इस पत्र में चूहे पिल्ले का स्पर्श उत्तेजना और neuronal आकारिकी के बाद Golgi-कॉक्स धुंधला के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन है. स्पर्श उत्तेजना एक घर डस्टर से पिल्ले पथपाकर द्वारा प्रसवकालीन अवधि में किया जाता है कि एक सकारात्मक अनुभव है. Golgi-कॉक्स धुंधला पूरे न्यूरॉन्स के दृश्य की अनुमति एक विश्वसनीय प्रक्रिया है.
व्यवहार में दीर्घकालीन परिवर्तन उत्पन्न करने के लिए, अनुभवों neuronal आकारिकी और synaptic संपर्क में स्थिर परिवर्तन का निर्माण किया जाना चाहिए. स्पर्श उत्तेजना mimics चाट और चूहे में संवारने मातृक कि एक सकारात्मक जल्दी अनुभव है. इस सकारात्मक अनुभव को चूहे पिल्ले को उजागर ऐसे एक घर डस्टर के रूप में अत्यधिक सुलभ सामग्री का उपयोग करके आसानी से और लागत प्रभावी ढंग से पूरा किया जा सकता है. एक पार कूड़े डिजाइन का प्रयोग, पिल्ले या तो 15 मिनट, प्रसवकालीन अवधि के दौरान प्रति दिन तीन बार के लिए, stroked या undisturbed छोड़ दिया जाता है. इस सकारात्मक जल्दी अनुभव से संबंधित तंत्रिकाजाल बदलाव को मापने, मस्तिष्क के ऊतकों की Golgi-कॉक्स धुंधला उपयोग किया जाता है. Golgi-कॉक्स संसेचन बल्कि सभी कक्षों की तुलना में न्यूरॉन्स की एक असतत संख्या दाग है कि इस तथ्य के कारण, Golgi-कॉक्स समाधान के साथ कृंतक मस्तिष्क का धुंधला सेल शरीर, dendrites, axons सहित पूरे neuronal तत्वों, के दृश्य परमिट, और वृक्ष के समान spines. धुंधला प्रक्रिया मैंएस कई दिनों से बाहर ले गए और शोधकर्ता विस्तार के लिए करीब ध्यान देना आवश्यक है. धुंधला पूरा हो गया है हालांकि, एक बार पूरे मस्तिष्क गर्भवती कर दिया गया है और चल रहे विश्लेषण के लिए अनिश्चित काल के लिए संरक्षित किया जा सकता है. इसलिए, Golgi-कॉक्स धुंधला अनुभव पर निर्भर plasticity के अध्ययन के लिए एक बहुमूल्य संसाधन है.
ऐसे प्रसवकालीन तनाव 1,2, संवेदी अभाव 3, और दवा विषाक्तता के रूप में 4 मस्तिष्क परिपक्वता पर नकारात्मक जल्दी अनुभवों, की परीक्षा के लिए कई सूचना दी और उपयोग तकनीकों हैं हालांकि, में सकारात्मक अनुभवों के प्रभाव की जांच करने के लिए नियोजित बहुत कुछ तरीके होते हैं इस समय अवधि. एक तरफ पर्यावरण संवर्धन से, स्पर्श उत्तेजना का प्रदर्शन प्रभाव 5 के साथ उपचार बढ़ाने के कुछ दिमाग में से एक है. स्पर्श उत्तेजना चाट और संवारने, मातृ चूहे व्यवहार mimics है कि त्वचा के लिए संवेदी उत्तेजना का एक तरीका है. एक सकारात्मक हेरफेर के रूप में अपने सामान्य स्वीकृति स्पर्श उत्तेजना समय से पहले शिशुओं और नवजात चूहों 6 की परिपक्वता सुधार का संकेत है कि पढ़ाई से उत्पन्न होती है. इसके अलावा, Meaney प्रयोगशाला 7 में अनुसंधान मातृ चाट और सौंदर्य के उच्च स्तर संतानों में सकारात्मक परिणाम के लिए जुड़े हुए हैं कि प्रदर्शन किया है. टी के कारणhese सकारात्मक प्रभाव पड़ता है, स्पर्श उत्तेजना तेजी, चिंता 8 को कम करने के लिए मस्तिष्क की चोट 9-11 के साथ जुड़े परिणामों में सुधार लाने, और दवा संवेदीकरण 12 attenuating के उद्देश्य से एक उपचारात्मक रणनीति में विकसित हुआ. जैसे, स्पर्श उत्तेजना नाटकीय रूप से neuronal आकारिकी और विकासशील मस्तिष्क की synaptic कनेक्टिविटी के पुनर्निर्माण के लिए एक साबित करने की क्षमता के साथ सकारात्मक जल्दी अनुभवों को बढ़ावा देने के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है.
जांच और neuronal आकारिकी में बदलाव यों के लिए, इसे बरकरार न्यूरॉन्स कल्पना करने के लिए आवश्यक है. Golgi-कॉक्स धुंधला प्रक्रिया पूरी न्यूरॉन्स 13 की एक छोटी संख्या के असतत धुंधला प्रदान करता है कि 1800 के अंत में प्रकाशित Camillo Golgi की तकनीक के एक संशोधन है. प्रक्रिया यादृच्छिक और reproducibility सामान्यतः CE सहित प्रमुख दोष, पूरे neuronal तत्व के छोटे संसेचन दर परमिट दृश्य, के रूप में पेश किया जाता है पर न्यूरॉन्स दाग दिखाई देता है हालांकिडालूँगा निकायों, डेन्ड्राइट, वृक्ष के समान spines, और axons. इसी तरह, Golgi समाधान के साथ दिया मस्तिष्क व्याप्त करने के लिए आवश्यक समय भी एक पतन के रूप में उद्धृत किया गया है. हालांकि, धुंधला पूरा ऊतक अनिश्चित काल के लिए संरक्षित किया जा सकता है, और एक खुर्दबीन के साथ न्यूरॉन्स के मस्तिष्क और दृश्य के छिड़काव के बीच समय कम से कम 21 दिनों में पूरा किया जा सकता है एक बार, समय अवधि अनुचित नहीं है कि दिए गए. इसके अलावा, प्रोटोकॉल को मामूली संशोधनों के साथ, Golgi-कॉक्स धुंधला प्रभावी रूप से सभी आयु वर्ग से कृन्तकों के दिमाग व्याप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. संरचनात्मक स्तर पर परिवर्तन व्यवहार और मनोवैज्ञानिक कामकाज को लगातार संशोधन करने के लिए जोड़ा गया है के रूप में, Golgi-कॉक्स धुंधला तकनीक neuroplasticity को मापने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करता है.
विकासशील मस्तिष्क के प्रकट plasticity के कारण, यह जल्दी अनुभवों को शामिल प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं को अच्छी तरह से समीक्षा कर रहे हैं और प्रयास सभी हस्तक्षेप चर के लिए नियंत्रित करने के लिए किए गए हैं जो महत्वपूर्ण है. इस कारण से, एक क्रॉस कूड़े डिजाइन पिल्ले विकास के सभी अन्य डोमेन में इसी तरह के अनुभव प्राप्त कर रहे हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए स्पर्श उत्तेजना प्रक्रिया के दौरान कार्यरत है. इसके अलावा, यह कई litters से कई पिल्ले प्रभाव एक भी पिल्ला या कूड़े में एक पूर्वाग्रह से होने वाली संभावना से बचने के विश्लेषण के लिए चयन कर रहे हैं कि यह भी महत्वपूर्ण है.
स्पर्श उत्तेजना चाट और संतानों के विकास के लिए फायदेमंद माना जाता है, जो सौंदर्य, स्वाभाविक रूप से होने वाली मातृ व्यवहार की नकल करने के लिए माना जाता है. पूर्व अनुसंधान जीवन के पहले सप्ताह (P0-P7) 16 चाट और संवारने के लिए एक महत्वपूर्ण अवधि के होने की बात पर जोर दिया गया है, परिवर्तन की सरासर परिमाण प्रादेशिक सेना के 18 दिनों के बाद पहचानctile उत्तेजना संवेदनशील बार मौजूद हैं, अब जोखिम बेहतर है कि संकेत हो सकता है. यह इस प्रयोगात्मक प्रतिमान में स्पर्श उत्तेजना प्राप्त पिल्ले भी इसलिए स्पर्श उत्तेजना मां द्वारा प्रशासित सामान्य उत्तेजना के अतिरिक्त है, उनकी माताओं द्वारा चाट और सौंदर्य का अनुभव भी ध्यान दें कि महत्वपूर्ण है. अंत में, एक भी क्षेत्र पर निर्भर परिवर्तन का जानकार होना चाहिए. विकास के दौरान स्पर्श उत्तेजना प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में वृक्ष के समान जटिलता में वृद्धि हुई है, यह इस प्रकार की संरचनात्मक परिवर्तनों सभी मस्तिष्क क्षेत्रों में स्पष्ट हो जाएगा कि गारंटी नहीं है. यह ऐसी पार्श्विका प्रांतस्था के रूप में अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों में neuronal आकारिकी, उसी अनुभव को एक strikingly अलग ढंग से प्रतिक्रिया देंगे कि संभव है. स्पर्श उत्तेजना प्रक्रिया आसानी से प्रशासित और वंश या बांधों के लिए कोई खतरा बन गया है क्योंकि हालांकि, यह विकास में सुधार लाने के उद्देश्य से कई शोध अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में काम करने की क्षमता हैअल परिणामों.
इस प्रकार के रूप में मस्तिष्क के ऊतकों की Golgi-कॉक्स धुंधला करने के लिए सम्मान के साथ, neuronal कोशिकाओं के सफल दृश्य के लिए महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं: 1) नमकीन घोल के साथ मस्तिष्क की पर्याप्त छिड़काव होना चाहिए. भी दाग न्यूरॉन्स तस्वीर करने के लिए क्षमता उलझी जबकि यह मुश्किल है, वास्तव में रक्त वाहिकाओं की भूलभुलैया के माध्यम से neuronal कोशिकाओं कल्पना करने के लिए बना है कि रक्त वाहिनियों की कलाकृतियों में मस्तिष्क के ऊतकों के परिणाम की अनुचित या अपर्याप्त छिड़काव. 2) perfused दिमाग Golgi-कॉक्स समाधान और अंधेरे में sucrose के समाधान में संग्रहित किया जाना चाहिए. अंधेरे में मस्तिष्क के ऊतकों के संचय फिर सफलतापूर्वक गुणवत्ता neuronal कोशिकाओं visualizing के अवसर बढ़ाने, ऊतक की पृष्ठभूमि धुंधला कम कर देता है. 3) मस्तिष्क ऊतक Golgi-कॉक्स समाधान में 14 दिन का भंडारण निम्नलिखित sucrose के समाधान में संग्रहीत किया जाता है. ऊतक 2-5 दिनों के लिए 30% sucrose के समाधान में डूब जाता है, तो दिमाग बिखरता और वर्गों की फाड़ रोकता है जो अधिक लचीला कर रहे हैं जबकाटने. यह (sucrose के समाधान के लिए लगातार ताजा समाधान के साथ बदल जाता है जब तक) सुक्रोज में लंबे समय तक भंडारण धुंधला गुणवत्ता को कम कर देता है क्योंकि वृद्धि की समय अवधि के लिए sucrose के समाधान में शेष से मस्तिष्क के ऊतकों को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है. स्लाइड दाग दिया गया है और कवर फिसल एक बार 4) अंत में, वे एक खुर्दबीन के साथ दृश्य से पहले सूखे की पर्याप्त समय दिया जाना चाहिए. स्लाइड पर्याप्त रूप से शुष्क हवा करने की अनुमति नहीं कर रहे हैं, ऊतक cortical न्यूरॉन्स के सफल दृश्य को कम करने, काला कर सकता है.
अनुभवों के जवाब में होते हैं कि मनोवैज्ञानिक कार्य और व्यवहार प्रतिक्रियाओं में स्थिर परिवर्तन neuronal आकारिकी और synaptic कनेक्टिविटी 17 के पुनर्गठन से मदद की जा करने के लिए माना जाता है. इन संरचनात्मक परिवर्तनों के अनुभव पर निर्भर plasticity के लिए एक औसत दर्जे का संसाधन उपलब्ध कराने के रूप में, एक विश्वसनीय धुंधला प्रक्रिया का उपयोग महत्वपूर्ण है. इस vibratome आधारित Golgi-कॉक्स धुंधला प्रक्रिया विश्वसनीय दाग प्रदान करता हैऐसे celloidin-embedding के रूप में अन्य प्रोटोकॉल के साथ स्पष्ट नहीं हो सकता है कि ठीक शाखाओं और वृक्ष के समान spines के आईएनजी. Golgi-कॉक्स प्रक्रिया की विशिष्टता केवल लंबी दूरी के लिए एकल न्यूरॉन्स की ट्रेसिंग जो परमिट neuronal तत्वों (1-10%), का एक छोटा सा अंश दाग अपनी क्षमता से उपजा है. न्यूरॉन्स का केवल एक छोटा सा अंश दाग के साथ गर्भवती हैं कि इस तथ्य के बावजूद, दिखाई प्रदान कर रहे हैं कि कोशिकाओं, सेल शरीर, डेन्ड्राइट, वृक्ष के समान spines और axons सहित सभी सुविधाओं को बनाए रखने. अन्य cortical संरचनाओं बेदाग और पारदर्शी रहना क्योंकि इसके अलावा, धुंधला प्रक्रिया सही ढंग से किया जाता है, जब दाग कोशिकाओं एक पारदर्शी पृष्ठभूमि के खिलाफ स्पष्ट रूप से और स्पष्ट रूप से बाहर खड़े हो जाओ. जावक कामकाज में लगातार परिवर्तन तंत्रिका तंत्र के plasticity से संबंधित होना चाहिए कि प्राप्ति के कारण, उनकी संरचना और कनेक्टिविटी को संशोधित करने के न्यूरॉन्स की क्षमता यानी, Golgi-कॉक्स धुंधला प्रक्रिया के साथ शोधकर्ताओं प्रदान करता है एकइस plasticity कल्पना और यों को विश्वसनीय तकनीक.
The authors have nothing to disclose.
इस काम बीके और आरजी को NSERC अनुदान द्वारा वित्त पोषित है. लेखकों को भी उनके Golgi-कॉक्स धुंधला विशेषज्ञता के लिए Kehe झी और रसेल Hosain धन्यवाद देना चाहूंगा.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Potassium Dichromate | Fisher | P188 | |
Mercuric Chloride | Fisher | M1561 | |
Potassium Chromate | Fisher | P220 | |
Ammonium Hydroxide | Fisher | A669-500 | |
Kodak Rapid Fix | Vistek | Kodak 146 4016 | |
EtOH-95 & Anhydrous | Commercial Alcohols | No Cat Numbers | All other Et-OH are dilutions |
Swiffers- Soft Feather-Like dusters | Safeway | Can be found at most grocery stores | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S-9378 | |
HemoDe | Electron Microscopy Sciences | 23410 | |
Permount | Fisher | Sp15 | |
Slides | VWR | 160004-365 | |
Coverslips | VWR | 062011-9 |