Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Visualiseren van de effecten van een positieve vroege Experience, Tactiel Stimulatie, op dendritische morfologie en Synaptic Connectiviteit met Golgi-Cox kleuring

doi: 10.3791/50694 Published: September 25, 2013

Summary

Dit artikel beschrijft de procedures voor de tactiele stimulatie van pups rat en de daaropvolgende Golgi-Cox kleuring van neuronale morfologie. Tactiele stimulatie is een positieve ervaring die wordt toegediend in de perinatale periode door strelen pups met een huishouden stofdoek. Golgi-cox kleuring is een betrouwbare procedure waardoor de visualisatie van hele neuronen.

Abstract

Om op langere termijn veranderingen in gedrag te genereren, moeten ervaringen produceren stabiele veranderingen in neuronale morfologie en synaptische connectiviteit. Tactiele stimulatie is een positieve eerste ervaringen dat nabootst maternale likken en verzorgen bij de rat. Blootstellen van jonge ratten aan deze positieve ervaring kan gemakkelijk en kosteneffectief worden ingevuld met behulp van zeer toegankelijke materialen zoals een huishouden stofdoek. Met behulp van een cross-nest ontwerp, worden pups ofwel streelde of met rust gelaten, gedurende 15 minuten, drie keer per dag gedurende de perinatale periode. Om de plastische veranderingen met betrekking tot dit positieve vroege ervaring te meten, wordt Golgi-Cox kleuring van hersenweefsel benut. Vanwege het feit dat Golgi-Cox impregnatie vlekken een discreet aantal neuronen en niet alle cellen, kleuring van het knaagdier hersenen met Golgi-Cox oplossing maakt de visualisatie van totale neuronale elementen, waaronder het cellichaam, dendrieten, axonen, en dendritische stekels. De kleuringsprocedure is uitgevoerd over meerdere dagen en vereist dat de onderzoeker besteden veel aandacht aan detail. Echter, na kleuring is voltooid, de gehele hersenen is geïmpregneerd en kan onbeperkt worden bewaard voortdurende analyse. Daarom Golgi-Cox kleuring is een waardevolle bron voor het bestuderen van ervaring-afhankelijke plasticiteit.

Introduction

Hoewel er veel gemeld en gebruikt technieken voor het onderzoek van negatieve vroege ervaringen op ontwikkeling van het brein, zoals perinatale spanning 1,2, sensorische deprivatie 3, en toxiciteit van geneesmiddelen 4, er zijn maar weinig methoden toegepast om de effecten van positieve ervaringen in onderzoeken deze periode. Afgezien van het milieu verrijking, tactiele stimulatie is een van de weinige hersenen verbeteren behandelingen met bewezen effecten 5. Tactiele stimulatie is een methode van sensorische stimulatie van de huid die het gedrag van de moeder rat nabootst, likken en verzorgen. De algemene acceptatie als een positieve manipulatie komt voort uit studies waaruit blijkt dat tactiele stimulatie betere rijping van premature baby's en pasgeboren ratten 6. Bovendien is onderzoek in het laboratorium Meaney 7 aangetoond dat hogere niveaus van maternale likken en verzorging zijn verbonden met positieve resultaten bij nakomelingen. Door tHese positieve invloeden, tactiele stimulatie snel uitgegroeid tot een corrigerende strategie gericht op het verminderen van angst 8, verbetering van de resultaten in verband met hersenletsel 9-11 en verzachtende drug sensibilisatie 12. Als zodanig, tactiele stimulatie is een waardevolle techniek voor de bevordering van positieve vroege ervaringen, met een bewezen vermogen om drastisch te reorganiseren neuronale morfologie en synaptische connectiviteit van de zich ontwikkelende hersenen.

Om te onderzoeken en kwantificeren veranderingen in neuronale morfologie, moet intacte neuronen te visualiseren. Het Golgi-Cox kleuring procedure is een modificatie techniek Camillo Golgi gepubliceerd in de late jaren 1800 die discrete kleuren van een klein aantal neuronen volledige 13 verschaft. Hoewel de procedure lijkt neuronen vlekken willekeurig en reproduceerbaarheid wordt vaak aangehaald als belangrijke tekortkoming, de kleine impregneren tarief vergunningen visualisatie van het gehele neuronale element, inclusief cell lichamen, dendrieten, vertakte stekels, en axonen. Ook de tijd die nodig is om een ​​gegeven hersenen te impregneren met Golgi oplossing ook aangehaald als een nadeel. Echter, gezien het feit dat zodra kleuring is voltooid weefsel kan onbeperkt worden bewaard, en de tijd tussen perfusie van de hersenen en visualisatie van neuronen met een microscoop kan in minder dan 21 dagen worden afgerond, de tijd is niet onredelijk. Daarnaast, met kleine aanpassingen aan het protocol, Golgi-Cox kleuring effectief kan worden gebruikt om de hersenen van knaagdieren impregneren uit alle leeftijdscategorieën. Veranderingen op structureel niveau zijn gekoppeld aan aanhoudende aanpassingen aan gedrags-en psychisch functioneren, het Golgi-Cox kleuringstechniek biedt onderzoekers een waardevol instrument om neuroplasticiteit te meten.

Protocol

Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Canadese Raad van Animal Care gedragen en door de Universiteit van Lethbridge, Animal Care Comite goedgekeurd.

1. Veredeling en gevoelsstimulering

  1. Bestel zwangere ratten van gemeenschappelijke leveranciers dier of fokken pups in huis met behulp van standaard laboratorium fokken procedures.
  2. Huis alle dieren in een temperatuur gecontroleerde kweekruimte (21 ° C), gehandhaafd op een 12:12 uur licht: donker cyclus en bieden toegang tot voedsel en water ad libitum.
  3. Wanneer pups geboren, huis vrouwelijke ratten individueel met hun kroost.
  4. Om extra stress in verband met de behandeling onmiddellijk na de geboorte te voorkomen, beginnen tactiele stimulatie van de pups op P3.
  5. Tactiele stimulatie moet drie keer per dag (09:00, 01:00 en 16:00) van P3-P21 worden uitgevoerd en pups worden gespeend van hun moeders op P21.
  6. Bij gebruik van een kruis nest ontwerp, de helft van de pups frOM elk nest zal tactiele stimulatie ondergaan met de andere helft dient als controlegroep. Een gelijk aantal mannelijke en vrouwelijke pups willekeurig toewijzen aan elke groep. Om pups ondergaan tactiele stimulatie en controles te differentiëren, markeren een groep van pups met een permanent marker op hun achterpoten en staart. Markering moet opnieuw worden aangebracht om de andere dag.

Tactiel Stimulatie

  1. Verwijder dammen uit hun kooi en plaats ze in een tijdelijke kooi met voedsel en water. Houd de dam en tijdelijke kooi in het fokken / behuizing kamer.
  2. Weeg rattenjongen als groep voorafgaand aan de ochtend tactiele stimulatie sessie (09:00). Voor elke sessie, transport rat pups hun kooien een aparte testruimte voor tactiele stimulatie. Plaats de kooi op een verwarmingselement, dat is ingesteld op 24 ° C.
  3. Gebruik een stijve boord om de kooi te verdelen in twee helften. Plaats pups rat in de tactiele stimulatie groep de ene helft en controle pups in de andere helft.Stel een timer 15 minuten.
  4. Gebruik een zachte veer-als stofdoek, borstelt alle pups in de tactiele stimulatie groep tegelijk gedurende 15 opeenvolgende minuten. De jonge rat pups (~ P3-P12) ususally elkaar kruipen en lijken een diepe slaapcyclus te voeren waardoor het zeer gemakkelijk om alle pups tegelijk stimuleren. Als de pups leeftijd, ze actiever enkele pups lopen en onderzoek tijdens de sessie. De experimentator moet voortdurend bewegen dwalen pups in de groep te zijn dat iedere pup krijgt gelijke stimulatie.
  5. Zodra de 15 min sessie is voltooid, vervoeren de pups terug naar de kweekruimte en de terugkeer van de moeder naar de kooi.
  6. Herhaal dit proces drie keer per dag gedurende de 19 dagen van tactiele stimulatie. Na de laatste tactiele stimulatie sessie op P21, moeten de pups worden gespeend van hun moeders. Pups moeten dan worden gehuisvest in kooien met 5 of 6 andere gespeende dieren van hetzelfde geslacht.
  7. Als ratten ondergaan geen extra testen, moeten ze worden achtergelaten ungestoord, op het normale licht: donker cyclus met toegang tot voedsel en water ad libitm (afgezien van de reguliere kooi schoonmaken en administratiekosten) tot ze ongeveer 100 dagen oud zijn. Als ondergaat andere experimentele manipulaties, dienen de dieren worden behandeld of getest volgens de laboratoriumprotocollen.

2. Slachtoffer en Golgi-Cox kleuring

  1. Op ongeveer P100, toedienen van een overdosis natriumpentobarbital via IP injectie aan de ratten en perfuseren intracardiaal met ongeveer 100 ml 0,9% zoutoplossing.
  2. Pak de hersenen wanneer de perfusie is voltooid. Verwijder de hersenen uit de schedel, het snijden van de oogzenuw eronder met moeite om de kleine hersenen intact te houden; onderzoekers kunnen ervoor kiezen om te blijven of te verwijderen reukbollen. Plaats gewonnen hersenen in een ondoorzichtige Nalgene fles met 20 ml van Golgi-Cox oplossing 14.
  3. Houd de hersenen in Golgi-Cox oplossing voor 14 dagen. Na 14 dagen, vervang het Golgi-Cos oplossing met een 30% sucrose-oplossing. Houd de hersenen in de sucrose-oplossing voor 2-5 dagen voor het snijden.

Opmerking: Als de hersenen niet kan worden coupes binnen 14 dagen na overdracht aan de sucrose oplossing, de onderzoeker moet de sucrose te vervangen door een nieuwe voorraad van 30% sucrose. De onderzoeker kan de sucrose om de twee weken te vervangen voor 4 maanden zonder nadelige gevolgen voor de kleuring.

  1. Om gedeelte van de hersenen, moet de hersenen droog uitgewist en het snijden podium met cyanocacrylic lijm vast. Om scheuren of oneffen snijden te voorkomen, moet de onderzoeker voorzichtig zijn en ervoor zorgen dat het hele brein goed is vastgemaakt op het podium.
  2. De vibratome reservoir moet worden gevuld met 6% sucrose-oplossing tot een niveau dat het snijden mes dekt. Stel de vibratome parameters snelheid en amplitude 5, (het middelpunt op beide schalen). Snijd de hersenen in 200 micrometer secties en plaats de onderdelen op een 2% gegelatiniseerd microscope glijbaan. Zorg ervoor dat u de delen nat te houden tijdens het snijden.
  3. Wanneer alle onderdelen van belang zijn verzameld, druk op de secties op de dia's door het toepassen van druk om de dia's met vochtige drank verslaafd papier. Bewaar de dia's in een diavoorstelling rek in de vochtige kamer tot ze klaar zijn om te worden gekleurd. Zij moeten in de vochtige kamer langer dan 4 dagen gedurende ten minste 12 uur, maar niet. De objectglaasjes moeten vochtig zijn en mag niet worden toegestaan ​​te drogen.
  4. Bereid de kleuring regiment alvorens te beginnen met de kleuring proces. Label twaalf glas Kleurbakjes (10,7 x 8,5 x 6,8 cm) en proces de volgende wijze:
    1. Gedistilleerd Water - 1 min
    2. Ammonium Hydroxide - 30 min (in het donker)
    3. Gedistilleerd Water - 1 min
    4. Kodak Fix voor Film - 30 min (in het donker)
    5. Gedistilleerd Water - 1 min
    6. 50% Alcohol - 1 min
    7. 70% Alcohol - 1 min
    8. 95% Alcohol - 1 min
    9. 100% Alcohol - 5 min
    10. 100% Alcohol - 5 min
    11. Oplossing (1/3 Chloroform, 1/3 HemoDe, 1/3 100% alcohol) - 15 minuten
    12. HemoDe - 15 min

* Xyleen kan worden gebruikt in plaats van HemoDe. Om consistente kleuring kwaliteit te waarborgen, moeten nieuwe oplossingen worden gebruikt voor elke dia rack verwerkt.

  1. Na de laatste 15 min het verschijnen in HemoDe, dekglaasje de dia's met Permount.
  2. De dia's aan de lucht drogen zodat alvorens te onderzoeken met een microscoop.

Representative Results

Wanneer deze kleuringsprocedure behoren is gevolgd, is consistente en uniforme kleuring van dendrieten en stekels gegenereerd. Zie Figuur 1 voor een afbeelding van Golgi-Cox neuronale kleuring. Deze procedure produceert kleuring die vergelijkbaar is met de nieuw ontwikkelde in vitro methoden en toestaan ​​visualisatie van dendritische velden die ononderbreekbare volgende weefsel inbedding. De vibratome techniek voor Golgi-Cox kleuring is gevonden om bredere kleuring van eindtakken en piramidale neuronen produceren dan kleuring met ofwel-celloïdine embedded en-cryostaat doorsnede weefsel 15. Bovendien, omdat deze methode van kleuring impregneert het hele brein, alle secties kan worden onmiddellijk of in de toekomst geanalyseerd. Als de locatie van morfologische verandering is het niet altijd duidelijk wanneer het genereren van een originele hypothese, dit proces zorgt voor de verkenning van aanvullende gebieden van de hersenen eend voorkomt verwijdering van weefsel die nuttig kunnen zijn in de toekomst.

Deze kleuring kan voor betrouwbare kleuring van elke leeftijd rattenhersenen (P0-leeftijd). Wanneer kleuring jonge hersenen (<1 gram), de hersenen alleen in het Golgi-Cox oplossing blijven 6 dagen, in plaats van 14 dagen aanbevolen voor volwassen hersenen, alle andere procedures constant gehouden. Het grootste probleem dat gedurende deze Golgi-Cox kleurproces worden ondervonden is het onvermogen om hoogwaardige kleuring centrale hersengebieden, waaronder de thalamus produceren. Aangezien de gehele hersenen geïmpregneerd tegelijkertijd kunnen centrale regio ideaal concentraties vlek ontvangen. Ondanks deze bevinding, het Golgi-Cox-techniek produceert uitzonderlijke kleuring van subcorticale regio's, zoals de hippocampus en striatum. Een laatste beperking van de procedure voortvloeit uit onvolledige verwijdering van bloed van de hersenen tijdens de perfusie proces. Bloed kan artefacten veroorzaken in het hersenweefseldat maakt het moeilijk om te fotograferen en traceren van de neuronen.

Golgi-Cox kleuringstechnieken een betrouwbare meting van dendritische morfologie en neuroanatomie die nuttig zijn voor een uitgebreid scala aan studies ontworpen om veranderingen op neuronaal niveau te onderzoeken is. Bij de behandeling van neuronale structuur in de prefrontale cortex na tactiele stimulatie in de vroege postnatale periode, Golgi-Cox kleuring toonde dramatische toename in dendritische complexiteit. Anatomische veranderingen gerelateerd vroeg tactiele stimulatie kan visueel worden aangetoond door ruggengraat dichtheid van piramidale neuronen van een controle rat piramidale neuronen van de rat die tactiele stimulatie ondergaan (zie figuur 1). Daarnaast kunnen parameters zoals dendritische arborization, dendritische lengte en wervelkolom dichtheid worden berekend en statistisch geanalyseerd om continue gegevens kunnen worden vergeleken in dieren produceren. Om betrouwbare resultaten te genereren, analyse moet worden uitgevoerd op am uitgevoerdinimumprijs van drie dieren per behandelingsgroep en ongeveer vijf neuronen per hemisfeer worden willekeurig geselecteerd voor elk hersengebied dat geanalyseerd. Figuur 2 toont de dendritische complexiteit (spines / um x um van dendriet) dieren die tactiele stimulatie en dieren die niet heeft ontvangen . Zowel de apicale en basilaire velden van de neuronen van de mPFC (CG3) geanalyseerd, tactiele stimulatie leidde tot proliferatie van neuronale parameters.

Figuur 1
Figuur 1. A. Representatieve foto van een Golgi-Cox gekleurd piramidale neuron van laag III Werkgebied CG3 in een rat die tijdens de ontwikkeling tactiele stimulatie ontvangen. B. Vertegenwoordiger vergroot (1000 X) foto van dendritische stekels op de terminal dendrieten in het basilair gebied van CG3 ; lichtere afbeelding aan de linkerkant is voor een rat in de controlegroep en de donkere beeld op de right is van een rat die tactiele stimulatie ontvangen.

Figuur 2
Figuur 2. Illustratieve weergave van de gemiddelde apicale en basilaire dendritische complexiteit (spines / um um x) voor neuronen in het CG3 gebied van volwassen ratten die ofwel ontvangen tactiele stimulatie tijdens de ontwikkeling of niet (* p <0.01).

Discussion

Door de openlijke plasticiteit van de ontwikkelende hersenen, is het belangrijk dat experimentele procedures waarbij vroege ervaringen grondig beoordeeld en men tracht controleren voor alle tussenliggende variabelen. Daarom is een kruis draagstoelontwerp toegepast tijdens de tactiele stimulatieprocedure opdat pups vergelijkbare ervaringen krijgen in alle andere gebieden van ontwikkeling. Daarnaast is het ook belangrijk dat meerdere pups van meerdere nesten geselecteerd voor analyse naar de mogelijkheid dat gevolgen voortvloeien uit een voorspanning in een pup en strooisel voorkomen.

Tactiele stimulatie wordt beschouwd als de natuurlijk voorkomende moederlijk gedrag nabootsen, likken en verzorgen, die wordt verondersteld gunstig nakomelingen ontwikkeling. Hoewel eerder onderzoek heeft gewezen op de eerste week van het leven (P0-P7) aan een kritieke periode voor likken en verzorgen 16 zijn, de enorme omvang van de verandering geïdentificeerd na 18 dagen van tactile stimulatie kan betekenen dat hoewel voor gevoelige tijden bestaan, langere belichtingstijd is superieur. Het is ook belangrijk op te merken dat pups ontvangen tactiele stimulatie in deze experimentele paradigma ook last likken en verzorgen van hun moeders, vandaar de tactiele stimulatie naast de normale stimulatie door de moeder toegediend. Ten slotte moet men ook bewust van regio-afhankelijke veranderingen. Hoewel tactiele stimulatie tijdens de ontwikkeling toegenomen dendritische complexiteit in de prefrontale cortex, is dit geen garantie dat structurele veranderingen van deze aard zal blijken in alle gebieden van de hersenen. Het is mogelijk dat neuronale morfologie in andere hersengebieden zoals de pariëtale cortex, zou reageren in een opvallend verschillende wijze dezelfde ervaring. Echter, omdat de tactiele stimulatie procedure is eenvoudig te beheren en vormt geen risico voor de nakomelingen of dammen, het heeft het potentieel om te dienen als een waardevol instrument voor veel studies gericht op het verbeteren ontwikkelingal uitkomsten.

Wat Golgi-Cox kleuring van hersenweefsel, de kritische stappen voor een succesvolle visualisatie van neuronale cellen zijn als volgt: 1) dient voldoende perfusie van de hersenen met zoutoplossing zijn. Onjuiste of onvoldoende doorbloeding van het hersenweefsel leidt bloedvat artefacten die het moeilijk om daadwerkelijk visualiseren neuronale cellen door de doolhof van bloedvaten, terwijl ook complicerende de mogelijkheid om neuronen gekleurd fotograferen. 2) geperfuseerde hersenen moeten worden bewaard in Golgi-Cox-oplossing en sucrose-oplossing in het donker. Het opslaan van het hersenweefsel in het donker vermindert de achtergrond kleuring van het weefsel, opnieuw verhogen van de kans op kwaliteit neuronale cellen succesvol visualiseren. 3) Hersenweefsel wordt opgeslagen in sucrose-oplossing na de 14 dagen opslag in Golgi-Cox oplossing. Wanneer het weefsel wordt ondergedompeld in de 30% sucrose oplossing voor 2-5 dagen, hersenen zijn meer plooibaar die verbrijzelen en scheuren van secties voorkomt wanneersnijden. Het is belangrijk om te voorkomen hersenweefsel blijft in de sacharoseoplossing voor verhoogde tijdsperioden (tenzij de sacharoseoplossing continu vervangen door verse oplossing) omdat langdurige opslag in sucrose vermindert de kleurafgevend. 4) Ten slotte, wanneer dia's zijn gekleurd en deksel gleed, ze zou moeten krijgen voldoende tijd om te drogen voordat visualisatie met een microscoop. Als dia's niet zijn toegestaan ​​om adequaat de lucht drogen, kan het weefsel donkerder, waardoor succesvolle visualisatie van corticale neuronen.

Stabiele veranderingen in het psychisch functioneren en gedragsmatige reacties die optreden als reactie op ervaringen worden verondersteld te worden vergemakkelijkt door de reorganisatie van neuronale morfologie en synaptische connectiviteit 17. Omdat deze structurele veranderingen bieden een meetbare bron voor ervaringsafhankelijke plasticiteit, het gebruik van een betrouwbare kleuring procedure belangrijk. Dit vibratome gebaseerd Golgi-Cox kleuringsprocedure biedt betrouwbare vleking van fijne takken en dendritische stekels die niet duidelijk kunnen zijn met andere protocollen zoals celloïdine-inbedding. Het onderscheidend vermogen van het Golgi-Cox procedure voort uit zijn vermogen om slechts vlekken een kleine fractie van neuronale elementen (1-10%), waarbij traceren enige neuronen mogelijk maakt voor lange afstanden. Ondanks het feit dat slechts een kleine fractie van neuronen worden geïmpregneerd met de vlek, cellen die zichtbaar zijn gemaakt, handhaven alle kenmerken zoals cellichaam, dendrieten, dendritische en axonen. Bovendien, wanneer de kleuring procedure correct wordt uitgevoerd, de gekleurde cellen opvallen helder en duidelijk tegen een transparante achtergrond, omdat andere corticale structuren blijven unstained en transparant. Door het besef dat blijvende veranderingen in buitenwaartse werking moet worden gerelateerd aan de plasticiteit van het zenuwstelsel, dat wil zeggen het vermogen van neuronen om hun structuur en connectiviteit wijzigen, het Golgi-Cox kleuring procedure voorziet onderzoekers metbetrouwbare techniek om te visualiseren en te kwantificeren deze plasticiteit.

Disclosures

De auteurs verklaren dat we geen concurrerende financiële belangen.

Acknowledgments

Dit werk wordt gefinancierd door NSERC subsidies aan BK en RG. De auteurs willen ook graag Kehe Xie en Russell Hosain bedanken voor hun Golgi-Cox kleuring expertise.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Potassium Dichromate Fisher P188
Mercuric Chloride Fisher M1561
Potassium Chromate Fisher P220
Ammonium Hydroxide Fisher A669-500
Kodak Rapid Fix Vistek Kodak 146 4016
EtOH-95 & Anhydrous Commercial Alcohols No Cat Numbers All other Et-OH are dilutions
Swiffers- Soft Feather-Like dusters Safeway Can be found at most grocery stores
Sucrose Sigma-Aldrich S-9378
HemoDe Electron Microscopy Sciences 23410
Permount Fisher Sp15
Slides VWR 160004-365
Coverslips VWR 062011-9

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mychasiuk, R., Ilnystkyy, S., Kovalchuk, O., Kolb, B., Gibb, R. Intensity matters: Brain, behaviour, and the epigenome of prenatally stressed rats. Neuroscience. 180, 105-110 (2011).
  2. Muhammad, A., Carroll, C., Kolb, B. Stress during development alters dendritic morphology in the nucleus accumbens and prefrontal cortex. Neuroscience. 216, 103-109 (2012).
  3. Wiesel, T., Hubel, D. Effects of visual deprivation on morphology and physiology of cells in the cat's lateral geniculate body. Journal of Neurophysiology. 26, (978), 6 (1963).
  4. Dwyer, J., McQuown, S., Leslie, F. The dynamic effects of nicotine on the developing brain. Pharmacology & Therapeutics. 122, 125-139 (2009).
  5. Richards, S., Mychasiuk, R., Kolb, B., Gibb, R. Tactile stimulation during development alters behaviour and neuroanatomical organization of normal rats. Behavioural Brain Research. 231, 86-91 (2012).
  6. Schanberg, S., Field, T. Sensory deprivation stress and supplemental stimulation in the rat pup and preterm neonate. Child Development. 58, (6), 1431-1447 (1987).
  7. Caldji, C., Tannenbaum, J., Sharma, S., Francis, D., Plotsky, P., Meaney, M. Maternal care during infancy regulates the development of neural systems mediating the expression of fearfulness in the rat. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95, (9), 5335-5340 (1998).
  8. Imanaka, A., Morinobu, S., Toki, S., Yamamoto, S., Matsuki, A., Kozuru, T., et al. Neonatal tactile stimulation reverses the effect of neonatal isolation on open-field and anxiety-like behavior, and pain sensitivity in male and female adult Sprague-Dawley rats. Behavioural Brain Research. 186, 91-97 (2008).
  9. Gibb, R., Gonzalez, C., Wegenast, W., Kolb, B. Tactile stimulation promotes motor recovery following cortical injury in adult rats. Behavioural Brain Research. 214, (1), 102-107 (2010).
  10. Rodrigues, A., Artneni, N., Abel, C., Zylbersztejn, D., Chazan, R., Viola, G., et al. Tactile stimulation and maternal separation prevent hippocampal damage in rats submitted to neonatal hypoxia-ischemia. Brain Research. 1002, 94-99 (2004).
  11. Kolb, B., Gibb, R. Tactile stimulation after frontal or parietal cortical injury in infant rats facilitates functional recovery and produces synaptic changes in adjacent cortex. Behavioural Brain Research. 214, 115-120 (2010).
  12. Muhammad, A., Hossain, S., Pellis, S., Kolb, B. Tactile stimulation during development attenuates amphetamine sensitization and structurally reorganizes prefrontal cortex and striatum in a sex-dependent manner. Behavioral Neuroscience. 125, (2), 161-174 (2011).
  13. Golgi, C. Sulla struttura della sostanza grigia dell cervello. Gaz Med Lomb. 33, 244-246 Forthcoming.
  14. Glaser, E. M., van der Loos, H. Analysis of thick brain sections by obverse-reverse computer microscopy: Application of a new, high clarity Golgi-Nissl stain. Journal of Neuroscience Methods. 4, 117-125 (1981).
  15. Gibb, R., Kolb, B. A method for vibratome sectioning of Golgi-Cox stained whole rat brain. Journal of Neuroscience Methods. 79, 1-4 (1998).
  16. Meaney, M. Maternal care, gene expression, and the transmission of individual differences in stress reactivity across generations. Annual Review of Neuroscience. 24, 1161-1192 (2001).
  17. Robinson, T. E., Kolb, B. Structural plasticity associated with exposure to drugs of abuse. Neuropharmacology. 47, Suppl 1. 33-46 (2004).
Visualiseren van de effecten van een positieve vroege Experience, Tactiel Stimulatie, op dendritische morfologie en Synaptic Connectiviteit met Golgi-Cox kleuring
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mychasiuk, R., Gibb, R., Kolb, B. Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining. J. Vis. Exp. (79), e50694, doi:10.3791/50694 (2013).More

Mychasiuk, R., Gibb, R., Kolb, B. Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining. J. Vis. Exp. (79), e50694, doi:10.3791/50694 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter