Summary
O ultrassom transabdominal é descrito como um meio eficaz e não invasivo para avaliar o estado reprodutivo no cervo muntjac de Reeves. Esses métodos podem ser utilizados para alcançar o diagnóstico precoce da gravidez e avaliar a viabilidade fetal. As aplicações futuras desta técnica incluem a estimativa da idade gestacional e os efeitos da doença materna no desenvolvimento fetal.
Abstract
O deer muntjac de Reeves (Muntiacus reevesi) é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia, e atualmente está sendo investigada como um modelo potencial de transmissão da doença de prípcional e patogênese. A transmissão vertical é uma área de interesse entre pesquisadores que estudam doenças infecciosas, incluindo a doença de príptica, e essas investigações exigem métodos eficientes para avaliar os efeitos da infecção materna no desempenho reprodutivo. O exame ultrasonográfico é uma ferramenta bem estabelecida para diagnosticar a gravidez e avaliar a saúde fetal em muitas espécies animais1-7, incluindo várias espécies de cervidscultivados 8-19, no entanto essa técnica não foi descrita no veado muntjac de Reeves. Aqui descrevemos a aplicação de ultrassom transabdominal para detectar a gravidez em muntjac faz e avaliar o crescimento e desenvolvimento fetal ao longo do período gestacional. Com esse procedimento, os animais gestantes foram identificados até 35 dias após o emparelhamento doe-buck e este foi um meio eficaz para monitorar a gravidez com segurança em intervalos regulares. Os objetivos futuros deste trabalho incluirão o estabelecimento de referências normais de medição fetal para estimativa da idade gestacional, determinação da sensibilidade e especificidade da técnica para o diagnóstico da gravidez em vários estágios da gestação e identificação de variações no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais.
Introduction
O exame ultrasonográfico é um método bem descrito de diagnóstico de gravidez em bovinos1, ovinos2,3, cabras4,cavalos5, animaiscompanheiros 6,7e outras espécies animais domésticos. Esta modalidade de imagem também foi identificada como uma ferramenta valiosa para a detecção da gravidez e a estimativa da idade fetal em várias espécies de cervids cativos, incluindo veadosfallow 8-11, veado vermelho12-16, veado de ika hokkaido17e rena18,19. Em muitos casos, a ultrassonografia tem produzido taxas de precisão mais altas do que outros mecanismos de detecção da gravidez, como progesterona sémum ou análise de glicoproteína associada à gravidez9,18. Além disso, a visualização ultrasonográfica do trato reprodutivo pode fornecer informações adicionais sobre viabilidade fetal, idade gestacional e identificação de anormalidades no desenvolvimento que de outra forma seriam difíceis de avaliar. A utilidade da ultrassonografia para avaliação do estado reprodutivo sugere que essa metodologia deve ser adaptada a outras espécies nas quais são utilizados programas de reprodução ativa.
O cervo muntjac de Reeves(Muntiacus reevesi)é uma pequena espécie cervid nativa do sudeste da Ásia20. Embora o ciclo reprodutivo desses animais não seja bem caracterizado em seus territórios nativos, estudos de populações selvagens em partes do sul da Inglaterra melhoraram a compreensão de seus padrões de reprodução20. Ao contrário da maioria dos cervids, o muntjac de Reeves parece procriar o ano todo, sem picos aparentes de fawning sazonal20-22. Muntjac fêmea tipicamente dá à luz um único fawn após um período de gestação de 210 dias, e entra de forma confiável em um estrus pós-parto dentro de 24 horas20-22. Será que isso não concebe durante este período pós-parto retornará a estrus aproximadamente 24-25 dias depois20. Em situações cativas, a reprodução é tipicamente alcançada por moradias com um ou mais homens intactos. Este sistema produz taxas de concepção satisfatórias e requer pouca habilidade técnica para o pessoal, porém as datas exatas de reprodução são difíceis, se não impossíveis, de determinar.
Muntjac são comumente usados em estudos citogenéticos devido à ampla gama de números de cromossomo diploides e alta taxa de diversificação karyotípica entre as diferentes espécies23. Esses animais também estão sendo investigados atualmente como modelo de patogênese e transmissão da doença de prígion, com particular interesse colocado no estudo da transmissão vertical da doença de desomânudo crônico (CWD) em cervids. A importância do muntjac em várias aplicações de pesquisa diferentes sugere que tecnologias reprodutivas aprimoradas devem ser estabelecidas para complementar os procedimentos investigativos atuais. Especificamente, mecanismos não invasivos para avaliar o período gestacional poderiam potencialmente elucidar variações críticas no desempenho reprodutivo e no crescimento e desenvolvimento fetal em diferentes condições experimentais. Além disso, o desenvolvimento de referências de medição fetal em tempo real seria potencialmente valioso na estimativa da idade gestacional em situações em que as datas de reprodução não podem ser determinadas. Estudos anteriores descreveram mecanismos para o uso de medidas fetais, como comprimento de alcatra -coroa (CRL), profundidade torácica (CD) e comprimento da cabeça (HL) para estimar o estágio aproximado da gestação nas espécies cervid11-14, 16,17. Além disso, alguns desses estudos também estabeleceram diretrizes descrevendo quando marcos específicos do desenvolvimento, como a mineralização esquelética ou batimentos cardíacos fetais, podem ser identificados8-19. Embora esses dados possam ser úteis para ajudar a orientar a análise de ultrassom reprodutivo no muntjac, a maioria das outras espécies cervidas estudadas têm tamanho corporal muito maior e períodos gestacionais mais longos, reduzindo o valor translacional desses estudos para aplicações de muntjac.
O protocolo aqui descrito descreve a ultrassonografia transabdominal do muntjac feminino para fins de diagnóstico e monitoramento da gravidez. A execução bem-sucedida deste protocolo pode facilitar a detecção precoce da gravidez e a avaliação do crescimento e desenvolvimento fetal. Esta técnica possui aplicações valiosas na condução de estudos que investigam a reprodução, no desenvolvimento do útero, ou transmissão vertical de doenças infecciosas em um pequeno modelo cervid e também pode ser útil para fins clínicos em operações de reprodução em cativeiro.
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Protocol
1. Preparação Processual
Todos os procedimentos animais descritos foram revisados e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade estadual do Colorado, uma Associação de Avaliação e Acreditação de Cuidados Animais Laboratoriais (AAALAC), instituição credenciada pela Intl.
- Antes do exame, imobilize os animais usando protocolos adequados de sedação ou anestesia para proporcionar relaxamento e permitir o posicionamento adequado. Um manipulador restringe o veado enquanto uma segunda pessoa administra a sedação ao animal.
Nota: Os autores encontraram a seguinte combinação para fornecer sedação eficaz nesta espécie: butorphanol (0,45 mg/kg), azaperona (0,035 mg/kg) e medetomidina (0,04 mg/kg), administrada intramuscularmente nos músculos glúteos. - Uma vez que a doe tenha atingido um plano de sedação que permite o manuseio compatível, posicione-a em uma recumbência dorsal ou lateral em uma mesa de exame ou dentro de um cocho V. Eleve ligeiramente a cabeça, pescoço e tórax (aproximadamente 20-30°) para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal e facilitar a ventilação adequada durante o procedimento.
Nota: Na maioria dos cervids ou outras espécies ruminantes, o ultrassom abdominal é realizado em animais em pé; no entanto, o pequeno tamanho e considerações comportamentais desta espécie requer sedação pesada para exame e posicionamento severo é, portanto, mais difícil e pode impedir uma técnica de imagem eficaz. Posicionar o animal no meio do caminho entre a recumência severa e lateral pode ser ideal para reduzir o risco de regurgitação e hipoventilação e deve ser considerado, se possível. Em qualquer posição recumbente, é fundamental monitorar cuidadosamente as respirações dos animais e parar imediatamente o exame e colocar o animal em recumbência severa se for notada regurgitação ou hipoventilação. - Se necessário, corte os cabelos da área do abdômen a serem examinados para obter o contato adequado entre a pegada do transdutor e a pele.
Nota: No início da gestação, evidências de gravidez podem ser detectadas no abdômen caudal perto das glândulas mamárias. Esta região do muntjac é tipicamente sem pelos e, portanto, a barba pode não ser indicada neste momento. À medida que o feto cresce e o útero distendência para ocupar uma posição mais craniana no abdômen, o recorte do cabelo será necessário antes da imagem. Deve-se tomar cuidado para evitar causar qualquer trauma mecânico na pele, incluindo lacerações de lâminas de barbear ou lesões térmicas de cortadores elétricos. - Posicione a unidade de ultrassom em um local que permita ao técnico visualizar facilmente o monitor durante a realização do exame com sua mão dominante. Insira informações de identificação animal (nome, número de identificação, etc.) no sistema para rotular automaticamente imagens salvas e loops de vídeo.
2. Exame de Ultrassom Reprodutivo Transabdominal
- Aplique uma quantidade generosa de gel de acoplamento acústico no abdômen caudal.
- Coloque um transdutor linear curvo de 5-10 MHz na pele do abdômen caudal, imediatamente craniano para o púbis, e mova-o lentamente em uma direção craniana para avaliar as estruturas dentro da cavidade pélvica. Escaneie os quadrantes esquerdo e direito do abdômen caudal para avaliar ambos os chifres do útero bicornuato do muntjac.
Nota: O ultrassom abdominal abrangente envolve avaliação de todas as vísceras abdominais, incluindo fígado, rins, baço, trato gastrointestinal, bexiga urinária e trato reprodutivo. Para efeitos deste protocolo, somente o exame da gravidez será discutido detalhadamente; no entanto, o aparecimento normal de outros órgãos abdominais caudais deve ser reconhecido, pois essas estruturas provavelmente serão encontradas durante o curso do estudo. Os órgãos mais comumente vistos neste local incluem segmentos do trato gastrointestinal, da bexiga urinária e do trato reprodutivo. Os intestinos grosso e pequeno são identificados pela aparência caracteristicamente em camadas da parede intestinal. O lúmen pode ou não ser pronunciado dependendo do tipo e quantidade de conteúdo, que pode incluir partículas fluidas, gasas, mucosas ou alimentares. A bexiga urinária pode ser difícil de identificar a menos que distendida com urina, e as camadas da parede da bexiga são significativamente menos distintas do que as dos intestinos. Além do útero, os ovários também podem ser encontrados no ultrassom do trato reprodutivo do muntjac feminino. Os ovários aparecerão como estruturas vazias perto do polo caudal dos rins, e sua aparência pode mudar ao longo do ciclo estrous. A presença de múltiplos folículos maduros e cheios de fluidos dentro do córtex é sugestiva de estrus.
Nota: Ao girar e/ou "abanar" a cabeça de digitalização do transdutor, as estruturas podem ser avaliadas em planos transversais ou sagitos.- Se necessário para diferenciar um útero gravid da bexiga urinária, esvazie a bexiga manualmente aplicando pressão suave no abdômen caudal ou colocando um cateter urinário e repetindo o exame.
Nota: A expressão manual da bexiga só deve ser tentada quando o animal estiver em posição severa ou vertical, o que facilita uma orientação mais natural das vísceras abdominais e reduz o risco de trauma para outras estruturas. O útero também pode ser diferenciado da bexiga urinária, avaliando a espessura da parede do órgão. A espessura típica de uma bexiga moderadamente distendida é de aproximadamente 1,4 mm24,enquanto os autores descobriram que a parede mais muscular do útero gravid no muntjac geralmente mede entre 7-8 mm.
Nota: A gravidez precoce é difícil de diagnosticar definitivamente devido à falta de estruturas fetais identificáveis, e de fato a primeira indicação de gravidez pode ser simplesmente um pequeno bolso fluido no abdômen caudal. Se visto neste momento, o embrião em desenvolvimento aparecerá como uma estrutura hiperecóica, ovalicada à amorfa dentro do útero(Figura 1).
- Se necessário para diferenciar um útero gravid da bexiga urinária, esvazie a bexiga manualmente aplicando pressão suave no abdômen caudal ou colocando um cateter urinário e repetindo o exame.
- Faça ajustes na profundidade, frequência e ganho conforme necessário para melhorar o contraste e os detalhes da imagem.
Nota:frequências mais altas estão associadas a comprimentos de onda mais curtos, necessários para uma melhor resolução de imagem. A maioria dos transdutores são capazes de operar dentro de uma faixa de frequências (por exemplo, 6-10 MHz)24. A frequência pode ser ajustada usando os controles do scanner na unidade de ultrassom, e o aumento da frequência resultará em uma imagem mais clara. O aumento da frequência reduz simultaneamente a profundidade da penetração de ondas sonoras; portanto, a redução da frequência pode ser necessária para visualizar estruturas mais profundas, mas a resolução pode ficar comprometida24. Por essa razão, é importante selecionar a maior frequência possível para alcançar a profundidade do tecido desejada. Os ajustes nos controles de ganho alterarão a amplificação das ondas sonoras que retornam ao transdutor dos tecidos e afetarão o grau de contraste na imagem24. O ganho deve ser ajustado a um ponto onde o contraste ideal entre tecidos hiperecóicos e hipoecóicos é alcançado, e essas configurações podem precisar ser ajustadas dependendo das estruturas que estão sendo imagens.
3. Obtenção de Medidas Fetais
Nota: A idade gestacional em muitas espécies animais domésticas pode ser estimada utilizando faixas de referência estabelecidas para medidas fetais obtidas a partir do exame de ultrassom. As medidas mais utilizadas incluem comprimento reto de alcatra (SCRL), profundidade do peito (CD) e comprimento da cabeça (HL)17. Embora dados suficientes ainda não tenha sido coletados para desenvolver diretrizes de idade gestacional confiáveis no cervo muntjac de Reeves, as medidas podem ser coletadas para começar a estabelecer essas referências. A frequência cardíaca fetal (FHR) tem sido mostrada em outras espécies de cervid e ruminante para aumentar linearmente à medida que a gestação progride até um certo ponto (tipicamente em torno do dia 60 da gestação), momento em que a frequência cardíaca começa a diminuir17. A FHR pode ser usada para estimar a idade gestacional em conjunto com outras observações de ultrassom, porém é mais comumente utilizada como medida de viabilidade fetal17,24. A FHR foi calculada no muntjac de Reeves já em 35 dias após o acasalamento.
- Para medir o SCRL, localize o útero no monitor e faça ajustes finos na posição do transdutor até que se obtenha uma visão sagital de todo o feto(Figuras 2 e 3). Congele a imagem e meça a distância entre o aspecto mais dorsal do crânio e a base do sacro (Figuras 2 e 3).
- Para medir o CD, obtenha uma visão sagital do feto (a mesma imagem pode ser usada para medir SCRL) e meça a distância entre os aspectos dorsal e ventral do tórax (Figuras 2 e 3).
- Para medir a HL, utilizando a mesma visão sagital do feto descrita para as medidas scrl e CD, meça a distância da crista occipital até a base do nariz (Figuras 2 e 3).
- Para calcular a frequência cardíaca fetal, identifique o coração dentro da cavidade torácica do feto visualizando suas contrações rítmicas. Calcule a frequência cardíaca contando o número de contrações (batimentos cardíacos) que ocorrem dentro de um período de 1 minuto de tempo.
Nota: Se a unidade de ultrassom que está sendo usada tiver recursos do Doppler, esse recurso poderá ser empregado para ajudar ainda mais a distinguir o coração de outros movimentos fetais não específicos. - Verifique se todas as imagens salvas e loops de vídeo incluem todas as informações de identificação necessárias, incluindo nome ou número de animais, data, medidas e etiquetas de estrutura apropriadas.
4. Conclusões e Recuperação Processual
- Remova todo o gel de contato de ultrassom residual do abdômen do animal usando um pano macio ou toalhas de papel. Limpe o gel do transdutor antes do armazenamento.
- Se utilizar o protocolo de sedação descrito na etapa 1.1, administre atipamezole subcutânea em uma dose de 0,25 mg/kg para reverter os efeitos da medetomidina. Se usar um protocolo de sedação diferente no qual um antagonista está disponível, administre este agente ao animal de acordo com doses publicadas na conclusão do procedimento para acelerar a recuperação.
- Coloque o muntjac em uma superfície de cama macia em recumbência popal, com a cabeça ligeiramente elevada para reduzir o risco de regurgitação e aspiração de conteúdo rumenal. Monitore o animal de perto até que esteja totalmente recuperado e capaz de ambular ao redor do recinto sem assistência.
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Representative Results
Usando o protocolo descrito aqui, a gravidez pode ser diagnosticada e monitorada no veado muntjac da Reeve com técnicas minimamente invasivas. O ponto de tempo mais antigo que a gravidez poderia ser detectada pelos autores foi de aproximadamente 35 dias após o comportamento observado de acasalamento.
Nos estágios iniciais da gestação, a gravidez foi diagnosticada visualizando um útero cheio de fluidos identificado como um espaço anecóico no abdômen caudal. Dentro do útero, o embrião em desenvolvimento apareceu como uma estrutura hiperecóica e ovoid com poucas características identificáveis(Figura 1). À medida que a gravidez progredia, as estruturas fetais se tornaram aparentes e um diagnóstico conclusivo poderia ser feito após a observação da mineralização esquelética e dos batimentos cardíacos fetais(Figuras 2 e 3).
As medidas fetais podem ser obtidas e utilizadas para estabelecer diretrizes de referência para a estimativa da idade gestacional nos casos em que não se sabe uma data exata de reprodução, embora ainda não tenhamos desenvolvido totalmente este sistema no muntjac. Comprimento reto da coroa-garupa (SCRL), HL e CD são medidas fetais padrão que são comumente usadas para estimar a idade fetal em muitas espécies17, e essas medidas foram obtidas a partir de imagens de ultrassom de gravidez de muntjac usando o protocolo descrito aqui. Todas essas três medidas podem ser obtidas a partir da mesma imagem sagital devidamente posicionada(Figuras 2 e 3), mas imagens separadas podem ser usadas se todo o feto não for capaz de ser capturado em uma única visão sagital. No futuro, essas técnicas também podem ser utilizadas para identificar variações de crescimento e desenvolvimento observadas em diferentes condições experimentais e determinar a viabilidade fetal.
Figura 1. Imagem de ultrassom demonstrando gravidez precoce em um cervo muntjac de Reeves. A doe neste estudo foi alojada com um muntjac macho intacto por 46 dias, porém uma data exata de reprodução não é conhecida. As características fetais não são distinguíveis nesta fase da gestação.
Figura 2. Imagem de ultrassom da mesma gravidez retratada na Figura 1, 91 dias após a introdução da doe ao dólar. (CD - profundidade do peito, HL - comprimento da cabeça, P - placentome, SCRL - comprimento reto da coroa-garupa).
Figura 3. Imagem de ultrassom de uma segunda gravidez demonstrando posicionamento adequado para a obtenção de medidas fetais. Imagem tirada 91 dias após a introdução do doe ao dólar. (CD - profundidade do peito, HL - comprimento da cabeça, P - placentome, SCRL - comprimento reto da coroa-garupa).
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Discussion
Este protocolo descreve a aplicação da ultrassonografia transabdominal para diagnóstico de gravidez no cervo muntjac de Reeves. Consistente com outros estudos de ultrassom, equipamentos adequados e proficiência técnica são imprescindíveis para um exame reprodutivo bem sucedido do doe muntjac. Uma revisão cuidadosa da anatomia básica dos mamíferos, os princípios físicos do ultrassom diagnóstico e a aparência ultrasonográfica típica das vísceras abdominais ajudarão na redução dos diagnósticos equivocados. Além disso, a seleção de transdutores apropriados e a familiaridade com os controles de instrumentação e scanner é fundamental para a obtenção de imagens de alta qualidade e interpretação precisa.
Para muitos ultrassonógrafos inexperientes, artefatos de imagem são uma causa comum de má resolução de imagem e avaliação imprecisa das estruturas. A reverberação na interface transdutor de pele é um dos artefatos mais encontrados no ultrassom abdominal veterinário, podendo ser significativamente reduzida eliminando a presença de gás entre as duas superfícies. A depilação adequada e a generosa aplicação de gel acústico na pele devem ser suficientes para minimizar o impacto deste artefato. Discussões de outros artefatos de imagem podem ser encontradas em vários textos da ultrassonografia humana e veterinária e, portanto, não serão discutidas com mais detalhes aqui; no entanto, um conhecimento geral desses fenômenos permitirá que o ultrassonógrafo os controle de forma mais eficaz24.
Se realizar um exame reprodutivo, deve-se entender que o útero pode ser difícil de visualizar em um animal normal e não gestante. No início da gravidez, o lúmen do útero pode se tornar identificável como hipoecóico ao espaço anecóico à medida que o saco gestacional se forma. Nesta fase do muntjac, o útero pode ser tipicamente encontrado por escaneamento ao nível de, ou ligeiramente caudal para, as glândulas mamárias. Antes da mineralização esquelética ou do aparecimento de batimentos cardíacos fetais, a gravidez pode ser mal diagnosticada na presença de outras condições reprodutivas que causam a acumulação de fluidos no útero, o que pode incluir patologia como pirometra, hidrometra ou mucometra. Os diagnósticos de ultrassom devem ser feitos em conjunto com uma avaliação clínica completa do animal antes da sedação para o procedimento. Na gestação precoce, o conceito aparecerá como uma estrutura esférica e hiperecóica dentro do saco amniótico. Os pontos de tempo específicos de desenvolvimento não são bem caracterizados nesta espécie; no entanto, a mineralização esquelética e o movimento cardíaco fetal parecem ser consistentemente detectáveis em aproximadamente 8 semanas após o acasalamento.
Em condições ideais, o ultrassom transabdominal pode ser uma ferramenta incrivelmente útil para avaliação de estruturas reprodutivas em muitas espécies, incluindo o muntjac de Reeves. O valor dessa técnica, no entanto, é altamente dependente das capacidades específicas das instalações habitacionais dos animais. Ao contrário de mecanismos mais passivos de detecção da gravidez, como observação visual do comportamento de acasalamento e subsequente distensão abdominal do doe, o ultrassom requer restrição física e/ou química do animal por um período de tempo com duração de 5-10 minutos ou mais. Em muitas instalações, isso não é possível ou prático, e a necessidade do exame deve ser considerada com base nos objetivos específicos do estudo. Além disso, certos estados fisiológicos ou patológicos podem sugerir que a ultrassonografia é contraindicada em certos animais devido aos efeitos potencialmente prejudiciais da angústia relacionados à captura e sedação. É importante avaliar a adequação de cada animal para o exame de ultrassom antes de iniciar o estudo, e um veterinário deve ser consultado nas etapas de planejamento desses projetos.
As práticas atuais para detecção da gravidez no muntjac de Reeves e em outras espécies da vida selvagem são tipicamente passivas na natureza (observação do comportamento de acasalamento e distensão abdominal em faz). Os níveis de glicoproteína associadas à gravidez podem ser medidos para confirmar o diagnóstico18,25, porém os resultados desses ensaios não fornecem nenhuma informação sobre o estágio de gestação ou viabilidade fetal. O ultrassom oferece o benefício de permitir a avaliação em tempo real do estado reprodutivo com precisão semelhante ou maior do que a dos ensaios hormonais do soro18,mantendo a mínima invasividade e angústia aos animais. Em operações onde a data de reprodução é difícil ou impossível de determinar, o ultrassom pode fornecer um mecanismo mais preciso para estimar o estágio de gestação do que os ensaios hormonais, mesmo na ausência de tabelas gestacionais publicadas. Além disso, a contenção física e química para o exame de ultrassom parece causar sofrimento mínimo ao muntjac saudável e oferece uma oportunidade ideal para realizar um exame físico minucioso e coletar amostras adicionais (sangue, urina, etc.) para avaliações gerais de saúde.
A estimativa da idade gestacional através de medições ultrasonográficas foi estabelecida em muitas espécies, incluindo bovinos1, ovelhas2,3, cabras4e cavalos5, e foi descrita em um número limitado de espécies cervidas, bem como8-19. Na ausência de datas exatas de reprodução ou tabelas de gestação estabelecidas, a idade fetal do muntjac de Reeves só pode ser aproximadamente estimada com base nos parâmetros de desenvolvimento fetal delineados para outras espécies. Um objetivo específico do trabalho aqui descrito é estabelecer diretrizes mais formais para o envelhecimento fetal nesta espécie. Com dados normativos suficientes em vigor, futuras aplicações da ultrassonografia nesta colônia incluirão a identificação de anormalidades no desenvolvimento fetal na presença de diferentes variáveis experimentais e a avaliação da viabilidade fetal. Além disso, a sensibilidade e a especificidade do ultrassom transabdominal podem ser determinadas e comparadas a outros mecanismos comumente empregados para detectar a gravidez em espécies de cervid.
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Disclosures
Os autores não têm nada a revelar.
Acknowledgments
Os autores desejam agradecer a Jeanette Hayes-Klug e Kelly Anderson pela gestão da colônia muntjac, Dr. Alan Young por nos apresentarem ao muntjac e ao Sr. Cleve Tedford da Cervid Solutions Inc. por fornecerem a semente muntjac para este projeto. Este trabalho foi apoiado pela concessão do NIH R01AI093634.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg) | Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa | NADA 135-780 | |
| Azaperone tartrate (0.035 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Medetomidine HCl (0.04 mg/kg) | ZooPharm | ||
| Ultrasound contact gel | Medline, Mundelein, Illinois | MDS092005 | |
| Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg) | Orion Corporation, Espoo, Finland | NADA 141-033 | |
| V-trough (optional) | N/A | N/A | Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough |
| Electrical clippers or razor blades for hair removal | Oster, McMinnville, Tennessee | 78005-140 | |
| Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | Ibex Pro | |
| 5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array | E.I. Medical Imaging, Loveland, CO | 290420 | |
| 3 ml syringes | Covidien | 1.18E+09 | |
| 22 G needles | Covidien | 8.88E+09 |
References
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