Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Mätning av effekterna av bakterier på doi: 10.3791/51203 Published: October 22, 2013

Summary

Ett ägg-i-mask (EIW)-analys är en användbar metod för att kvantifiera äggläggande beteende. Förändringar i äggläggningen kan vara en beteendegensvar av modellen organismen

Abstract

C. elegans äggläggning beteende påverkas av miljö-signaler såsom osmolaritet 1 och vibrationer 2. I total avsaknad av mat C. elegans upphör också äggläggningen och behålla befruktade ägg i sin livmoder 3. Däremot är effekten av olika källor av mat, speciellt patogena bakterier och särskilt Enterococcus faecalis, på äggläggning beteende inte väl karakteriserade. Ägget-in-masken (EIW)-analys är ett användbart verktyg för att kvantifiera effekterna av olika typer av bakterier, i det här fallet E. faecalis, på äggläggning beteende.

EIW analyser involverar räkna antalet ägg som kvarhålles i uterus hos C. elegans 4. Den EIW analysen involverar blekning iscensatt, gravid vuxen C. elegans för att ta bort nagelbanden och separera de balanserade ägg från djur. Före blekning, är maskar utsätts för bakterier (eller någon typ av miljö-cue) Under en bestämd tidsperiod. Efter blekning, är en mycket lätt kunna räkna antalet ägg som behålls inne i livmodern av maskar. I denna analys, en kvantifierbar ökning ägg kvarhållande efter E. faecalis exponering kan lätt mätas. Den EIW-analysen är en beteendevetenskaplig analys som kan användas för att screena för potentiellt sjukdomsframkallande bakterier eller förekomsten av miljögifter. Dessutom kan EIW analysen vara ett verktyg för att screena för läkemedel som påverkar signalsubstansen signalering eftersom äggläggning beteende moduleras av signalsubstanser som serotonin och acetylkolin 5-9.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Caenorhabditis elegans, en mikroskopisk, fritt levande rundmask, är en modell organism som traditionellt används för att studera utvecklings-och cell signalering processer på grund av dess transparenta anatomi, väl karakteriserad utveckling, fullt sekvenserat genomet, kort generationstid-tid, och genetisk homologi till människor . På senare tid, C. elegans har blivit en modell organism inom miljötoxikologi och medfödd immunitet 10, 11.

Dessa självbefruktande hermafroditiska maskar blir könsmogna inom två till tre dagar efter kläckningen ur ägget. Under sin livscykel, C. elegans passerar fyra larvstadier (L1-L4), före vuxen ålder. Ett isolerat hermafrodit kan producera i genomsnitt 300 avkommor inom tre dagar från topp fruktsamhet. I reproduktivt mogen C. elegans hermafroditer är befruktade ägg kvar i livmodern under flera timmar innan de läggs. Dennormal antal ägg lagrade i livmodern vid en viss tidpunkt (under topp fruktsamhet) är mellan tio och femton 12. Antalet ägg i livmodern är en funktion av både hastigheten av äggproduktion och hastigheten för äggläggning. Befruktade ägg ut från livmodern genom sammandragning av sexton vulva muskler arrangerade kring öppnandet av vulva 13. Hermafrodit-specifika motorneurons (HSN: s) och VC motorneurons synaps på vulva muskler påverkar muskelsammandragning och därmed äggläggande beteende 5,7,13,14. Utvisning av ägg från livmodern uppstår på grund av samordnade aktiviteten av nervceller och muskler.

Lab kulturer av C. elegans är oftast upp på en diet av nonpathogenic Escherichia coli OP50. I den naturliga miljön, C. elegans kommer i kontakt med en mängd olika livsmedel källor, såsom patogena bakterier, som kan vara potentiellt skadliga. När de utsätts för skadliga ämnen imiljön, C. elegans behåller äggen tills miljön blir mer gynnsam. Förmodligen ägg kvarhållande är ett försök att skydda sin avkomma.

I detta ägg i masken (EIW)-analys, C. elegans utsätts för potentiellt patogena bakterier, Enterococcus faecalis, som finns i miljön. Exponering för patogena former av E. faecalis kan orsaka ihållande tarminfektion och med död i C. elegans 15. Exponering för andra former av patogena bakterier har visats påverka ägg kvarhållande 16,17, men effekten inte kvantifierades. Dessutom, effekten av milt patogena stammar av E. faecalis har stammar som inte är omedelbart dödande, på äggläggning beteende inte studerats.

EIW analyser involverar räkna antalet ägg som kvarhålles i uterus hos C. elegans 4. Även om C. elegansär transparent, kan äggen samlas i livmodern vara svåra att kvantifiera i ett intakt djur. Den EIW analysen involverar blekning gravid vuxen C. elegans som exponerats för bakterien under en bestämd tidsperiod. Den blekmedel upplöser yttre nagelband lämnar äggen bakom. Äggen är brytningsindex för effekterna av blekmedel på grund av närvaron av en skyddande äggskal. Efter blekning, är en mycket lätt kunna räkna antalet ägg frigörs från livmodern av maskarna vid blekning.

Analysen som beskrivs är en enkel, billig och snabb metod för att kvantifiera antalet ägg i livmodern på en gång, och därmed kvantifiera effekterna av E. faecalis på ägg retention. Denna analys kan användas för att kvantifiera effekten av andra typer av bakterier, miljögifter eller läkemedel på ägg retention. Denna analys har också potential att användas som en skärm för bakteriell patogenicitet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1) Framställning av Media Nematoder Tillväxt (NGM)

  1. För att göra 50 tallrikar, tillsätt 1,5 g NaCl, 8,5 g ultrarent Agar, och 1,25 g pepton till en 1 Lflask.
  2. Lägg 487,5 ml dH 2 O till kolv. Snurra försiktigt för att blanda och täcka öppningen av kolven med en bit aluminiumfolie.
  3. Sterilisera lösningen genom autoklavering vid standardbetingelser (121 psi, 120 ° C, 20 min).
  4. Låt lösningen svalna till 45 ° C i ett vattenbad.
  5. Till lösningen, lägg till följande i ordning: 500 l kolesterol från en 5 mg / ml stamlösning (löst i etanol), 500 pl 1 M CaCl2, 500 pl 1 M MgSO 4, och 12,5 ml KPO4 buffert (54.15 g KH 2 PO 4 och 17,8 g K 2 HPO 4 i 500 ml dH 2 O) som beskrivs i 18.
  6. Använda sterila pipetter, tillsätt 10 ml agar lösning till varje 60 mm polystyren petriskål. Låt media stelna vid rumstemperatur overnight.

2) Framställning av B Broth E. coli Media

  1. För att göra fem 100 ml kulturer, tillsätt 5,0 g Bacto trypton, 2,5 g jästextrakt, 5,0 g NaCl till en bägare.
  2. Tillsätt steril, destillerat vatten till en slutlig volym av 500 ml. Värm lösningen på en varm platta, under omrörning tills de lösta ämnena har lösts upp.
  3. Häll 100 ml av B-buljong i fem glasflaskor (minst 200 ml volym).
  4. Sterilisera lösningar genom autoklavering vid standardförhållanden (121 psi, 120 ° C, 20 minuter).
  5. Tillåt B buljong svalna till rumstemperatur före användning.

3) sådd C. elegans-Underhåll Plattor

  1. Efter att ha låtit NGM plattor att torka vid rumstemperatur under minst en vecka, inokulera en 100 ml B buljongkultur med några kolonier av E. coli (OP50).
  2. Grow E. coli odling vid 37 ° C över natten.
  3. Pipettera en till två droppar (cirka 10081, l) av OP50 kultur på mitten av varje NGM platta. Plattorna är vanligtvis staplas locket uppåt. När pipettering (sådd), börja genom att pipettera kulturen på plattan vid botten av stapeln. Arbeta dig upp varje stapel. Försök inte att flytta plattorna efter sådd, eftersom det är viktigt att kulturen inte komma för nära kanterna på plattan.
  4. Låt de ympade plattorna torka vid rumstemperatur under minst en vecka före användning.
  5. Seedade plattorna lagras (inverterad) i förslutna plastbehållare vid rumstemperatur.

4) Underhålla C. elegans Stammar

  1. För att upprätthålla välnärda C. elegans lager, använd en mask plocka flytta tre L4s eller dräktiga vuxna till ett nytt, seedade NGM plattan var 3-4 dagar.
  2. Förvara plattorna (inverterad) företrädesvis inuti en inkubator vid 15 - 22 ° C. C. Kulturer i de beskrivna analyserna lagrades vid 20 ° C. C. elegans utveckling är temperaturberoende. Som maintenance temperaturen ökar, minskar tiden mellan utvecklingsstadier.

5) Framställning av Tryptic Soy Agar (TSA) E. faecalis Kultur Media

  1. För att göra 50 tallrikar, mäter 500 ml sterilt, destillerat vatten i en kolv och koka upp under omrörning på en värmeplatta.
  2. Tillsätt 20 g pulvriserad TSA agar till kolven och låt för att lösa upp.
  3. Sterilisera lösningar genom autoklavering vid standardförhållanden (121 psi, 120 ° C, 20 minuter).
  4. Låt lösningen svalna till 45 ° C i ett vattenbad.
  5. Använda sterila pipetter, tillsätt 10 ml agar lösning till varje 60 mm polystyren petriskål. Låt media stelna vid rumstemperatur över natten.

6) Framställning av Tryptic Soy Broth (TSB) E. faecalis Kultur Media

  1. För att göra 250 odlingsrör, mäta 500 ml sterilt, destillerat vatten i en kolv och varm på en värmeplatta under omröring. Lägg 15 g TSB agarpulver till kolven och tillåter pulvret att lösas upp.
  2. Sterilisera lösningar genom autoklavering vid standardförhållanden (121 psi, 120 ° C, 20 minuter).
  3. Låt lösningen svalna till rumstemperatur, och pipettera sedan 2 ml till sterila, 5 ml provrör.

7) Framställning av Infusion Brain hjärta (BHI) Media, med streptomycin, för E. faecalis Kultur

  1. Mät 500 ml sterilt, destillerat vatten i en kolv och koka upp under omrörning på en värmeplatta.
  2. Lägg 26 g BHI-medium till kolven och låt lösningen för upplösning.
  3. Sterilisera lösningar genom autoklavering vid standardförhållanden (121 psi, 120 ° C, 20 minuter).
  4. Låt lösningen svalna till 45 ° C i ett vattenbad.
  5. Användning av steril teknik, tillsätt 0,5 ml av en 10 mg / ml streptomycin stamlösning och snurra för att blanda.
  6. Tillsätt 10 ml av lösningen till varje 60 mm polystyren petriskål.

8) Underhålla E. faecalis Stammar

  1. För att bibehålla E. faecalis lager, använd en steril ögla till streak enskilda kolonier på separata tryptiska (TSA) soja agarplattor.
  2. Grow kulturer vid 37 ° C över natten. Store plattor (inverterad) i en försluten påse eller låda vid rumstemperatur under flera veckor.

9) framställning av E. faecalis Underlag för EIW Assay

  1. Inokulera en 2 ml TSB kultur med en koloni av E. faecalis och inkubera över natten vid 37 ° C.
  2. Pipettera 20 pl E. faecalis kultur på mitten av ett berett BHI-streptomycin plattan och inkubera över natten vid 37 ° C.

10) Förberedelse E. coli Plattor för EIW analys (kontrollplattor)

  1. Inokulera en 100 ml B bro-th kultur med en koloni av E. coli OP50 och inkubera över natten vid 37 ° C
  2. Pipettera 20 | il av OP50 kulturen på mitten av en oympade NGM plattan och låt de ympade plattorna torka vid rumstemperatur över natten.

11) Ägg i Worm-analys

  1. Pick 15-20 iscensatt-L4 C. elegans (Figur 1) på mitten av en matta av bakterier på en förberedd BHI-Strep-E. faecalis plattan. Var noga med att inte överföra en hel del OP50 till BHI plattan. Plocka samma antal L4s med en kontroll NGM-OP50 platta.
  2. Inkubera plattorna under 40 timmar vid 20 ° C.
  3. Förbered 20% blekmedel. Blanda en kommersiellt blekmedel (6,0% natriumhypoklorit) med lämplig mängd destillerat vatten.
  4. Tillsätt 10 l droppar blekmedel lösning på tio olika platser på ett plastlock (av en mask eller bakteriell platta).
  5. Med hjälp av en mask plocka, överför en mask i varje blekmedel droppe. Snurra försiktigt spetsplocka i blekmedel droppen för att se till att masken har tvättat bort i slutet av plockningen (bekräfta genom att titta droppen under ett dissekera mikroskop).
  6. Låt nagelband att upplösas i ca 10 min eller tills maskarna öppnat, utvisa ägg (Figur 2). Var noga med att inte överföra ägg från plattan.
  7. Med hjälp av en dissekera mikroskop, räkna äggen i varje droppe av blekmedel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denna analys gör det möjligt att kvantifiera antalet kvarhållna ägg inom C. elegans efter exponering för E. faecalis. L4 iscensatt maskar (kännetecknas av transparent öppet utrymme ovanför deras vulva, figur 1) exponerades för E. faecalis genom vuxenlivet. Efter fyrtio timmars exponering för E. faecalis, var blekning utförs. Eftersom nagelband desintegrerade i blekmedel droppen blev äggen tydligare (figur 2). Antalet balanserade ägg var lätt kvantifieras genom räkning samtidigt tittar under dissekera mikroskop.

Fler ägg behölls i närvaro av E. faecalis testade stammar, jämfört med E. coli OP50 kontroller (Figur 3). Det finns en viss variation i verkan av varje en stam av E. faecalis om enskilda maskar, sett från felstaplarna. Men effekten av stammar av E. faecalis på ägg lagring inomen population av maskar varierar betydligt från kontrollerna. Graden av ägget behålla framkallas av olika stammar av E. faecalis testade kan också variera. Detta varierade effekten kan bero på uttryck av olika virulensfaktorer i varje stam.

Figur 1
Figur 1. Identifiera L4 staged C. elegans. A. L4 steg C. elegans larver är den största larver närvarande på plattor-bara något kortare än vuxna maskar. L4s är tunnare än vuxna också, på grund av avsaknaden av balanserade ägg (som gör vuxna maskar något bredare). B. Efter att ha identifierat de larver som är något kortare än vuxna, L4-iscensatt C. elegans identifieras vidare genom den lättare halvmåne plats ligger imitt i sin kropp (svarta pilspetsar). Denna fläck syns i mindre larver (L2 och L3 steg), men är frånvarande i den vuxna. Alla bilder är tagna av maskar på NGM plattor, med en kamera monterad på en dissekera mikroskop (40X och 50X förstoring för A respektive B). Klicka här för att se större bild .

Figur 2
Figur 2. Blekmedelslösning upplöser C. elegans nagelband över tiden. En stegvis vuxna masken placeras i en droppe av blekmedel lösning (A). Över fem till tio minuter, börjar nagelband av masken för att upplösa (BF). Som de flesta av nagelband är upplöst, äggen blir synliga (F svarta pilar). Fettdepåer inne i masken als o långsamt smälta i blekmedel, och förbli synliga (F, grå pilar). Alla bilder är tagna av maskar på NGM plattor, med en kamera monterad på en dissekera mikroskop (40X). Klicka här för att se större bild .

Figur 3
Figur 3. Vissa E. faecalis stammar orsakar ökad ägg kvarhållande efter 40 timmars exponering. Worms exponerade för två av de sex E. faecalis-stammar (orange streck) visade en ökad nivå av ägg lagring jämfört med maskar matade E. coli (OP50) kontrollstam (blå staplar). Tio maskarna matades varje bakteriestam i varje försök. Försök gjordes i tre exemplar på olika dagar. * Indikerar p <0,05 (Students t-test)."> Klicka här för att se större bild.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De mest kritiska stegen i framgångsrikt utföra denna analys är följande: 1) med användning av väl-matade lager av C. elegans, 2) odling enstaka typer av bakterier på assayplattan, 3) korrekt identifiera iscensatt L4 maskar för exponering för E. faecalis, 4) att hålla exponeringstiden till E. faecalis genomgående i alla studier och 5) blekning tiden bör inte överstiga tio minuter för att förhindra ägget sönderfall.

För denna analys är det viktigt att plocka friska, välnärda maskar. Mödra svält kan påverka fruktsamhet och tillväxt av avkomman 19,20, därför är det viktigt att maskarna väl har matats i flera generationer innan du utför denna analys. En välnärda lager av maskar är lättskött genom att helt enkelt överföra några vuxna maskar till en ny seedade NGM plattan var 2-3 dagar. Två dagar före analysen, bör vuxna maskar placeras på en ny gräsmatta på OP50 för att ha tillräckligt med L4 avkomma tillgängliga för analysen.

<p class = "jove_content"> Det är också viktigt att EIW analysen plattor främja tillväxten av en enda typ av bakterier. E. faecalis stammar odlades på BHI plattor. Streptomycin sattes till plattorna för att selektera mot E. coli OP50, som överförs med L4 maskar som de överförs från plattor underhåll NGM till analysen plattor. OP50 växer också på BHI plattor. Om inte vald mot, C. elegans skulle livnära sig på två typer av bakterier (E. coli och E. faecalis) medan på BHI plattorna. De stammar av E. faecalis användes i denna analys är resistenta mot streptomycin. Om olika typer av bakterier användes för denna analys, ett annat antibiotikum, och kanske olika odlingsmedier, bör användas för att välja för bakterierna av val och mot E. coli OP50.

Noggrant val staged maskar för denna analys är avgörande för flera skäl. Först är det viktigt att räkna ägg lagring under t han tid för äggproduktion / lägga i självbefruktande C. elegans. Äggproduktion sker endast under de första fem dagarna i C. elegans vuxenlivet (topp runt 40 timmar efter L4) och snabbt minskar därefter 4,21. Vuxna maskar lever i genomsnitt två till tre veckor, så många vuxna maskar lever i minst en vecka utan att producera befruktade ägg. Därför är det viktigt att se till att EIW testet inte utförs på unstaged vuxna maskar av okänd ålder.

Det andra skälet är det viktigt att använda iscensatt djur i EIW-analysen är så att tiden i utvecklingen då maskar har utsatts för bakterierna, är gift eller drog hårt kontrollerad. Kulturer av C. elegans typiskt synkroniserade på ägget, L1 eller L4-stadier. Den L4 stadiet användes för denna analys på grund av oro för att längre exponering för E. faecalis skulle resultera i dödlighet före maskar blev dräktiga vuxna.

tält "> är hur lång tid maskar kvar i blekmedel är också viktigt att bevaka. Worms ska normalt lösas in under tio minuter, men den här gången varierar från mask till mask. Befruktade ägg småningom löses av blekmedel, men processen är långsammare än för nagelband på grund av närvaron av en skyddande äggskal. äggskalet kommer att börja upplösas genom blekmedlet om de lämnas i lösningen under längre än 10 till 15 min.

Egg behålla återspeglar balansen mellan äggproduktion och äggläggning. Den EIW analysen enbart skiljer inte om antalet ägg kvar i livmodern beror på förändringar i äggproduktion eller äggläggning. Detta är speciellt ett problem om maskar som behandlats med en bakteriestam eller toxin behåller färre ägg än de i kontrollgruppen. I dessa fall bör i synnerhet en uppföljande yngel storlek analys göras. Brood storlek analyser kvantifiera antalet ägg som under masken reproduktiva livstid 4 E. faecalis skulle agera för att öka äggproduktionen, är det rimligt att anta att en ökning av ägg behålla efter exponering för E. faecalis (som visas i figur 3) är ett resultat av minskad äggläggning beteende.

Den EIW analysen dessutom inte bestämma mekanismen genom vilken bakterier kan förändra ägg retention. Det är möjligt att C. elegans får behålla ägg eftersom de patogena bakterier påverkar matning genom kolonisera in och blockerar mynningen eller för att det är en dålig födokälla. Det är också möjligt att bakterierna kan kolonisera och blockera vulva öppningen, eller påverkar funktionen av cellerna i äggläggning systemet. Ytterligare analys krävs för att fastställa den mekanism genom which ägg lagring förändras.

Denna EIW analys kan lätt modifieras för att bestämma effekterna av många olika typer av föreningar på ägg retention. Dessutom är denna analys enkel nog att det skulle kunna införlivas i en skärm för att identifiera gener, i antingen värd (C. elegans) eller patogen (E. faecalis), som krävs för effekten av patogenen. Den EIW analysen kan också användas för att screena för gener som krävs för att reglera äggläggande själv. C. elegans äggläggning beteende moduleras av signalsubstanser som serotonin och acetylkolin 5-9, och kräver samordnade aktiviteten av flera nervceller och muskelgrupper 12. EIW analyser har varit och fortsätter att användas för att identifiera gener som är viktiga för signalsubstansen signalering och / eller muskelaktivitet. EIW analyser ger en kvantitativ snarare än kvalitativ, analys av ett viktigt C. elegans beteende.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.

Acknowledgments

Författarna vill tacka juni Middleton för tillförsel E. faecalis-stammar och för vägledning med bakteriekultur. C. elegans lämnades av CGC, som finansieras av NIH Office of Programs forskningsinfrastruktur (P40 OD010440).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agar, ultrapure Affymetrix 10906
Bacto Peptone Becton Dickinson 211677
Bacto Tryptone Becton Dickinson 211705
Brain Heart Infusion dehydrated medium Carolina Biological Supply 781781
C. elegans, N2 strain Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
Cholesterol Alfa Aesar A11470
Culture plates for C. elegans Tritech Research Inc. T3308
Culture plates for E. faecalis Fisher Scientific-Fisherbrand 875713
E. coli (OP50) Caenorhabditis Genetics Center http://www.cbs.umn.edu/cgc
E. faecalis strains provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci
by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;

all strains grew at 44.5 ºC and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars (arabinose, mannitol, methyl-α-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed presumptive identification of all E. faecalis strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).

Microscope Motic SMZ 168B any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient
Streptomycin sulfate Fisher BioReagents BP910-50
Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco Becton Dickinson 236950
Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL Becton Dickinson 211768
Yeast extract Acros 61180-1000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans. Science. 216, 1012-1014 (1982).
  2. Sawin, E. R. Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1996).
  3. Trent, C. Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]. Massachusetts Institute of Technology. Cambridge, MA. (1982).
  4. Chase, D. L., Koelle, M. R. Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans. Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).
  5. Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans. Genetics. 104, 619-647 (1983).
  6. Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans. J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).
  7. Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans. Neuron. 21, 203-214 (1998).
  8. Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).
  9. Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior. Genetics. 169, 1425-1436 (2005).
  10. Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology. Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).
  11. Mylonakis, E., Aballay, A. Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions. Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).
  12. Schafer, W. R. WormBook. WormBook. (2005).
  13. White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).
  14. Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons. Nature. 336, 638-646 (1988).
  15. Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).
  16. Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).
  17. O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis. Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).
  18. Brenner, S. Genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  19. Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments. BMC Evol. Biol. 8, 15 (2008).
  20. Harvey, S. C., Orbidans, H. E. All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 6, e25840 (2011).
  21. Klass MR, Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).
Mätning av effekterna av bakterier på<em&gt; C. Elegans</em&gt; Beteende användning av en analys Egg Retention
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).More

Gardner, M., Rosell, M., Myers, E. M. Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay. J. Vis. Exp. (80), e51203, doi:10.3791/51203 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter