Bu kağıt sıçan yavrularının dokunsal uyarım ve nöronal morfoloji sonraki Golgi-Cox boyama işlemleri anlatılmaktadır. Dokunsal uyarım bir ev silgi ile yavrular okşayarak tarafından perinatal dönemde uygulanır olumlu bir deneyim olduğunu. Golgi-cox boyama tüm nöronların görüntülenmesine olanak güvenilir bir işlemdir.
Davranışlarında uzun dönemli değişiklikleri oluşturmak için, deneyimleri nöronal morfoloji ve sinaptik bağlantı istikrarlı değişiklikleri üreten gerekir. Tactile stimülasyon taklit yalama ve sıçan damat anne olumlu bir erken deneyimdir. Bu olumlu bir deneyim sıçan yavrular açığa böyle bir ev silgi gibi son derece erişilebilir malzemeler kullanılarak kolayca ve maliyet-etkin bir şekilde tamamlanabilir. Çapraz çöp tasarım kullanarak, yavrular ya 15 dakika, perinatal dönem boyunca, günde üç kez, okşadı veya rahatsız bırakılır. Bu olumlu bir erken deneyimle ilişkili nöroplastik değişiklikleri ölçmek için, beyin dokusunun Golgi-Cox boyama kullanılmaktadır. Golgi-Cox emdirme yerine tüm hücreleri daha nöron ayrı bir dizi leke gerçeği nedeniyle, Golgi-Cox çözeltisi ile kemirgen beyin boyama hücre gövdesi, dendrit aksonlar dahil tüm nöronal elementlerin görselleştirme izin verir, ve dendritik dikenler. Boyama işlemi is birkaç gün içinde yürütülen ve araştırmacı detaylara çok dikkat gerektirir. Boyama tamamlandıktan sonra, ancak, tüm beyin emprenye edilmiş ve devam eden analiz için süresiz muhafaza edilebilir. Bu nedenle, Golgi-Cox boyama deneyim-bağımlı plastisitesini eğitim için değerli bir kaynaktır.
Böyle perinatal stres 1,2, duyusal yoksunluk 3 ve ilaç toksisitesi 4 olarak beyin olgunlaşması üzerinde olumsuz erken deneyimlerin incelenmesi için birçok rapor ve kullanılan teknikler olmasına rağmen, olumlu deneyimlerin etkilerini incelemek için kullanılan çok az metodolojileri vardır Bu süre. Yanı sıra, çevre zenginleştirmeden, dokunsal uyarım etkileri gösterdi 5 ile tedavi arttırıcı birkaç beyin biridir. Tactile uyarım yalama ve tımar maternal sıçan davranışını taklit eden, deriye duyusal uyarma yöntemidir. Olumlu bir manipülasyon olarak genel kabul dokunsal uyarım prematüre bebeklerde ve yenidoğan ratlarda 6 olgunlaşmasını geliştirilmiş belirten çalışmalardan kaynaklanmaktadır. Buna ek olarak, Meaney laboratuarda 7 araştırma maternal yalama ve bakım daha yüksek seviyeleri yavru olumlu sonuçlarla bağlantılı olduğunu göstermiştir. T sayesindeHese olumlu etkiler, dokunsal uyarım hızla, anksiyete 8 azaltarak beyin hasarı 9-11 ile ilişkili sonuçların iyileştirilmesi ve uyuşturucu hassasiyete 12 alçaltarak amaçlayan bir iyileştirici stratejisi haline. Gibi, dokunsal uyarım dramatik nöronal morfoloji ve gelişmekte olan beynin sinaptik bağlantı yeniden düzenlemek için kanıtlanmış yeteneği ile pozitif erken deneyimleri tanıtımı için değerli bir tekniktir.
Incelemek ve nöronal morfoloji değişiklikleri ölçmek amacıyla, bu sağlam nöronlar görselleştirmek için gereklidir. Golgi-Cox boyama işlemi tamamlandı nöronların 13 az sayıda ayrık boyanmasını sağlayan 1800'lerin sonunda yayınlanan Camillo Golgi tekniğinin bir değişikliktir. Prosedür rastgele ve uyarlık yaygın ce de dahil olmak üzere büyük kusur, tüm nöronal elemanın küçük emprenye oranı izinleri görselleştirme, olarak anılan nöronların leke için görünür, ancakll organları, dendritler, dendritik dikenler ve aksonlar. Benzer şekilde, Golgi solüsyonu ile emprenye edilmesi, belirli bir beyin için gereken zaman da bir düşüş olarak atıf edilmiştir. Ancak, boyama, tam doku süresiz korunmuş olabilir, ve bir mikroskop ile nöronların beyin ve görselleştirme perfüzyon arasındaki süre en az 21 gün içinde tamamlanabilir bir kez, süre mantıksız olmadığını verilen. Buna ek olarak, protokol küçük değişikliklerle, Golgi-Cox boyama etkin bir şekilde tüm yaş aralıkları kemirgenler beyinleri emprenye edilmesi için de kullanılabilir. Yapısal düzeyde değişiklikler davranışsal ve psikolojik işleyişi kalıcı değişikliklere bağlı olduğu gibi, Golgi-Cox boyama tekniği nöroplastisiteyi ölçmek için değerli bir araç ile araştırmacılar sağlar.
Gelişmekte olan beynin açık plastisite nedeniyle, erken deneyimleri içeren deneysel prosedürleri iyice gözden geçirilir ve girişimleri tüm müdahale değişkenler için kontrol yapılmış olması önemlidir. Bu nedenle, bir çapraz çöp tasarım yavruların gelişiminin tüm diğer etki benzer deneyimleri almalarını sağlamak için dokunsal uyarım işlemi sırasında kullanılır. Buna ek olarak, çok sayıda litre birden yavrular etkiler, tek bir yavru veya çöp bir önyargı sonucu olasılığını önlemek için analiz için seçilir olması da önemlidir.
Dokunsal uyarım yalama ve yavru gelişimi için yararlı olduğu düşünülmektedir ki, tımar, doğal olarak oluşan annelik davranışlarını taklit inanılmaktadır. Önceki bir araştırma yaşamın ilk haftası (P0-P7) 16 yalama ve bakım için kritik bir dönem olduğu vurgulanmaktadır olmasına rağmen, değişim sırf büyüklüğü ta 18 gün sonra tespitctile stimülasyon duyarlı kez bulunmasına rağmen, uzun pozlama üstün olduğunu ima edebilir. Bu deneysel paradigma dokunsal uyarım alan yavrular da dolayısıyla dokunsal uyarım anne tarafından yönetilen normal bir uyarılmaya ek olarak, anneleri tarafından yalama ve damat yaşamaya dikkat etmek de önemlidir. Son olarak, aynı zamanda bölge bağımlı değişikliklerin farkında olmalıdır. Gelişimi sırasında dokunsal uyarım prefrontal korteks dendritik karmaşıklığı artmasına rağmen, bu nitelikteki yapısal değişiklikleri tüm beyin bölgelerinde belirgin olacağını garanti etmez. Bu tür parietal korteks gibi diğer beyin bölgelerinde nöronal morfoloji, aynı deneyimi için çarpıcı farklı bir şekilde tepki olasıdır. Dokunsal uyarım prosedür kolayca uygulanır ve yavrular ya da baraj için hiçbir risk teşkil çünkü Ancak, kalkınmayı geliştirmeyi amaçlayan pek çok araştırma için değerli bir araç olarak hizmet potansiyeline sahiptiral belirsizdir.
Aşağıdaki gibi beyin dokusu Golgi-Cox boyanması ile ilgili olarak, nöronal hücre başarılı bir görünüm için önemli adımlar şunlardır: 1) tuz çözeltisi ile, beynin yeterli perfüzyon olmalıdır. Ayrıca lekeli nöronlar fotoğraflamak için yeteneği zorlaştıran ise zor aslında, kan damarlarının labirent aracılığıyla nöronal hücreleri görselleştirmek için yapmak kan damarı eserler beyin dokusu sonuçlarının yanlış veya yetersiz perfüzyon. 2) perfüze beyinleri Golgi-Cox çözeltisi ve karanlıkta sukroz çözeltisi içinde saklanmalıdır. Karanlıkta beyin dokusu depolanması daha başarılı bir şekilde kaliteli bir nöronal hücrelerini görselleştirme şansı artan doku arka plan boyama azaltır. 3) Beyin dokusu Golgi-Cox çözelti içinde, 14 günlük depolama aşağıdaki sakroz çözeltisi içinde saklanır. Doku 2-5 gün için% 30 sukroz çözeltisi içine daldırıldığında, beyin ve yıkıcı bölme yırtılmasını engeller yumuşadığı zamankesim. Bu (sükroz solüsyonu sürekli olarak taze çözelti ile değiştirildiği sürece) sukroz içinde uzun süreli depolama boyama kalitesini düşürür artış nedeniyle zaman dönemleri için sakroz çözeltisi içinde kalan beyin dokusu önlemek için önemlidir. Slaytlar lekeli edilmiş ve kapağı kayması kez 4) Son olarak, bir mikroskop ile görselleştirme önce kuruması için yeterli zaman verilmelidir. Slaytlar yeterince kuru hava için izin verilmediği takdirde, doku kortikal nöronların başarılı görselleştirme azaltarak, koyulaşabilir.
Deneyimlere tepki olarak ortaya psikolojik işleyişi ve davranışsal tepkilerin istikrarlı değişiklikler nöronal morfoloji ve sinaptik bağlantı 17 Reorganizasyon kolaylaştırdı olduğuna inanılmaktadır. Bu yapısal değişiklikler deneyim-bağımlı plastisite için ölçülebilir bir kaynak sağlamak gibi, güvenilir bir boyama prosedürünün kullanımı önemlidir. Bu vibratome göre Golgi-Cox boyama işlemi güvenilir bir leke sağlarBöyle celloidin-gömme gibi diğer protokolleri ile belirgin olmayabilir ince dalları ve dendritik dikenler ING. Golgi-Cox prosedürün açıklık sadece uzun mesafeler için tek bir izleme nöronlarının nöronal izin elemanları (% 1-10), küçük bir kısmını leke kapasitesi kaynaklanmaktadır. Nöron sadece küçük bir kısmı leke ile emprenye edilir gerçeğine rağmen, görünür işlenen hücreler, hücre gövdesi, dendrit dendritik dikenler ve akson dahil olmak üzere tüm özellikleri taşır. Diğer kortikal yapılar unstained ve şeffaf kalır çünkü Ayrıca, boyama prosedür doğru yapıldığında, lekeli hücreler şeffaf bir arka plana karşı açık ve seçik olarak göze çarpıyor. Dışa doğru işleyişi kalıcı değişiklikler, sinir sisteminin plastisite ile ilişkili olması gerektiğini gerçekleştirilmesi nedeniyle, yapı ve bağlantı değiştirmek için nöronların yeteneği, yani, Golgi-Cox boyama işlemi ile araştırmacılar sağlayan birBu plastisitesini görselleştirmek ve ölçmek için güvenilir bir tekniktir.
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma BK ve RG NSERC hibe tarafından finanse edilmektedir. Yazarlar ayrıca, Golgi-Cox boyama uzmanlık için Kehe Xie'yi ve Russell Hosain teşekkür etmek istiyorum.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Potassium Dichromate | Fisher | P188 | |
Mercuric Chloride | Fisher | M1561 | |
Potassium Chromate | Fisher | P220 | |
Ammonium Hydroxide | Fisher | A669-500 | |
Kodak Rapid Fix | Vistek | Kodak 146 4016 | |
EtOH-95 & Anhydrous | Commercial Alcohols | No Cat Numbers | All other Et-OH are dilutions |
Swiffers- Soft Feather-Like dusters | Safeway | Can be found at most grocery stores | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S-9378 | |
HemoDe | Electron Microscopy Sciences | 23410 | |
Permount | Fisher | Sp15 | |
Slides | VWR | 160004-365 | |
Coverslips | VWR | 062011-9 |