Summary
Burada, görüntü sitometrisi kültür ev sahibi hücrelerle ilişkili olarak patojenik mantarların ölçümü için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir. Bu teknik, CFU sayımı için bir alternatif olarak kullanılabilir.
Abstract
Bu Candida albicans, Histoplasma capsulatum ve Cryptococcus neoformans gibi patojenik maya hücresel patogenezi mekanizmaların Çalışmaları genellikle birim analiz veya akım sitometri oluşturan koloni kullanarak maya miktar takip memeli ana veya ana hücreler (yani makrofajlar) enfeksiyonu kullanır. Koloni oluşturan birim numaralandırma alanında en sık kullanılan yöntem olsa da, bu tekniğin büyüme karşılaştırırken özellikle endişe vericidir katı ortam ve düşük ve / veya değişken kaplama verimliliği, bazı mantar türlerinin yavaş büyüme de dahil olmak üzere, dezavantajları ve sınırlamaları vardır Yabani tip ve mutant. Flow sitometri maya canlılığı ile ilgili hızlı bir niceliksel bilgi sağlayabilir, ancak, patojenik maya için akım sitometrik algılama benimsenmesinin yüksek maliyet ve biyogüvenlik konuları da dahil olmak üzere pratik nedenlerle bir dizi için sınırlı kalmıştır. Burada, bir görüntü tabanlı göstermekmakrofajlar ile birlikte kültür canlı patojenik maya ölçümü için Cellometer Vizyon (Bioscience Nexcelom, LLC) kullanarak sitometrik yöntem. Histoplasma capsulatum ve Candida albicans H.:. Çalışmalarımız iki insan fungal patojenlerin tespit odaklanmak capsulatum makrofaj phagosome içinde çoğaltarak makrofaj kolonize ve burada, biz kantitatif H. büyüme değerlendirmek görüntü sitometrisi ile birlikte akridin turuncu / propidyum iyodür boyaması kullanılarak bir RAW 264.7 makrofajlarda capsulatum mayalar. Bizim yöntemi sadakatle birim numaralandırma oluşturan geleneksel koloni ile ölçülen özetlediği büyüme trendleri, ancak önemli ölçüde artmış duyarlılık ile. Ayrıca, doğrudan C. bir GFP-ifade suşu ile canlı makrofaj enfeksiyonu değerlendirmek albicans. Bizim metodoloji ilişki zekâ önemli insan fungal patojenlerin tespiti ve ölçümü için bir, hızlı, doğru ve ekonomik bir araç sunuyors konakçı hücreler sunar.
Introduction
Kendi ana ve / veya ana hücreleri ile birlikte patojenik mantarların çalışmalar genellikle bir zaman boyunca veya farklı enfeksiyon koşullar altında canlı mantar hücreleri ölçümü gerektirir. Koloni oluşturan birim sayımı (CFU) uygun bir mantar hücre sayısı ölçülmüştür hangi standart bir yöntem olup, ancak bu teknik, çeşitli dezavantajları ve sınırlamaları vardır. İlk olarak, birçok mantar türleri yavaş büyüyen vardır. Katı ortam üzerinde görünür kolonilerin büyüme önemli ölçüde araştırma hızını yavaşlatan, 1-2 hafta sürebilir. Birkaç seyreltme kolonilerin sayılabilir miktarda sağlamak için kaplama gerekir çünkü ikinci, CFU kaplama sırasında örneklerin manipülasyon, zahmetli bir süreçtir. Kaplama verimi de% 100'ün altında, çünkü Üçüncü olarak, CFU sayısını kaplama canlı organizmaların sayısı genellikle daha düşüktür. Örneğin, dimorfik fungal patojen Histoplasma capsulatum için kaplama verimliliği% 90 kadar yüksek olabilir, ama rutin olarak düşük olabilir% 30 ve ilgili mantar dimorph Paracoccidioides brasiliensis, 1, 2 (% 10) daha düşüktür. Candida albicans için kaplama verimi de değişkenlik 3 tabidir. Birçok durumda, bu ölü ve / veya metabolik olarak aktif olmayan hücrelerin varlığı ve konsantrasyonu belirlemek için yararlı olacaktır, oysa Son olarak, CFU analizi, katı ortam üzerinde büyüme oluflturabildikleri sadece canlı ve aktif olarak bölünen hücreler için hesaplar.
Daha önce, çeşitli patojenik mantar türlerinin miktarının tayini için akış sitometrisi ile 4-6 yöntemler tarif edilmiştir. Ancak, paylaşılan akış sitometrelerinde biyogüvenlik düzeyi 2 (BSL2) veya BSL3 düzeyinde patojenler ile ile ilgili biyogüvenlik muhafaza sorunları nedeniyle, bu tekniğin benimsenmesi sınırlı kalmıştır. Akım sitometri gibi, görüntü sitometri hücre miktarının bir hassas ve hızlı bir yöntemdir. Ancak, görüntü sitometri karşılaştırılabilir sonuçlar 7 ile maliyetinin bir kısmını yapılabilir -11. Burada, ev sahibi hücrelerle ilişkili olarak patojenik mantarların görüntü sitometrisi gerçekleştirmek için yöntemler tarif eder. Biz iki insan mantar patojenleri kullanarak yöntemleri göstermek: Histoplasma capsulatum ve Candida albicans H.. capsulatum solunum hastalığı neden olan bir dimorfik fungal patojendir, insanlarda, o kadar tomurcuklanan maya büyür ve makrofaj içinde çoğaltır Candida albicans bazen kandidiyazis neden olan bir insan ortakçı türdür.. Biz görüntü sitometri görselleştirme yeteneği ile birlikte, bu maya hızlı ölçümü sağlar olduğunu göstermektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. H. ile makrofajlar enfeksiyonu capsulatum, C. albicans
- Enfekte edilmeden önce, 16 saat, 24-yuvalı plakalar içinde istenilen yoğunlukta tohum makrofajlar. Bu protokol, iyi bir 3.0 x 10 5 hücre yoğunluğu / kullanıldı.
- Bir enfeksiyon çokluğu istenen (İB) de log-fazı büyümesinde mantar hücreleri ekleyin. Bu protokol İçişleri Bakanlığı bir dizi (- 5.0 0.2) ağırlayacak. H. ile RAW264.7 makrofaj enfeksiyon için capsulatum, biz İçişleri Bakanlığı 0.2 kullanılır.
- 1.5 saat fagositoz izin vermek için sonrasında, hücre-dışı Mantar çıkarmak için PBS ile makrofajlar üç kez yıkayın.
- Numune analizinden önce, istenilen sayıda saat süreyle inkübe edin. (Bizim deneyde 0.2) İçişleri Bakanlığı düşük de, enfekte makrofaj hücreleri birkaç gün için geçerli kalır ve örnekleri yaklaşık her 12-24 saat analiz edilebilir.
2. Makrofaj Lizis
- Makrofaj hücrelerinden mantar kurtarmak için, ortamı çıkarmak PBS ile 3 kez yıkayın, ve0.5 ml steril su ekleyin. Bu koşullar altında, makrofajlar lize ve mantar hücreleri gibi kalır.
- Oda sıcaklığında 5 dakika süreyle inkübe edilir.
- Buz üzerinde tutmak, steril tüpe lizat aktarın.
- Ayrı bir tüpe 20 ul lizat aktarın, daha sonra 20 ul AO / PI solüsyonu ekleyin. "Numune Hazırlama Resim Sitometrik Analizi": doğrudan 5. adıma geçin
3. CFU Kaplama
- Medya lizatları on-kat seyreltme (adım 2.3) yapın.
- Her seyreltme plaka 100 ul, SMM-agaroz plakalar üzerinde, yinelenen. 7-8 gün boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C'de nemlendirilmiş bir odasında inkübe edin.
- El 100 en az ve 1000 farklı koloniler en fazla gösteren plakalar üzerinde koloniler sayılır.
4. Canlı Makrofajlar içinde Mantarlar Görselleştirme
- Canlı makrofajlar toplamak için PBS ile hücreler 3 kez yıkayın. 4, 30 dakika boyunca 0.5 ml PBS ile inkübe ekleme ° C
- Doku kültürü kuyulardan makrofajlar kaldırmak için, hafifçe birkaç kez aşağı yukarı pipet ve. Buz üzerinde tutmak, steril tüpe sıvı aktarın.
- Ayrı bir tüp 20 ul örnek aktarın, sonra 20 ul AO / PI çözüm ekleyin. "Görüntü Sitometrik Analizi için Numune Hazırlama": doğrudan 5. adıma geçin.
5. Görüntü Sitometrik Analizi için Numune Hazırlama
- İyice hedef örneğin pipet ve daha sonra tek hücre sayım odası içine örnek 20 ul aktarın.
- Hücreler 30 sn için odasına yerleşmek için izin verin.
- Görüntü sitometresinin içine odası sayma yerleştirin.
6. Cellometer Cihaz Kurulumu
- Sisteme VB-535-402 ve VB-660-502 ve yerine oturduğundan emin olun: Floresan Optik Modülleri yerleştirin.
- VB-535-402 kişide (475 nm uyarma, 535 nm emisyon) akridin turuncu ve GFP tespiti için kullanılır.
- VB-660-502 (excitatiüzerine, 540 nm dalga boyunda, 660 nm emisyon), propidyum iyodür tespiti için kullanılır.
- Görüntü sitometresinin açın ve beraberindeki yazılımını açın.
7. Cellometer Yazılım Kurulumu
- Önceden "Test Tipi" ve Testi Açılır Menü içinde "Hücre Tipi" seçeneğini seçin.
- Canlılığı için, tahlil akridin turuncu ve propidium iyodür algılama için optimize edilmiştir.
- Candida albicans enfeksiyonun tespit edilmesi için, tahlil GFP tespiti için optimize edilmiştir.
- Üst "Seçenekler" i seçin ve "alın, Background Image" tıklayın ve işlemi tamamlamak için izin verir.
- "Önizleme Parlak-Alan Resim" tıklayın.
8. Resim Alma Prosedürü
- Görüntü sitometresinin içine hazırlanan örnek odası yerleştirin.
- Odak düğmesini kullanın ve odağı ayarlayın.
- Bir kez odak, "Count" tıklayın ve görüntü elde etme işlemi tamamlamak için izin verir.
- Remotek sayma odası ettik ve uygun bertaraf edin.
9. Görüntü Veri Analizi
- Konsantrasyon ve canlılığı ölçüm
- Sayma tamamlandıktan sonra, hedef hücrelerin konsantrasyonuna ve canlılık sonuç sayfasında görüntülenir.
- Candida albicans enfeksiyonu deneyde GFP hücre popülasyonu analizi için FCS Express 4 içine veri ihracat "İhracat" tıklayın.
- Candida albicans, infekte olmuş hücrelerin FCS Hızlı analizi
- FCS Express 4 ve arsa bir floresan histogram sonuçları içine ". NXDAT" dosyasını içe aktarın.
- Candida albicans ile enfekte olmuş hücreler topluluğundaki yüzdesini tespit etmek için histogram hücre popülasyonu kapı uygulamak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Biz H. büyüme izlemek için Cellometer Vizyon görüntü sitometresinin kullanılır makrofaj hücrelerinde capsulatum. RAW 264.7 hücreleri H. ile enfekte edildi Çeşitli zaman noktalarında capsulatum maya hücreleri ve, örnekler görüntü-bazlı sitometrik analizi ile AO / PI boyama tabi tutuldu. Buna paralel olarak, örnekler geleneksel CFU numaralandırma ile analiz edildi. Her zaman noktasında, örnekler makrofajlar eritmek için su içinde inkübe edildi ve serbest kalan maya hücreleri Cellometer Vision yazılımı (Şekil 1a ve 1b) ile tespit edilmiştir. Her zaman noktası (Şekil 1c) de görüntü tabanlı sitometrik analizi ve CFU numaralandırma tarafından tespit Biz canlı maya konsantrasyonu son derece benzer eğilimler gözlemlemek. Beklendiği gibi, AO / PI boyama ile tespit canlı maya mutlak sayı işareti vurgulayarak, CFU analizi ile değerlendirilen katı ortamda koloni oluşumu yeteneğine sahip maya sayısından daha sürekli yüksekticanlı ama olmayan ekilebilir hücrelerin ificant numaraları.
Canlı makrofajlar içindeki mantar hücreleri görselleştirilmesi maya suşları GFP-ifade kullanılarak gerçekleştirilebilir. Kemik iliğinden elde edilen makrofajlar (BMDM) C ile enfekte edildi ADH1 promoteri 12 (Şekil 2a) kontrolü altında yeşil floresan protein (GFP) ifade albicans maya hücreleri. GFP-C ile BMDM enfeksiyonu 0.1-10 arasında değişen enfeksiyon çokluklar (İB) de albicans maya enfekte makrofajlar (Şekil 2a) yanı sıra enfekte makrofajlar toplam oranı (Şekil 2b) içinde GFP yoğunluğu artan artışlara karşılık geldi.
Şekil 1. CFU görüntü tabanlı sitometrik analizi karşılaştırılması H. numaralandırma RAW 264.7 makrofaj in vitro enfeksiyon sırasında capsulatum. (a) 'RAW 264.7 makrofajlar H. ile enfekte edilmiştir Bir İçişleri Bakanlığı 0.2 de capsulatum mayalar. Enfeksiyonunu takiben 24 saat aralıklarla, makrofajlar parçalanır ve canlı maya CFU numaralandırma paralel olarak AO / PI boyama ile değerlendirildi. (B) Temsilcisi aydınlık (BR) ve FL1/FL2 (yeşil / kırmızı) AO / PI lekeli H kombine görüntüleri . capsulatum parçalanmış RAW 264.7 makrofaj serbest. Büyük PI-lekeli RAW 264.7 makrofajlar (kırmızı) hariç ise bir segmentlere algoritması floresan görüntüler sadece AO ve PI pozitif mayalar sayılır. Görüntüler 10X büyütme altında ele geçirildi. (C) maya çoğalması doğrudan karşılaştırma AO / PI boyama ve CFU numaralandırma ile değerlendirildi. CFU ve Cellometer analizi verim: R2 = 0,9927 ile ölçülen şekilde, büyüme eğilimleri lineer regresyon analizi./ Files/ftp_upload/50599/50599fig1large.jpg "target =" _blank "> büyük rakam görmek için buraya tıklayın.
Şekil 2. ° C arasında bir GFP-ifade suşu ile enfeksiyon BMDM Niceleme albicans. (a) Yakalanan aydınlık (BR) (üst) ve GFP-C floresan (orta) görüntüleri albicans İçişleri Bakanlığı artırmayı BMDMs enfekte. Floresans yoğunlukları histogramları sayısı C bir artışı temsil etmektedir İB arttıkça GFP floresan yoğunluğunda bir artış göstermektedir albicans BMDM hücreleri (alt) ile ilişkili. Yazılım, enfekte olmamış kontrol popülasyonu (MOI = 0) tarafından gösterilen baz floresan yoğunluğu olarak doğrusal bir marker uygulamaya göre enfekte BMDMs tespit edilmiştir. (B) Yüzde infection İçişleri Bakanlığı, İçişleri Bakanlığı arttıkça enfekte BMDMs bir artış gösteren. bir fonksiyonu olarak büyük rakam görmek için buraya tıklayın .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Resim sitometri kullanıcı yüksek kaliteli çekim ve, özel yazılım kullanarak, hücrelerin hızlı ölçümü yapmak için izin verir. Mikrobiyal patogenez alanında görüntü sitometrisi benimsenmesine bir potansiyel bir sorun sayılması için mikrop memeli konak hücreleri arasında hücre, karışık bir popülasyonu içinde mevcut olmasıdır. Burada, görüntü sitometri in vitro makrofaj enfeksiyon sırasında canlı patojenik maya ölçümü için kullanılabilir olduğunu göstermektedir. Bizim yöntem, in vitro makrofaj enfeksiyon deneyleri sırasında görülen mantar büyüme ve yaşama kabiliyeti sadakatle özetler eğilimleri, aynı zamanda geleneksel CFU tahlili 13 kıyasla iyileştirilmiş duyarlılık gösterir sadece.
Maya hücrelerinin ölçümü için CFU numaralandırma veya akım sitometri ya kıyasla Resim sitometri birkaç pratik avantajlar sunuyor. CFU kaplama zaman, laboratuar çalışanları plaka birkaç dilut gerekirçok emek-yoğun olabilir her plaka, bir hücre sayılabilir dizi sağlamak için iyonlar. Resim sitometrisi birden dilüsyonları için olan ihtiyacı ortadan kaldırır. Daha önce, katı ortam üzerinde koloni oluşumu genellikle değişken olduğunu göstermiştir, ve görüntü sitometri konsantrasyonu 13 bağımsız hücre sayımı sağlayan ise çok düşük konsantrasyonlarda mantar da, hiç koloniler oluşturmak için başarısız olabilir. Çok düşük konsantrasyonlarda mantar tespit etmek ve saymak yeteneği düşük doz enfeksiyonun erken aşamalarında çok yararlı olabilir, ya da boşluk sırasında, zaman numaraları ve canlılığı algılama marjı altında olabilir. Koloniler görünür olmak için birkaç gün sürebilir oysa Ayrıca, görüntü sitometri tarafından oluşturulan veri, anında kullanılabilir. Birçok mantar türleri flow sitometri ile tespit edilebilir olsa da, çapraz kontaminasyon olasılığı ortak tesislerinde bir husustur. Bu disposab olduğu gibi bu çalışmada kullanılan sayım bölmesinde, biyo-güvenlik açısından önemli bir avantaj sunarle ve kendi kendine yeten. Küçük araştırma laboratuarları 11 önemli olabilir geleneksel akım sitometri ile karşılaştırıldığında Ayrıca, görüntü sitometri düşük fiyat ve daha küçük bir ayak izi pratik avantajlar sunuyor.
Pratik avantajlara ek olarak, maya hücrelerinin görüntü sitometri bilgi sağlar CFU numaralandırma yapamam. İlk olarak, CFU numaralandırma doğru gerçek zamanlı bir enfeksiyon deney mevcut canlı mantar sayısını temsil olmayabilir seçilen orta, koloni büyüme kuruncaya mantar tespit edebilmektedir. Ayrıca, katı ortam üzerinde koloni gelişimini kurma yeteneği deneysel önyargı 14. kaynağı olabilir mantar yabani tip ve mutant suşlar, karşılaştırırken farklı olabilir, ve bu gizli önyargıları görüntü sitometri ve CFU miktar karşılaştırılması ile ortaya olabilir Yabani tip ve mutant. Belirli bir gerilme davranışı bo ile karakterize edilmiştir kezinci CFU numaralandırma ve görüntü sitometri, biz bu görüntü sitometri mantar miktarının alternatif bir araç olarak kullanılabilir inanıyoruz.
Genel olarak görüntü sitometri biri sınırlama akım sitometri olduğu kadar çok veri noktası toplanması izin vermez olmasıdır. Görüntü sitometresinin çekilen görüntülerin sınırlı sayıda nicel veriler elde beri sistem örnek başına hücre milyonlarca yüz binlerce hakkında veri toplamak için, zordur. Ancak, bu sınırlama bir akış sitometresinin benzer veri noktaları ulaşmak için analiz için tek bir veri kümesi birden çok örnekleri gruplayarak hile olabilir. Ayrıca burada kullanılan AO / PI boyama yöntemi hücresel canlılığı ölçmenin bir yolu temsil eder ve mutlaka hücresel canlılık ve / veya herhangi bir örnek katı ortam üzerinde büyüme kurma yeteneği göstermez vurgulamak istiyorum. Bu nedenle, süre bizim yöntemi, maya canlı / ölü miktar bir basit yöntem sağlarayrıca FUN-1 15 gibi hücre metabolizması göstergeleri ile birlikte görüntü sitometrisinin kullanımını araştırmak için ilginç olacak.
Resim sitometri yazılımını belirtir ve sayar ilgi hücreleri büyüklüğü ve şekline göre, ve bu nedenle, bu parametrelerin her deney sırasında dikkatli ayarlanır kesinlikle önemlidir. Yeni bir maya suşu ile görüntü sitometri yaparken, biz bir ilk parametreleri yazılım ayırt edebilirsiniz şekilde ayarlanmış olduğundan emin olmak için maya artı ev sahibi hücrelerin karışımı sayım üretilen verilere saf maya kültürü üretilen verileri karşılaştırmak öneririz iki hücre tipi.
Gelecekte, bu işin resmi sitometri ile mikroplar tespit ve ölçmek için yöntemler daha da geliştirilmesi için temel olacaktır. Örneğin, organ homojenatlarındaki içinde mantar tespit etmek için görüntü sitometrik yöntemler geliştirilmesi alanında büyük faydalı olacaktır. Başka bir gelecekte sorun d olacakgörüntü sitometrik yöntem ve bakteri hücrelerinin ölçümü için kullanılabilecek böyle bir yazılım evelop ve rafine. Optik sistemler, dijital kameralar, ve konsantrasyon ve canlılık ya da canlılık ölçümü için daha hızlı bir yöntem sağlayabilir alanında floresan lekeleri geniş bir yelpazede, yetenek görüntü ve bakteri nüfusu analiz görüntü sitometrelerinde uygulanabilir, ilerleme ile CFU ya da optik yoğunluğu yöntemlere göre. Özet olarak, burada sunulan çalışma görüntü sitometri patojenik maya ölçümü için hassas bir yöntem olduğunu gösteren bir proof-of-kavramdır. Görüntü tabanlı sitometrik analiz yazılımı sofistike bir yüksek kantitatif bir şekilde ev sahibi hücreler ve patojenik mantarlar arasındaki etkileşimleri analiz için bir fırsat sunuyor. Bu teknoloji mantar patogenezinde alanında araştırma soruları bir dizi ele adapte olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar Leo Li-Ying Chan ve Benjamin Paradis Nexcelom Biyobilim LLC çalışanlarıdır.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| REAGENTS | |||
| DMEM | Life Technologies | 11965-084 | |
| Fetal Bovine Serum | Life Technologies | 16000044 | |
| AO/PI Solution | Nexcelom Bioscience | CSK-0102 | |
| Disposable Counting Chamber | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | |
| EQUIPMENT | |||
| Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | ||
| Cellometer Vision Software | Nexcelom Bioscience | ||
References
- Worsham, P. L., Goldman, W. E. Quantitative plating of Histoplasma capsulatum without addition of conditioned medium or siderophores. J. Med. Vet. Mycol. 26, 137-143 (1988).
- Goihman-Yahr, M., Pine, L., Albornoz, M. C., Yarzabal, L., de Gomez, M. H., San Martin, B., Ocanto, A., Molina, T., Convit, J. Studies on plating efficiency and estimation of viability of suspensions of Paracoccidioides brasiliensis yeast cells. Mycopathologia. 71, 73-83 (1980).
- Bhatti, M. A., Hjertstedt, J., Hahn, B. L., Sohnle, P. G. Inefficient delivery of yeast cells as an explanation for reduced plating efficiency of Candida albicans. Med. Mycol. 40, 465-469 (2002).
- Chang, W. L., vander Heyde, H. C., Klein, B. S. Flow cytometric quantitation of yeast: a novel technique for use in animal model work and in vitro immunologic assays. Journal of Immunological Methods. 211, 51-63 (1998).
- Green, L., Petersen, B., Steimel, L., Haeber, P., Current, W. Rapid determination of antifungal activity by flow cytometry. Journal of Clinical Microbiology. 32, 1088-1091 (1994).
- Kirk, S. M., Callister, S. M., Lim, L. C., Schell, R. F. Rapid susceptibility testing of Candida albicans by flow cytometry. Journal of Clinical Microbiology. 35, 358-363 (1997).
- Chan, L. L. -Y., Lai, N., Wang, E., Smith, T., Yang, X., Lin, B. A rapid detection method for apoptosis and necrosis measurement using the Cellometer imaging cytometry. Apoptosis. 16, 1295-1303 (2011).
- Chan, L. L. -Y., Shen, D., Wilkinson, A. R., Patton, W., Lai, N., Chan, E., Kuksin, D., Lin, B., Qiu, J. A novel image-based cytometry method for autophagy detection in living cells. Autophagy. 8, 1371-1382 (2012).
- Chan, L. L., Wilkinson, A. R., Paradis, B. D., Lai, N. Rapid Image-based Cytometry for Comparison of Fluorescent Viability Staining Methods. Journal of Fluorescence. 22, 1301-1311 (2012).
- Chan, L. L., Zhong, X., Pirani, A., Lin, B. A novel method for kinetic measurements of rare cell proliferation using Cellometer image-based cytometry. J. Immunol. Methods. 377, 8-14 (2012).
- Chan, L. L., Zhong, X., Qiu, J., Li, P. Y., Lin, B. Cellometer Vision as an alternative to flow cytometry for cell cycle analysis, mitochondrial potential, and immunophenotyping. Cytom. Part A. 79, 507-517 (2011).
- Hull, C. M., Johnson, A. D. Identification of a mating type-like locus in the asexual pathogenic yeast Candida albicans. Science. 285, 1271-1275 (1999).
- Berkes, C. A., Chan, L. L., Wilkinson, A., Paradis, B. Rapid Quantification of Pathogenic Fungi by Cellometer Image-Based Cytometry. J. Micro. Meth. 91, 468-476 (2012).
- Nguyen, V. Q., Sil, A. Temperature-induced switch to the pathogenic yeast form of Histoplasma capsulatum requires Ryp1, a conserved transcriptional regulator. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (12), 4880-4885 (2008).
- Wenisch, C., Linnau, K. F., Parschalk, B., Zedtwitz-Liebenstein, K., Georgopoulos, A. Rapid susceptibility testing of fungi by flow cytometry using vital staining. Journal of Clinical Microbiology. 35, 5-10 (1997).
