Summary
Transabdominaler Ultraschall wird als wirksames, nichtinvasives Mittel zur Beurteilung des Fortpflanzungsstatus bei Reeves' Muntjac-Hirschen beschrieben. Diese Methoden können verwendet werden, um eine frühe Schwangerschaftsdiagnose zu erreichen und die fetale Lebensfähigkeit zu bewerten. Zukünftige Anwendungen dieser Technik umfassen die Schätzung des Schwangerschaftsalters und der Auswirkungen von Mütterkrankheiten auf die fetale Entwicklung.
Abstract
Reeves' Muntjac-Hirsche(Muntiacus reevesi) sind eine kleine Cervid-Art, die in Südostasien beheimatet ist und derzeit als mögliches Modell der Übertragung von Prionenkrankheiten und Pathogenese untersucht wird. Die vertikale Übertragung ist ein Bereich von Interesse unter Forschern, die Infektionskrankheiten untersuchen, einschließlich Prionerkrankungen, und diese Untersuchungen erfordern effiziente Methoden zur Bewertung der Auswirkungen einer mütterlichen Infektion auf die Fortpflanzungsleistung. Ultrasonografische Untersuchung ist ein bewährtes Werkzeug für die Diagnose der Schwangerschaft und die Beurteilung der fetalen Gesundheit bei vielen Tierarten1-7, einschließlich mehrerer Arten von gezüchteten Cerviden8-19, aber diese Technik wurde nicht in Reeves' Muntjac Hirsch beschrieben. Hier beschreiben wir die Anwendung von transabdominalem Ultraschall, um Schwangerschaft in Muntjac zu erkennen und fetales Wachstum und Entwicklung während der gesamten Schwangerschaftsperiode zu bewerten. Mit diesem Verfahren wurden schwangere Tiere bereits 35 Tage nach der Doe-Bock-Paarung identifiziert und dies war ein wirksames Mittel, um die Schwangerschaft in regelmäßigen Abständen sicher zu überwachen. Zukünftige Ziele dieser Arbeit werden die Festlegung normaler fetaler Messreferenzen für die Schätzung des Schwangerschaftsalters, die Bestimmung der Empfindlichkeit und Spezifität der Technik zur Diagnose der Schwangerschaft in verschiedenen Stadien der Schwangerschaft und die Identifizierung von Variationen im fetalen Wachstum und der Entwicklung unter verschiedenen experimentellen Bedingungen sein.
Introduction
Ultrasonografische Untersuchung ist eine gut beschriebene Methode der Schwangerschaftsdiagnostik bei Rindern1, Schafe2,3, Ziegen4, Pferde5, Begleittiere6,7, und andere Haustierarten. Diese bildgebende Modalität wurde auch als ein wertvolles Werkzeug für Schwangerschaftserkennung und fetale Altersschätzung bei mehreren Arten von in Gefangenschaft Zerviden identifiziert, einschließlich Damhirsch8-11, Rotwild12-16, Hokkaido Sika Hirsch17, und Reder18,19. In vielen Fällen hat die Ultraschall-Ultrasonographie höhere Genauigkeitsraten als andere Mechanismen der Schwangerschaftserkennung produziert, wie Serumprogesteron oder schwangerschaftsassoziierte Glykoprotein-Analyse9,18. Darüber hinaus kann die ultraschallgrafische Visualisierung des Fortpflanzungstraktes zusätzliche Informationen über die Lebensfähigkeit des Fötus, das Schwangerschaftsalter und die Identifizierung von Entwicklungsanomalien liefern, die andernfalls schwer einzuschätzen wären. Der Nutzen der Ultraschallographie zur Bewertung des Fortpflanzungsstatus legt nahe, dass diese Methode an andere Arten angepasst werden sollte, in denen aktive Zuchtprogramme verwendet werden.
Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) ist eine kleine Cervid-Art aus der FamiliederGebärmutterhalskrebse ( Während der Fortpflanzungszyklus dieser Tiere in ihren Heimatgebieten nicht gut charakterisiert ist, haben Studien über wildlebende Populationen in Teilen Südenglands das Verständnis ihrer Brutmuster verbessert20. Im Gegensatz zu den meisten Cerviden, Reeves' Muntjac scheinen das ganze Jahr über zu brüten, ohne scheinbare saisonale Fawning Spitzen20-22. Weibliche Muntjac in der Regel gebären ein einzelnes Reh nach einer 210-Tage-Trächtigkeitszeit, und geben zuverlässig eine postpartale Estrus innerhalb von 24 hr20-22. Ist das nicht in dieser postpartalen Periode nicht schwanger wird zu Estrus etwa 24-25 Tage später20zurück. In Gefangenschaft Situationen, Reproduktion wird in der Regel durch Gehäuse tut mit einem oder mehreren intakten männlichen erreicht. Dieses System liefert zufriedenstellende Empfängnisraten und erfordert wenig technisches Geschick für das Personal, aber genaue Zuchttermine sind schwierig, wenn nicht gar unmöglich zu bestimmen.
Muntjac werden häufig in zytogenetischen Studien aufgrund der breiten Palette von diploiden Chromosomenzahlen und hohe Rate der karyotypischen Diversifikation zwischen den verschiedenen Artenverwendet 23. Diese Tiere werden derzeit auch als Modell der Prionenkrankheit Pathogenese und Übertragung untersucht, mit besonderem Interesse auf die Untersuchung der vertikalen Übertragung von chronischen Verschwendungskrankheiten (CWD) in Cerviden. Die Bedeutung des Muntjac in einer Reihe von verschiedenen Forschungsanwendungen legt nahe, dass verbesserte Reproduktionstechnologien eingerichtet werden sollten, um die derzeitigen Untersuchungsverfahren zu ergänzen. Insbesondere könnten nichtinvasive Mechanismen zur Bewertung der Schwangerschaftsperiode kritische Schwankungen der Fortpflanzungsleistung und des fetalen Wachstums und der Entwicklung unter verschiedenen experimentellen Bedingungen aufklären. Darüber hinaus wäre die Entwicklung von Echtzeit-Fetal-Messreferenzen potenziell wertvoll für die Schätzung des Schwangerschaftsalters in Situationen, in denen Zuchtdaten nicht bestimmt werden können. Frühere Studien haben Mechanismen für die Verwendung von fetalen Messungen beschrieben, wie Kronen-Rumpf-Länge (CRL), Brusttiefe (CD) und Kopflänge (HL), um das ungefähre Stadium der Schwangerschaft bei Zervixarten11-14, 16,17zu schätzen. Darüber hinaus haben einige dieser Studien auch Richtlinien festgelegt, die beschreiben, wann spezifische Entwicklungsmeilensteine, wie Skelettmineralisierung oder fetaler Herzschlag, identifiziert werden können8-19. Während diese Daten nützlich sein können, um die reproduktive Ultraschallanalyse im Muntjac zu leiten, haben die meisten anderen untersuchten Cervid-Arten viel größere Körpergröße und längere Schwangerschaftsperioden, wodurch der Translationswert dieser Studien für Muntjac-Anwendungen verringert wird.
Das hier skizzierte Protokoll beschreibt die transabdominale Ultrasonographie des weiblichen Muntjac zum Zwecke der Diagnose und Überwachung der Schwangerschaft. Die erfolgreiche Umsetzung dieses Protokolls kann die Früherkennung und Bewertung des fetalen Wachstums und der Entwicklung erleichtern. Diese Technik hat wertvolle Anwendungen bei der Durchführung von Studien zur Untersuchung der Reproduktion, in der Utero-Entwicklung oder vertikalen Übertragung von Infektionskrankheiten in einem kleinen Cervid-Modell und kann auch für klinische Zwecke in Gefangenschaft Zuchtoperationen nützlich sein.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Verfahrensvorbereitung
Alle beschriebenen Tierverfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der Colorado State University, einer Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC), intl. akkreditierter Institution, überprüft und genehmigt.
- Vor der Untersuchung tiere mit geeigneten Sedierungs- oder Anästhesieprotokollen immobilisieren, um Entspannung zu schaffen und eine angemessene Positionierung zu ermöglichen. Ein Handler hält das Reh zurück, während eine zweite Person dem Tier die Sedierung verabreicht.
Hinweis: Die Autoren haben die folgende Kombination gefunden, um eine wirksame Sedierung bei dieser Art zu bieten: Butorphanol (0,45 mg/kg), Azaperon (0,035 mg/kg) und Medetomidin (0,04 mg/kg), intramuskulär in den Gesäßmuskeln verabreicht. - Sobald die Doe eine Sedierungsebene erreicht hat, die eine konforme Handhabung ermöglicht, positionieren Sie sie entweder in dorsaler oder seitlicher Rekonnthestik auf einem Untersuchungstisch oder innerhalb eines V-Tals. Elevate den Kopf, Hals, und Thorax leicht (ca. 20-30°), um das Risiko der Regurgitation und Aspiration von Rumenal-Inhalt zu reduzieren und eine ordnungsgemäße Belüftung während des Verfahrens zu erleichtern.
Hinweis: Bei den meisten Cerviden oder anderen Wiederkäuerarten wird Bauch-Ultraschall bei stehenden Tieren durchgeführt; Die geringe Größe und Verhaltensüberlegungen dieser Art erfordern jedoch eine starke Sedierung für die Untersuchung und die Sternstellung ist daher schwieriger und kann eine effektive Bildgebungstechnik ausschließen. Die Positionierung des Tieres auf halbem Weg zwischen Brust- und Seitensanierung kann ideal sein, um das Risiko von Regurgitation und Hypoventilation zu reduzieren und sollte nach Möglichkeit in Betracht gezogen werden. In jeder Liegeposition ist es wichtig, die Atmung der Tiere sorgfältig zu überwachen und die Untersuchung sofort zu beenden und das Tier in die Brustbeschifktion zu bringen, wenn Regurgitation oder Hypoventilation festgestellt wird. - Bei Bedarf Haar aus dem Bereich des Bauches untersucht werden, um einen angemessenen Kontakt zwischen dem Fußabdruck des Wandlers und der Haut zu erreichen.
Hinweis: In der frühen Schwangerschaft können Anzeichen einer Schwangerschaft im kaudalen Bauch in der Nähe der Brustdrüsen nachgewiesen werden. Diese Region des Muntjac ist in der Regel haarlos, und daher Rasur kann zu diesem Zeitpunkt nicht angezeigt werden. Da der Fötus wächst und die Gebärmutter sich entfällt, eine eher schädelige Position im Bauch zu besetzen, wird das Abschneiden der Haare vor der Bildgebung notwendig sein. Es sollte darauf geachtet werden, dass keine mechanischen Verletzungen der Haut verursacht werden, einschließlich Schürfwunden durch Rasierklingen oder thermische Verletzungen durch elektrische Clipper. - Positionieren Sie die Ultraschalleinheit an einem Ort, an dem der Techniker den Monitor leicht visualisieren kann, während er die Untersuchung mit seiner dominanten Hand durchführt. Geben Sie Tieridentifikationsinformationen (Name, Identifikationsnummer usw.)in das System ein, um gespeicherte Bilder und Videoschleifen automatisch zu kennzeichnen.
2. Transabdominale Reproduktive Ultraschalluntersuchung
- Tragen Sie eine großzügige Menge an akustischem Kupplungsgel auf den kaudalen Bauch auf.
- Legen Sie einen 5-10 MHz gekrümmten linearen Wandler auf die Haut des kaudalen Bauches, sofort kranial zum Schambein, und bewegen Sie ihn langsam in kranialer Richtung, um die Strukturen innerhalb der Beckenhöhle zu bewerten. Scannen Sie die linken und rechten Quadranten des kaudalen Bauches, um beide Hörner der bicornuate Gebärmutter des Muntjac zu bewerten.
Hinweis: Umfassender Bauch-Ultraschall beinhaltet die Beurteilung aller Bauchviszera, einschließlich der Leber, Nieren, Milz, Magen-Darm-Trakt, Harnblase, und Fortpflanzungstrakt. Für die Zwecke dieses Protokolls wird nur die Untersuchung der Schwangerschaft ausführlich erörtert; jedoch sollte das normale Auftreten anderer kaudaler Bauchorgane erkannt werden, da diese Strukturen wahrscheinlich im Laufe der Studie auftreten. Organe am häufigsten an dieser Stelle gesehen gehören Segmente des Magen-Darm-Trakt, die Harnblase, und der Fortpflanzungstrakt. Der Groß- und Dünndarm wird durch das charakteristisch geschichtete Erscheinungsbild der Darmwand identifiziert. Das Lumen kann je nach Art und Menge des Inhalts ausgesprochen werden, einschließlich Flüssigkeit, Gas, Schleim oder Lebensmittelpartikel. Die Harnblase kann schwierig zu identifizieren sein, es sei denn, mit Urin distended, und die Schichten der Blasenwand sind deutlich weniger deutlich als die des Darms. Neben der Gebärmutter können die Eierstöcke auch auf Ultraschall des Fortpflanzungstraktes der weiblichen Muntjac gefunden werden. Die Eierstöcke erscheinen als eiförmige Strukturen in der Nähe des kaudalen Pols der Nieren, und ihr Aussehen kann sich im Laufe des estrous Zyklus ändern. Das Vorhandensein von mehreren reifen, flüssigkeitsgefüllten Follikel innerhalb des Kortex ist ein Hinweis auf Estrus.
Hinweis: Durch Drehen und/oder "Lüftern" des Scankopfes des Messumformers können Strukturen in Quer- oder Sagittalebenen ausgewertet werden.- Wenn nötig, um eine gravid Gebärmutter von der Harnblase zu unterscheiden, entleeren Sie die Blase manuell, indem Sie sanften Druck auf den kaudalen Bauch ausüben oder indem Sie einen Harnkatheter platzieren und den Scan wiederholen.
Hinweis: Die manuelle Expression der Blase sollte nur versucht werden, wenn sich das Tier in einer sternalen oder aufrechten Position befindet, was eine natürlichere Orientierung der Bauchviszera erleichtert und das Traumarisiko für andere Strukturen verringert. Die Gebärmutter kann auch von der Harnblase unterschieden werden, indem die Dicke der Organwand bewertet wird. Die typische Dicke einer mäßig distended Blase ist etwa 1,4 mm24, während die Autoren festgestellt haben, dass die muskulösere Wand der gravid Gebärmutter in der muntjac in der Regel zwischen 7-8 mm misst.
Hinweis: Eine frühe Schwangerschaft ist aufgrund des Mangels an identifizierbaren fetalen Strukturen schwierig, und in der Tat kann der erste Hinweis auf eine Schwangerschaft einfach eine kleine Flüssigkeitstasche im kaudalen Bauch sein. Wenn zu diesem Zeitpunkt gesehen, wird der sich entwickelnde Embryo als hyperechoische, eiförmige bis amorphe Struktur innerhalb der Gebärmutter erscheinen (Abbildung 1).
- Wenn nötig, um eine gravid Gebärmutter von der Harnblase zu unterscheiden, entleeren Sie die Blase manuell, indem Sie sanften Druck auf den kaudalen Bauch ausüben oder indem Sie einen Harnkatheter platzieren und den Scan wiederholen.
- Nehmen Sie bei Bedarf Anpassungen an Dertiefe, Frequenz und Verstärkung vor, um Kontrast und Bilddetails zu verbessern.
Hinweis:Höhere Frequenzen sind mit kürzeren Wellenlängen verbunden, die für eine verbesserte Bildauflösung notwendig sind. Die meisten Messumformer sind in der Lage, innerhalb eines Frequenzbereichs (z. B. 6-10 MHz)24zu arbeiten. Die Frequenz kann mit den Scannersteuerungen auf der Ultraschalleinheit eingestellt werden, und eine Erhöhung der Frequenz führt zu einem klareren Bild. Die erhöhung der Frequenz verringert gleichzeitig die Tiefe der Schallwellendurchdringung; Daher kann eine Reduzierung der Frequenz notwendig sein, um tiefere Strukturen zu visualisieren, aber die Auflösung kann kompromittiert werden24. Aus diesem Grund ist es wichtig, die höchstmögliche Frequenz auszuwählen, um die gewünschte Gewebetiefe zu erreichen. Anpassungen der Verstärkungssteuerungen verändern die Verstärkung von Schallwellen, die aus dem Gewebe zum Wandler zurückkehren, und beeinflussen den Kontrastgrad im Bild24. Die Verstärkung sollte auf einen Punkt eingestellt werden, an dem ein optimaler Kontrast zwischen hyperechoischen und hypoechoischen Geweben erreicht wird, und diese Einstellungen müssen möglicherweise abhängig von den Strukturen angepasst werden, die abgebildet werden.
3. Erhalten von fetalen Messungen
Anmerkung: Das Gestationsalter bei vielen Haustierarten kann anhand etablierter Referenzbereiche für fetale Messungen geschätzt werden, die bei Ultraschalluntersuchungen gewonnen wurden. Die am häufigsten verwendeten Messungen umfassen gerade Kronen-Rump-Länge (SCRL), Brusttiefe (CD) und Kopflänge (HL)17. Obwohl noch keine ausreichenden Daten gesammelt wurden, um zuverlässige Schwangerschaftsaltersrichtlinien in Reeves' Muntjac-Hirschen zu entwickeln, können Messungen gesammelt werden, um mit der Erstellung dieser Referenzen zu beginnen. Die fetale Herzfrequenz (FHR) wurde bei anderen Arten von Gebärmutterhals- und Wiederkäuern gezeigt, die linear zunimmt, wenn die Schwangerschaft bis zu einem bestimmten Punkt fortschreitet (typischerweise um Tag 60 der Trächtigkeit), zu diesem Zeitpunkt beginnt die Herzfrequenz zu sinken17. FHR kann verwendet werden, um das Schwangerschaftsalter in Verbindung mit anderen Ultraschallbeobachtungen zu schätzen, wird jedoch häufiger als Maß für die fetale Lebensfähigkeit verwendet17,24. FHR wurde in Reeves' Muntjac bereits 35 Tage nach der Beobachtung der Paarung berechnet.
- Um SCRL zu messen, lokalisieren Sie die Gebärmutter auf dem Monitor und nehmen Sie feine Anpassungen an der Position des Messumformers vor, bis eine sagittale Ansicht des gesamten Fötus erhalten ist (Abbildungen 2 und 3). Einfrieren sie das Bild und messen Sie den Abstand zwischen dem dorsalsten Aspekt des Schädels und der Basis des Kreuzbeins (Abbildungen 2 und 3).
- Um CD zu messen, erhalten Sie eine sagittale Ansicht des Fötus (das gleiche Bild kann verwendet werden, um SCRL zu messen) und messen Sie den Abstand zwischen den dorsalen und ventralen Aspekten des Thorax (Abbildungen 2 und 3).
- Um HL zu messen, messen Sie mit der gleichen sagittalen Ansicht des Fötus, wie für die SCRL- und CD-Messungen beschrieben, den Abstand vom okzipitalen Kamm zur Nasenbasis (Abbildungen 2 und 3).
- Um die fetale Herzfrequenz zu berechnen, identifizieren Sie das Herz innerhalb der Brusthöhle des Fötus, indem Sie seine rhythmischen Kontraktionen visualisieren. Berechnen Sie die Herzfrequenz, indem Sie die Anzahl der Kontraktionen (Herzschläge) zählen, die innerhalb eines Zeitraums von 1 min auftreten.
Hinweis: Wenn die verwendete Ultraschalleinheit Doppler-Fähigkeiten hat, kann diese Funktion verwendet werden, um das Herz weiter von anderen unspezifischen fetalen Bewegungen zu unterscheiden. - Stellen Sie sicher, dass alle gespeicherten Bilder und Videoschleifen alle erforderlichen Identifizierungsinformationen enthalten, einschließlich Tiername oder -nummer, Datum, Messungen und entsprechende Strukturbeschriftungen.
4. Verfahrensschlussfolgerungen und Rückforderung
- Entfernen Sie alle restliche Ultraschall-Kontaktgel aus dem Bauch des Tieres mit einem weichen Tuch oder Papiertücher. Reinigen Sie das Gel vor der Lagerung vom Messumformer.
- Wenn Sie das in Schritt 1.1 beschriebene Sedierungsprotokoll verwenden, atipamezol subkutan in einer Dosis von 0,25 mg/kg, um die Wirkung von Medetomidin umzukehren. Wenn Sie ein anderes Sedierungsprotokoll verwenden, in dem ein Antagonist zur Verfügung steht, verabreichen Sie dieses Mittel dem Tier nach veröffentlichten Dosierungen am Ende des Verfahrens, um die Genesung zu beschleunigen.
- Legen Sie den Muntjac auf eine weiche Bettfläche in der Brusthöhe Recumbency, mit dem Kopf leicht erhöht, um das Risiko der Regurgitation und Aspiration von Rumenal-Inhalt zu reduzieren. Überwachen Sie das Tier genau, bis es vollständig geborgen ist und ohne Hilfe um das Gehege herum ambulaten kann.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mit dem hier beschriebenen Protokoll kann die Schwangerschaft in Reeves Muntjac-Hirsch enden und mit minimalinvasiven Techniken überwacht werden. Der früheste Zeitpunkt, zu dem eine Schwangerschaft von den Autoren nachgewiesen werden konnte, war etwa 35 Tage nach dem beobachteten Paarungsverhalten.
In den frühen Stadien der Schwangerschaft wurde die Schwangerschaft durch die Visualisierung einer flüssigkeitsgefüllten Gebärmutter diagnostiziert, die als anechoischer Raum im kaudalen Bauch identifiziert wurde. Innerhalb der Gebärmutter erschien der sich entwickelnde Embryo als hyperechoische, eiförmige Struktur mit wenigen identifizierbaren Merkmalen (Abbildung 1). Im Verlauf der Schwangerschaft wurden fetale Strukturen sichtbar und eine schlüssige Diagnose konnte nach der Beobachtung der Skelettmineralisierung und des fetalen Herzschlags gestellt werden (Abbildungen 2 und 3).
Fetale Messungen können erhalten und verwendet werden, um Referenzrichtlinien für die Schätzung des Schwangerschaftsalters in Fällen festzulegen, in denen ein genaues Brutdatum nicht bekannt ist, obwohl wir dieses System im Muntjac noch nicht vollständig entwickelt haben. Gerade Kronen-Rump-Länge (SCRL), HL, und CD sind Standard-Fetal-Messungen, die häufig verwendet werden, um fetales Alter in vielen Arten17zu schätzen, und diese Messungen wurden aus Ultraschallbildern von Muntjac-Schwangerschaften mit dem hier beschriebenen Protokoll erhalten. Alle drei Messungen können aus dem gleichen richtig positionierten sagittalen Bild(Abbildungen 2 und 3) gewonnen werden, aber separate Bilder können verwendet werden, wenn der gesamte Fötus nicht in einer einzigen sagittalen Ansicht erfasst werden kann. In Zukunft können diese Techniken auch verwendet werden, um Wachstums- und Entwicklungsschwankungen zu identifizieren, die unter verschiedenen experimentellen Bedingungen beobachtet wurden, und um die fetale Lebensfähigkeit zu bestimmen.
Abbildung 1. Ultraschallbild zeigt frühe Schwangerschaft in einem Reeves' Muntjac Hirsch. Die Doe in dieser Studie war mit einem intakten männlichen Muntjac für 46 Tage untergebracht worden, aber ein genaues Zuchtdatum ist nicht bekannt. Fetale Merkmale sind in dieser Phase der Trächtigkeit nicht zu unterscheiden.
Abbildung 2. Ultraschallbild der gleichen Schwangerschaft, dargestellt in Abbildung 1, 91 Tage nach der Einführung der Doe auf den Bock. (CD - Brusttiefe, HL - Kopflänge, P - Plazenator, SCRL - gerade Kronen-Rump-Länge).
Abbildung 3. Ultraschallbild einer zweiten Schwangerschaft, das eine angemessene Positionierung für die Erlangung fetaler Messungen demonstriert. Bild aufgenommen 91 Tage nach der Einführung der Doe auf den Bock. (CD - Brusttiefe, HL - Kopflänge, P - Plazenator, SCRL - gerade Kronen-Rump-Länge).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung der transabdominalen Ultrasonographie zur Schwangerschaftsdiagnose bei Reeves' Muntjac-Hirschen. Im Einklang mit anderen Ultraschall-Studien, geeignete Ausrüstung und technische Fähigkeiten sind unerlässlich für eine erfolgreiche reproduktive Untersuchung der muntjac doe. Sorgfältige Überprüfung der grundlegenden Säugetieranatomie, die physikalischen Prinzipien des diagnostischen Ultraschalls und das typische ultrasonographische Aussehen der Bauchviszera wird bei der Verringerung von fehlrichterlichen Diagnosen helfen. Darüber hinaus ist die Auswahl geeigneter Messumformer und die Vertrautheit mit der Instrumentierung und Scannersteuerung entscheidend für die Erzielung hochwertiger Bilder und eine genaue Interpretation.
Für viele unerfahrene Ultrasonographen sind bildgebende Artefakte eine häufige Ursache für schlechte Bildauflösung und ungenaue Bewertung von Strukturen. Der Nachhall an der Hautwandler-Schnittstelle ist eines der am häufigsten anzutreffenden Artefakte im tierärztlichen Bauch-Ultraschall und kann durch die Beseitigung des Vorhandenseins von Gas zwischen den beiden Oberflächen deutlich reduziert werden. Eine angemessene Haarentfernung und die großzügige Anwendung von Akustikgel auf die Haut sollten ausreichen, um die Auswirkungen dieses Artefakts zu minimieren. Diskussionen über andere bildgebende Artefakte finden sich in verschiedenen Texten der menschlichen und tierärztlichen Ultraschallographie und werden daher hier nicht näher erörtert; eine allgemeine Kenntnis dieser Phänomene wird es dem Ultrasonographen jedoch ermöglichen, sie effektiver zu kontrollieren24.
Bei der Durchführung einer Reproduktionsuntersuchung sollte klar sein, dass die Gebärmutter bei einem normalen, nicht schwangeren Tier nur schwer zu visualisieren ist. In der frühen Schwangerschaft kann das Lumen der Gebärmutter als hypoechoischer bis anechoischer Raum identifizierbar werden, wenn sich der Gestationssack bildet. In diesem Stadium in der Muntjac, die Gebärmutter kann in der Regel durch Scannen auf der Ebene der, oder leicht kaudal, die Brustdrüsen gefunden werden. Vor der Skelettmineralisierung oder dem Auftreten eines fetalen Herzschlags kann eine Schwangerschaft in Gegenwart anderer Fortpflanzungsbedingungen falsch diagnostiziert werden, wodurch sich Flüssigkeit in der Gebärmutter ansammelt, die Pathologie wie Pyometra, Hydrometra oder Mucometra umfassen kann. Ultraschalldiagnosen sollten in Verbindung mit einer vollständigen klinischen Bewertung des Tieres vor der Sedierung für das Verfahren erfolgen. In der frühen Trächtigkeit erscheint der Conceptus als sphärische bis eiförmige, hyperechoische Struktur innerhalb des Fruchtwassersacks. Spezifische Entwicklungszeitpunkte sind bei dieser Art nicht gut charakterisiert; Die Skelettmineralisierung und fetale Herzbewegung scheinen jedoch nach etwa 8 Wochen nach der Paarung konsistent nachweisbar zu sein.
Unter idealen Bedingungen kann transabdominaler Ultraschall ein unglaublich nützliches Werkzeug für die Bewertung von Fortpflanzungsstrukturen bei vielen Arten sein, einschließlich Reeves' Muntjac. Der Wert dieser Technik hängt jedoch in hohem Maße von den spezifischen Fähigkeiten der Tierhaltungseinrichtungen ab. Im Gegensatz zu passiveren Mechanismen der Schwangerschaftserkennung, wie die visuelle Beobachtung des Paarungsverhaltens und die anschließende Abdominaldistention der Doe, erfordert Ultraschall eine physische und/oder chemische Zurückhaltung des Tieres für einen Zeitraum von 5-10 min oder länger. In vielen Einrichtungen ist dies nicht möglich oder praktisch, und die Notwendigkeit der Prüfung sollte auf der Grundlage der spezifischen Ziele der Studie betrachtet werden. Darüber hinaus können bestimmte physiologische oder pathologische Zustände darauf hindeuten, dass die Ultraschallographie bei bestimmten Tieren aufgrund der potenziell schädlichen Auswirkungen von Not im Zusammenhang mit dem Fang und der Sedierung kontraindiziert ist. Es ist wichtig, die Eignung jedes Tieres für Ultraschalluntersuchungen vor Beginn der Studie zu bewerten, und ein Tierarzt sollte in der Planungsphase dieser Projekte konsultiert werden.
Aktuelle Praktiken für schwangerschaftserkennung in Reeves' Muntjac und anderen Tierarten sind in der Regel passiv in der Natur (Beobachtung des Paarungsverhaltens und Abdominal-Distention in tut). Serumprogesteron oder schwangerschaftsassoziierte Glykoproteinspiegel können gemessen werden, um die Diagnose zu bestätigen18,25, aber die Ergebnisse dieser Assays liefern keine Informationen über das Stadium der Trächtigkeit oder fetale Lebensfähigkeit. Ultraschall bietet den Vorteil, dass die Echtzeit-Bewertung des Fortpflanzungsstatus mit einer Genauigkeit ermöglicht wird, die der von Serumhormon-Assays18ähnelt oder höher ist, während die minimale Invasivität und Bedrängnis für die Tiere erhalten bleibt. Bei Operationen, bei denen das Brutdatum schwierig oder unmöglich zu bestimmen ist, kann Ultraschall einen genaueren Mechanismus zur Schätzung des Trächtigkeitsstadiums bieten als hormonelle Assays, selbst wenn keine veröffentlichten Schwangerschaftstabellen vorliegen. Darüber hinaus scheint körperliche und chemische Zurückhaltung für Ultraschalluntersuchungen eine minimale Notlage für gesunde Mundjac zu verursachen und bietet eine ideale Gelegenheit, eine gründliche körperliche Untersuchung durchzuführen und zusätzliche Proben (Blut, Urin, etc.)für allgemeine Gesundheitsbewertungen zu sammeln.
Gestationalaltersschätzung durch ultraschallgrafische Messungen wurde in vielen Arten festgestellt, einschließlich Rinder1, Schafe2,3, Ziegen4und Pferde5, und wurde in einer begrenzten Anzahl von Cervid-Arten sowie8-19beschrieben. In Ermangelung exakter Brutdaten oder etablierter Trächtigkeitstabellen kann das fetale Alter von Reeves' Muntjac nur grob geschätzt werden, basierend auf den für andere Arten skizzierten fetalen Entwicklungsparametern. Ein spezifisches Ziel der hier beschriebenen Arbeit ist es, formellere Richtlinien für die fetale Alterung bei dieser Art festzulegen. Mit ausreichenden normativen Daten an Ort und Stelle, zukünftige Anwendungen der Ultraschallinten in dieser Kolonie umfassen die Identifizierung von Anomalien in der fetalen Entwicklung in Gegenwart von verschiedenen experimentellen Variablen und die Bewertung der fetalen Lebensfähigkeit. Darüber hinaus können Empfindlichkeit und Spezifität des transabdominalen Ultraschalls bestimmt und mit anderen häufig verwendeten Mechanismen zum Nachweis der Schwangerschaft bei Zervidenzarten verglichen werden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Acknowledgments
Die Autoren danken Jeanette Hayes-Klug und Kelly Anderson für die Verwaltung der Muntjac-Kolonie, Dr. Alan Young für die Einführung der Muntjac und Herr Cleve Tedford von Cervid Solutions Inc. für die Bereitstellung der Samen muntjac für dieses Projekt. Diese Arbeit wurde durch den NIH-Zuschuss R01AI093634 unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.035 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomidine HCl (0.04 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Ultrasound contact gel | Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | |
| Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finland | NADA 141-033 | |
| V-trough (optional) | N/A | N/A | Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough |
| Electrical clippers or razor blades for hair removal | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
| Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Ibex Pro | |
| 5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
| 3 ml syringes | Covidien | 1.18E+09 | |
| 22 G needles | Covidien | 8.88E+09 |
References
- White, I. R., Russel, A. J., Wright, I. A., Whyte, T. K. Real-time ultrasonic scanning in the diagnosis of pregnancy and the estimation of gestational age in cattle. Vet Rec. 117 (1), 5-8 (1985).
- Sergeev, L., et al. Real-time ultrasound imaging for predicting ovine fetal age. Theriogenology. 34 (3), 593-601 (1990).
- Aiumlamai, S., Fredriksson, G., Nilsfors, L. Real-time ultrasonography for determining the gestational age of ewes. Vet. Rec. 131 (24), 560-562 (1992).
- Lee, Y., et al. Ultrasonic measurement of fetal parameters for estimation of gestational age in Korean black goats. J. Vet. Med. Sci. 67 (5), 497-502 (2005).
- Renaudin, C. D., Gillis, C. L., Tarantal, A. F., Coleman, D. A. Evaluation of equine fetal growth from day 100 of gestation to parturition by ultrasonography. J. Reprod. Fertil. Suppl. (56), 651-660 (2000).
- Lopate, C. Estimation of gestational age and assessment of canine fetal maturation using radiology and ultrasonography: a review. Theriogenology. 70 (3), 397-402 (2008).
- Gatel, L., Rosset, E., Chalvet-Monfray, K., Buff, S., Rault, D. N. Relationships between fetal biometry, maternal factors and birth weight of purebred domestic cat kittens. Theriogenology. 76 (9), 1716-1722 (2011).
- Mulley, R. C., English, A. W., Rawlinson, R. J., Chapple, R. S. Pregnancy diagnosis of fallow deer by ultrasonography. Aust. Vet. J. 64 (8), 257-258 (1987).
- Willard, S. T., Sasser, R. G., Jaques, J. T., White, D. R., Neuendorff, D. A., Randel, R. D. Early pregnancy detection and the hormonal characterization of embryonic-fetal mortality in fallow deer (Dama dama). Theriogenology. 49 (4), 861-869 (1998).
- Willard, S. T., Petty, S. J., Sasser, R. G., White, D. L., Randel, R. D. Pregnancy detection and the effects of age, body weight, and previous reproductive performance on pregnancy status and weaning rates of farmed fallow deer (Dama dama). J. Anim. Sci. 77 (1), 32-38 (1999).
- Lenz, M. F., English, A. W., Dradjat, A. Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and foetal ageing in fallow deer. Aust. Vet. J. 70 (10), 373-375 (1993).
- White, I. R., McKelvey, W. A., Busby, S., Sneddon, A., Hamilton, W. J. Diagnosis of pregnancy and prediction of fetal age in red deer by real-time ultrasonic scanning. Vet. Rec. 124 (15), 395-397 (1989).
- Bingham, C. M., Wilson, P. R., Davies, A. S. Real-time ultrasonography for pregnancy diagnosis and estimation of fetal age in farmed red deer. Vet. Rec. 126 (5), 102-106 (1990).
- Wilson, P. R., Bingham, C. M. Accuracy of pregnancy diagnosis and prediction of calving date in red deer using real-time ultrasound scanning. Vet. Rec. 126 (6), 133-135 (1990).
- Revol, B., Wilson, P. R. Ultrasonography of the reproductive tract and early pregnancy in red deer. Vet. Rec. 128 (10), 229-233 (1991).
- Revol, B., Wilson, P. R. Foetal ageing in farmed red deer using real-time ultrasonography. Anim. Reprod. Sci. 25 (3), 241-253 (1991).
- Yanagawa, Y., et al. Fetal age estimation of Hokkaido sika deer (Cervus nippon yesoensis) using ultrasonography during early pregnancy. J. Reprod. Dev. 55 (2), 143-148 (2009).
- Savela, H., Vahtiala, S., Lindeberg, H., Dahl, R. E., Beckers, J. F., Saarela, S. Comparison of accuracy of ultrasonography, progesterone, and pregnancy-associated glycoprotein tests for pregnancy diagnosis in semidomesticated reindeer. Theriogenology. 72 (9), 1229-1236 (2009).
- Vahtiala, S., Sakkinen, H., Dahl, E., Beckers, J. F., Ropstad, E. Ultrasonography in early pregnancy diagnosis and measurements of fetal size in reindeer (Rangifer tarandus tarandus). Theriogenology. 61 (4), 785-795 (2004).
- Chapman, N. G., Harris, S. Evidence that the seasonal antler cycle of adult Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) is not associated with reproductive quiescence. J. Reprod. Fertil. 92 (2), 361-369 (1991).
- Chapman, D. I., Chapman, N. G., Dansie, O. The periods of conception and parturition in feral Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi) in southern England, based upon age of juvenile animals. J. Zool. 204 (4), 575-578 (1984).
- Chapman, N. G., Furlong, M., Harris, S. Reproductive strategies and the influence of date of birth on growth and sexual development of an aseasonally-breeding ungulate: Reeves' muntjac (Muntiacus reevesi). J. Zool. 241 (3), 551-570 (1996).
- Liming, S., Yingying, Y., Xingsheng, D. Comparative cytogenetic studies on the red muntjac, Chinese muntjac, and their F1 hybrids. Cytogenet. Cell Genet. 26 (1), 22-27 (1980).
- Nyland, T. G., Mattoon, J. S. Chapter 2. Small Animal Diagnostic Ultrasound. , 2nd edition, Saunders. Philadelphia. 19-29 (2002).
- Huang, F., Cockrell, D. C., Stephenson, T. R., Noyes, J. H., Sasser, R. G. A serum pregnancy test with a specific radioimmunoassay for moose and elk pregnancy-specific protein B. J. Wildl. Manag. 64, 492-499 (2000).
