirilen tümörler en kantitatif karşılaştırılabilir veri oluşturmak bulduk. Bakteri hazırlanması için, tamamen enjeksiyondan önce yıkayın ve dikkatli bir şekilde bakteri konsantrasyonu, hacim, ve enjeksiyon yeri kontrol etmek için çok önemlidir. Bu adımlar Avo gerekmektedirenjeksiyon kimliği aşırı immünolojik etkisi, ve ayrı fare modelleri arasında nicel karşılaştırma korumak için. Tümör girmek bakteri sayısı enjekte edilen dozun küçük bir kısmı olduğu için, fareler arasında enjekte edilen bakteri sayısındaki değişim koloni ilerlemesi üzerinde büyük farklar neden olabilir. Daha fazla bilgi için, in vivo çalışmalar 3, 4 kantitatif için bakteriyel hazırlık birkaç ek referanslara bakın
Bu tekniklerin özel çalışmalar çeşitli çok iyi adapte olsa da, bazı sınırlamalar bazı uygulamalar uzanan için var. Örneğin, yüksek bakteri sayıları arasında intravenöz yoldan bağışıklık etkisi nedeniyle bazı bakteri ve / veya fare modelleri için uygun olmayabilir. Yönetim bir alternatif rota ağızdan teslim (sonda), vallahi 23 tanımlanan bir tekniktir. Ayrıca, zaman atlamalı görüntüleme oldukça emek-yoğun speci bağlı olabilirkullanılabilir fic deney uzunluk, zaman-çözünürlük ve ekipmanları. Görüntüleme işlemi otomatik bu yüklerin birçok hafifletmek, aynı zamanda yeni teknik sorunlar tanıttı olacaktır. Kalp hızı, solunum hızı ve sıcaklık gibi fare hayati sürekli ek donanım tarafından izlenmesi gerekir. Buna ek olarak, daha uzun süreli anestezi için, göz merhemleri yeterli nemi korumak için kullanılabilir olması gerekir. Son olarak, fare teslim anestezi seviyesini sürekli anestezi uygun derinlikte korumak için ayarlanmalıdır. Anestezi teslimat ile fare hayati ölçümleri entegre bir kapalı çevrim geri besleme kontrol sistemi büyük ölçüde bu süreci kolaylaştıracaktır.
Sentetik biyoloji in vivo uygulamalarda için işlenmiş gen devreleri uygulayarak çok başarılı 17, 19, 20, elde olsa da tasarım ilkeleri bilgilendirmek için in vivo zaman derslerde, kantitatif gerektirecektir. S. typhimurium klinik sentetik biol için mükemmel bir türdürkanser tedavisi için ogy bu E. benzer olduğu coli, özellikle tümörler kolonize olur, ve insan klinik denemeleri, 6, 12, 14, 22 güvenli olduğu gösterilmiştir. Ayrıca, son çalışmalar birçok yayınlanan devreleri S. işlev bulduk değişiklik 24 olmadan typhimurium. Burada tarif edilen deneysel platformu kullanarak, son plazmid vektörleri 25 tabiatında bulunan kararsızlık kullanılarak programlanabilir ne kadar dinamik in vivo ekspresyon profilleri tanımlanmıştır. Ayrıca, son zamanlardaki araştırmalar in vivo stabil 23 plazmid vektörleri muhafaza edilmesi için yeni bir yöntem geliştirmiştir.
Lusiferaz duyarlılığını 5 için in vivo görüntüleme için kullanılan ortak bir muhabir olsa da, GFP 26 kullanılarak in vivo gen ifadesinde kantitatif mükemmel çalışmaların örnekleri vardır. GFP kullanarak araştırmacı in vivo bireysel bakteri mekansal-zamansal dinamiklerini incelemek için izin verecek.Ayrıca, ederken kanser daha uygun modelleri doğru bu çalışmalar daha da tahmin gücü 7 artıracak uzanan, bir deri altı modeli kullanılmıştır. Bu gibi gelecek çalışmalar klinik uygulamalar için in vivo sentetik biyoloji bir nesil sağlayabilir.
Konser hem deneysel ve hesaplama teknikleri geliştirmek vivo genetik devrelerinde mühendisliği önemli olacaktır. Hesaplamalı modelleme hızla potansiyel çıkışları keşfetmek için sistem parametreleri soruşturma ancak ilgili kalmak için yakın deneysel sonuçlara bağlı kalmalıdır. Şimdiye kadar, bu sonuçlar, kısmen, in vivo genetik devreleri çalışmak için yöntemler eksikliği nedeniyle, kantitatif olarak elde edilmesi zor olmuştur.
Bu platform dayanarak, gelecekteki uygulamalar daha tümör spesifik uyaranlara ve kendi kendini düzenleyen kargo ürün algılama, ifade dinamikleri aralığını genişletmek mühendislik geni devre içerecektirgerektiği gibi iyon. In vivo devreleri artar bu sofistike olarak, nicel verilere gereksinimleri onları da artacaktır ayarlamak için gerekli. Biz uzun vadeli fare görüntüleme yenilikler ile birlikte, bu süreci mümkün kılacak, yöntemleri burada açıklanan inanıyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Biz yazının eleştirel okuma ve düzenleme için H. Fleming teşekkür ederim. Bu çalışma Misrock Doktora Sonrası Bursu (TD) ve NDSEG yüksek lisans bursu (AP) tarafından desteklenmiştir. SNB bir HHMI Araştırmacı olduğunu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 309602 | |
| 3/10 cc Insulin Syringe | BD Biosciences | 309301 | |
| PrecisionGlide Needle | BD Biosciences | 301629 | |
| RPMI Medium 1640 (1X), liquid, with L-glutamine | Invitrogen | 11875-119 | |
| Ampicillin | Sigma Aldrich | A0166-5G | |
| LB Agar Broth | Sigma Aldrich | L2897 | |
| Luria-Bertani broth | BD Biosciences | 244610 |
References
- Hohmann, E. L., Oletta, C. A., Miller, S. I. Evaluation of a phoP/phoQ-deleted, aroA-deleted live oral Salmonella typhi vaccine strain in human volunteers. Vaccine. 14 (1), 19-24 (1996).
- Leschner, S., et al. Tumor Invasion of Salmonella enterica Serovar Typhimurium Is Accompanied by Strong Hemorrhage Promoted by TNF-alpha. Plos One. 4 (8), (2009).
- Min, J. J., et al. Quantitative bioluminescence imaging of tumor-targeting bacteria in living animals. Nat. Protoc. 3 (4), 629-636 (2008).
- Min, J. J., et al. Noninvasive real-time imaging of tumors and metastases using tumor-targeting light-emitting Escherichia coli. Mol. Imaging Biol. 10 (1), 54-61 (2008).
- Choy, G., et al. Comparison of noninvasive fluorescent and bioluminescent small animal optical imaging. Biotechniques. 35 (5), 1022-1033 (2003).
- Pawelek, J. M., Low, K. B., Bermudes, D. Tumor-targeted Salmonella as a novel anticancer vector. Cancer Research. 57 (20), 4537-4544 (1997).
- Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13 (2), 283-286 (1993).
- Ozbudak, E. M., et al. Regulation of noise in the expression of a single gene. Nat. Genet. 31 (1), 69-73 (2002).
- Elowitz, M. B., et al. Stochastic gene expression in a single cell. Science. 297 (5584), 1183-1186 (2002).
- Toso, J. F., et al. Phase I study of the intravenous administration of attenuated Salmonella typhimurium to patients with metastatic melanoma. J. Clin. Oncol. 20 (1), 142-152 (2002).
- Heimann, D. M., Rosenberg, S. A. Continuous intravenous administration of live genetically modified salmonella typhimurium in patients with metastatic melanoma. J. Immunother. 26 (2), 179-180 (2003).
- Forbes, N. S. Engineering the perfect (bacterial) cancer therapy. Nat. Rev. Cancer. 10 (11), 785-794 (2010).
- Guo, H., et al. Targeting tumor gene by shRNA-expressing Salmonella-mediated RNAi. Gene Ther. 18 (1), 95-105 (2011).
- Hoffman, R. M. Tumor-seeking Salmonella amino acid auxotrophs. Curr Opin Biotechnol. 22 (6), 917-923 (2011).
- Nguyen, V. H., et al. Genetically engineered Salmonella typhimurium as an imageable therapeutic probe for cancer. Cancer Research. 70 (1), 18-23 (2010).
- Zhao, M., et al. Targeted therapy with a Salmonella typhimurium leucine-arginine auxotroph cures orthotopic human breast tumors in nude mice. Cancer Research. 66 (15), 7647-7652 (2006).
- Danino, T., et al. A synchronized quorum of genetic clocks. Nature. 463 (7279), 326-330 (2010).
- Anderson, J. C., et al. Environmentally controlled invasion of cancer cells by engineered bacteria. J. Mol. Biol. 355 (4), 619-627 (2006).
- Hasty, J., McMillen, D., Collins, J. J.
- Prindle, A., et al. A sensing array of radically coupled genetic 'biopixels'. Nature. 481 (7379), 39-44 (2012).
- Xu, D. Q., et al. Bacterial delivery of siRNAs: a new approach to solid tumor therapy. Methods Mol. Biol. 487, 161-187 (2009).
- Zheng, L. M., et al. Tumor amplified protein expression therapy: Salmonella as a tumor-selective protein delivery vector. Oncol. Res. 12 (3), 127-1235 (2000).
- Kim, K., et al. A novel balanced-lethal host-vector system based on glmS. Plos One. 8 (3), e60511 (2013).
- Prindle, A., et al.
- Danino, T., et al. In vivo gene expression dynamics of tumor-targeted bacteria. ACS Synthetic Biology. , (2012).
- Zhao, M., et al. Spatial-temporal imaging of bacterial infection and antibiotic response in intact animals. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17), 9814-9818 (2001).
